汪先桃 劉靜（通訊作者）

（1成都市龍泉驛區(qū)第一人民醫(yī)院 四川 成都 610100）

（2四川大學(xué)華西醫(yī)院龍泉醫(yī)院 四川 成都 610100）

假肥大型營養(yǎng)不良主要包括了兩種不同病癥疾?。篋uchenne型肌營養(yǎng)不良、Becker型肌營養(yǎng)不良。DMD基因作為人體的機(jī)體內(nèi)部最大基因之一，而DMD/BMD患者的變異類型，絕大多數(shù)都是外顯子組的水平重復(fù)及缺失[1]。對此對假肥大型肌營養(yǎng)不良分子診斷尤為重要，本次研究探討分析高通量檢測技術(shù)對假肥大型肌營養(yǎng)不良分子診斷結(jié)果。現(xiàn)報(bào)道如下。

1.資料與方法

1.1 一般資料

通過選取2017年1月至2018年4月期間的100例臨床診斷，疑似為假肥大型肌營養(yǎng)不良患者，所有患者均為男性，采集自愿參與本次研究的患者及其家屬（母親）2ml外周血EDTA抗凝，置于4℃保存待檢。使用核酸抽提試劑盒檢測，經(jīng)瓊脂糖凝膠電泳以及紫外分光光度法完成檢測質(zhì)量，治療質(zhì)量均符合實(shí)驗(yàn)需求，且相關(guān)研究參與患者及其家屬均簽署知情同意書。

1.2 方法

通過借助CNV plex（高通量）檢測技術(shù)，采用CNV plex試劑盒連接反應(yīng)連接產(chǎn)物多重?zé)晒釶CR擴(kuò)增，所擴(kuò)增的產(chǎn)物熒光毛細(xì)管電泳分離，均參照試劑盒的相關(guān)說明書。PCR擴(kuò)增產(chǎn)物通過借助ABI313OXL（美國ABI公司）完成毛細(xì)管電泳，進(jìn)而對樣本DMD基因區(qū)域內(nèi)的拷貝數(shù)完成確定分析，針對致病誘因拷貝數(shù)變異研究，并且借助靶向獲得及高通量檢測技術(shù)的測序，完成致病基因單核苷酸的細(xì)胞水平變異檢測，實(shí)現(xiàn)精準(zhǔn)分子診斷。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

本文數(shù)據(jù)利用SPSS 20.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件分析和處理，計(jì)數(shù)資料利用（%）表示，檢驗(yàn)通過χ2，數(shù)據(jù)差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義為P＜0.05。

2.結(jié)果

經(jīng)研究發(fā)現(xiàn)高通量檢測技術(shù)，監(jiān)測發(fā)現(xiàn)其中85例患者，都存在假肥大型營養(yǎng)不良分子基因致病變異，其中主要包括了60例（60.00%）不同大小外顯子缺失重復(fù)，8（0.08%）例單核苷酸水平小缺失及重復(fù)情況，7（0.07%）例無義變異，以及分別2（0.02%）例剪接位點(diǎn)變異、錯(cuò)義變異情況。在研究中通過針對母親血樣的家系患者展開致病變異驗(yàn)證，發(fā)現(xiàn)其中有5名患者的母親均為先證者等同變異的雜合攜帶者。

3.討論

假肥大型營養(yǎng)不良作為臨床中較為常見的累及骨骼肌的神經(jīng)肌肉疾病，DMD患者整體疾病發(fā)展較為迅速，超出3歲左右無法出現(xiàn)獨(dú)立行走及依靠輪椅代步，通常死于心肌病及呼吸道并發(fā)癥，壽命通常在20歲以內(nèi)[2]。BMD患者整體疾病發(fā)展相對較輕，且病情發(fā)展也較為遲緩。對此類疾病實(shí)現(xiàn)分子診斷，不僅能夠有利于早期診斷疾病，作為臨床中對家屬炎癥是否遺傳的有力驗(yàn)證證據(jù)。DMD基因所致的病性變異，主要是針對橫紋肌組織中的抗肌萎縮蛋白，最終致使近端骨骼肌進(jìn)行性萎縮無力，以及腓腸肌代償性肥大。FastTarget技術(shù)針對性區(qū)域設(shè)計(jì)多重PCR擴(kuò)增體系，針對多重研究者感興趣基因組區(qū)域性富集，以及實(shí)現(xiàn)高通量測序，達(dá)到了相對較為成熟的測量方法[3]。

相較于Sanger測序法檢測更加簡便、操作、快速，等同于高通量測序建庫方法，更加簡便省略了建庫這一復(fù)雜化檢測過程。在本次研究中出現(xiàn)8（0.08%）例單核苷酸水平小缺失及重復(fù)情況，7（0.07%）例無義變異，均由于出現(xiàn)終止密碼異常編碼，因而所致的截短蛋白，最終引發(fā)DMD病發(fā)。在臨床中Monaco等研究者，基于DMD基因假說，提出認(rèn)為臨床癥狀嚴(yán)重的DMD患者，絕大多數(shù)都是框外突變所致使，整體癥狀較輕的BMD患者，則主要是由于并未影響閱讀框的狂外突變遵循閱讀框原則。在本次研究中發(fā)現(xiàn)有10例框內(nèi)突變患者，在后期均經(jīng)臨床確診為BMD。經(jīng)本次研究發(fā)現(xiàn)其中85例患者，都存在假肥大型營養(yǎng)不良分子基因致病變異，其中主要包括了60例（60.00%）不同大小外顯子缺失重復(fù)，8（0.08%）例單核苷酸水平小缺失及重復(fù)情況，7（0.07%）例無義變異，以及分別2（0.02%）例剪接位點(diǎn)變異、錯(cuò)義變異情況。且其中有5名患者的母親均為先證者等同變異的雜合攜帶者。與臨床研究結(jié)果相符，證實(shí)了高通量檢測技術(shù)對假肥大型營養(yǎng)不良因子的檢測診斷可靠性。在臨床中針對假肥大型營養(yǎng)不良最為傳統(tǒng)的臨床治療方法，就是借助糖皮質(zhì)激素配合康復(fù)理療加以治療，不僅能夠?qū)颊叩募×凹∪夤δ苤鸩剿ネ饲闆r加以延緩，同時(shí)還能夠引發(fā)更多不良反應(yīng)出現(xiàn)。對此可以借助近些年的新型DMD/BMD治療方法，且經(jīng)德州大學(xué)的最新臨床研究，借助老鼠模型發(fā)現(xiàn)此種治療方法，為假肥大型營養(yǎng)不良的治療提供新思路。

綜上所述，通過對假肥大型肌營養(yǎng)不良因素進(jìn)行臨床診斷，具有極為重要的臨床確診意義，借助高通量監(jiān)測技術(shù)能夠?qū)崿F(xiàn)對不同類型致病基因變異完成檢測，達(dá)到對患者及時(shí)確診的臨床診斷意義。