馬克信，韓振蘊，張韓瑜嘉，馬大勇，蘇 芮，張裴姝

（1.中國中醫(yī)科學(xué)院眼科醫(yī)院，北京 100040；2.北京中醫(yī)藥大學(xué)，北京 100029；3.北京中醫(yī)藥大學(xué)東直門醫(yī)院，北京 100070；4.中國中醫(yī)科學(xué)院臨床基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)研究所，北京 100070；5.北京中醫(yī)藥大學(xué)東方醫(yī)院，北京 100078）

血管性癡呆（vascular dementia，VD）是指各種腦血管疾病引起的大腦功能障礙而產(chǎn)生的一種慢性進行性獲得性認知功能損害綜合癥[1]。VD是繼阿爾茨海默病后位列第二的老年期癡呆的常見病因[2]。VD的發(fā)病機制與腦血管病的病灶波及額葉、顳葉皮層以及邊緣系統(tǒng)有關(guān)。隨著醫(yī)療衛(wèi)生條件的改善及人口結(jié)構(gòu)老齡化日益嚴重，世界范圍內(nèi)VD發(fā)病率日益增高[3-4]；我國65歲以上的老年人癡呆的發(fā)病率為0.039%，其中血管性癡呆占68.5%居首位[5]，腦卒中生還者中約1/3患有VD[6]。VD不但嚴重影響患者的生活質(zhì)量，還給其家庭、社會帶來了沉重的負擔(dān)，因而尋找有效治療VD的藥物已刻不容緩。近年來，腦血流量及代謝機制成為VD領(lǐng)域研究熱點[7]。既往研究[8]表明，在低灌注狀態(tài)及低代謝狀態(tài)下認知功能可發(fā)生減退，筆者前期研究[9-10]也發(fā)現(xiàn)參知健腦膠囊能改善擬VD動物模型的學(xué)習(xí)記憶功能。因而，本研究通過觀察參知健腦膠囊對低灌注大鼠腦局部血流（regional Cerebral Blood Flow，rCBF）的影響，探討其對血管性癡呆的治療作用機制。

1 實驗材料

1.1 藥物 參知健腦膠囊，實驗用其中試產(chǎn)品（不含賦形劑），由北京中醫(yī)藥大學(xué)中藥學(xué)院生產(chǎn)，批號：20110901；金納多（銀杏葉提取物片）40 mg/片，德國威瑪舒培博士藥廠生產(chǎn)，批號：1650711。

1.2 動物 成年SD大鼠60只，雌、雄各半，體質(zhì)量200～250 g，由斯貝福（北京）實驗動物科技有限公司提供，合格證號：SCXK（京）2011～0004。在中國中醫(yī)科學(xué)院西苑醫(yī)院實驗室動物房分籠喂養(yǎng)，每籠5只，每天給予標準飼料，清潔自來水自由飲用。動物房環(huán)境溫度 22～24 ℃，相對濕度約70%，適應(yīng)性飼養(yǎng) 1 周后進行實驗。

1.3 儀器 PeriFlux System 5000激光多普勒血流儀，瑞典Premed公司；FM3545微型電鉆，美國FOREDOM公司。

2 實驗方法

2.1 造模方法 借鑒de la Torre JC 等創(chuàng)立的雙側(cè)頸總動脈永久結(jié)扎法（two vessel occlusion，2VO）[11]構(gòu)建模型。將大鼠用4%水合氯醛，以1 mL/100 g體質(zhì)量麻醉后，仰臥固定在手術(shù)臺上，常規(guī)消毒，頸正中切口，分離雙側(cè)頸總動脈，穿絲線備用。切開大鼠頭頂部皮膚，于囟門后2 mm、右5 mm處電鉆磨薄顱骨，泰樂膠將單光纖探頭粘于頭骨上。仰臥位于泡沫板上，光纖接418-1探頭，連接于Perimed激光多普勒血流測定儀記錄rCBF。切開氣管，插管，接呼吸機，通入醫(yī)用氧氣和異氟烷，維持麻醉深度穩(wěn)定。rCBF穩(wěn)定10 min后，結(jié)扎雙側(cè)頸總動脈，造成腦缺氧。缺氧10 min后十二指腸注射受試藥物，連續(xù)記錄120 min。整個操作過程使大鼠肛溫保持37℃左右，防止低溫的腦保護作用。術(shù)后死亡的大鼠被剔除本研究，并補足相應(yīng)的大鼠數(shù)目。

2.2 分組及給藥 將60只大鼠隨機分為6組，分別為假手術(shù)組、模型組、金納多組、參知健腦膠囊低、中、高組；每組10只，雌、雄各半。除假手術(shù)組、模型組給予等體積（5 mL/kg）生理鹽水外，其余各組分別給予金納多20 mg/kg和參知健腦膠囊40、120、360 mg/kg。

3 實驗結(jié)果

假手術(shù)組大鼠不結(jié)扎頸總動脈，腦血流量基本保持不變。2VO大鼠腦血流量急劇下降，幅度為55%～65%，與假手術(shù)組比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.01），并于造模后120 min內(nèi)持續(xù)下降，在給藥后30、60、90、120 min觀測時點，rCBF值與假手術(shù)組比較差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05， P＜0.01）。給藥后，對照藥金納多組大鼠rCBF的下降受到抑制，給藥后30、60、90、120 min時與模型組比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義（均P＜0.01）；參知健腦3個劑量組給藥后30、60、90、120 min時與模型組比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05，P＜0.01），與對照藥金納多相比差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。結(jié)果見表1（插頁一）。

表1 對大鼠rCBF的影響（ ，n = 10）

表1 對大鼠rCBF的影響（ ，n = 10）

注：與假手術(shù)組相比較， # P＜0.05，## P＜0.01；與模型組相比較，△P＜0.05，△△P＜0.01

rCBF下降幅度 /%缺血前 缺血后 30 min 60 min 90 min 120 min假手術(shù)組 0 2.89±12.48 -6.08±6.58 -10.17±12.86 -13.51±15.22 -14.20±16.30模型組 0 -64.07±10.04## -14.86±10.91# -36.91±12.43## -47.38±15.56## -59.41±15.04##金納多組 20 0 -61.84±10.98## -7.24±21.72 -8.13±28.15△△ -11.61±29.72△△ -12.85±31.05△△參知健腦低劑量組 40 0 -54.45±9.05## 0.95±24.90 3.33±31.30△△ -2.17±41.31△△ -7.06±39.65△△參知健腦中劑量組 120 0 -60.02±7.51## 0.55±10.26△△ -12.44±19.54△△ -24.87±23.09△ -31.80±25.30△△參知健腦高劑量組 360 0 -54.50±9.22## -6.70±11.57 -16.24±18.08△△ -23.90±23.48△ -29.76±24.31△△組 別 劑量/（mg/kg）

4 討論

近年來，腦血流慢性持續(xù)性下降在 VD 發(fā)病機制中的作用逐漸受到關(guān)注，rCBF的改變能反應(yīng)腦代謝的變化，而后者與腦功能緊密相關(guān)，因此，腦血流及代謝是評價腦功能的理想指標。研究發(fā)現(xiàn)，VD 的癡呆程度與腦血流量和代謝率下降呈正相關(guān)，即腦血流灌注下降越低，認知功能障礙越明顯，提示腦血流量儲備功能降低是 VD 發(fā)生的主要原因[12]，因而改善腦灌注，特別是與記憶功能相關(guān)的關(guān)鍵部位的腦灌注對改善VD動物認知功能有重要作用。本實驗通過2VO法建立大鼠低灌注模型，并不能模擬VD慢性認知功能缺失狀態(tài)，本研究選用該模型主要用以模擬低灌注VD大鼠的缺血狀態(tài)。但SD大鼠具有完整的 Willis 環(huán)，完全結(jié)扎雙側(cè)頸總動脈后可以通過側(cè)支循環(huán)代償，造成穩(wěn)定的不完全性前腦缺血，腦的幕上部分血流優(yōu)先減少，腦干灌注良好，因而，能更接近腦灌注不足的狀態(tài)，還可維持大鼠生命中樞的基本功能[13]。

參知健腦膠囊是基于王永炎院士等[14-16]提出的“正虛毒損腦絡(luò)”的血管性癡呆病因病機理論基礎(chǔ)上研發(fā)而來的。該方組方精當(dāng)，由人參、知母、赤芍的提取物按一定比例優(yōu)化配伍而成[17]，具有扶正、通絡(luò)、祛毒的功效。金納多（銀杏葉提取物片）具有抑制血小板聚集、黏附，降低血液黏度，改善腦血液循環(huán)，增加缺血區(qū)的血流灌注，使腦組織氧和營養(yǎng)物質(zhì)增加的作用[18]；系統(tǒng)評價顯示[19]銀杏葉提取物治療VD可能優(yōu)于常規(guī)內(nèi)科基礎(chǔ)療法、GABA類藥物及丹參制劑。VD作為目前唯一可防治的癡呆類型[20]，早期預(yù)防和改善中樞供血治療是實現(xiàn)VD可逆的途徑之一。本研究選取金納多作為陽性對照，旨在從血液循環(huán)等角度對比研究參知健腦膠囊可能的作用機制。本團隊前期研究已證實參知健腦膠囊能改善低灌注癡呆大鼠的認知功能，其療效優(yōu)于金納多。本研究表明，參知健腦膠囊在給藥后30～120 min可明顯抑制腦缺血大鼠rCBF的下降，治療作用與金納多相似，提示參知健腦膠囊治療VD可能與其改善腦部缺血狀態(tài)有關(guān)。

[1]Sorrentino G, Migliaccio R, Bonavita V. Treatment of vascular dementia: the route of prevention [J]. European Neurology,2008, 60(5):217-223.

[2]Amar KA, Wilcock GK. Vascular dementia[J]. Neurology,1995, 45(7):1423-1424.

[3] Ginsberg Myron D. Neuroprotection for ischemic stroke: past,present and future [J]. Neuropharmacology, 2008, 55(3):363-389.

[4] Mehta Suresh L, Manhas Namratta, Raghubir Ram. Molecular targets in cerebral ischemia for developing novel therapeutics [J].Brain Research Reviews, 2007, 54(1):34-66.

[5]黃瑋.血管性癡呆的發(fā)病機制研究進展[J]. 中國醫(yī)藥指南,2012,10(5):62-64.

[6]中華醫(yī)學(xué)會神經(jīng)病學(xué)分會.中國缺血性腦卒中和短暫性腦缺血發(fā)作二級預(yù)防指南（2010）[J].中國臨床醫(yī)生, 2011,39(11):68-74.

[7]方珉,劉學(xué)源.血管性認知功能障礙及其早期識別與干預(yù)的研究進展[J].上海醫(yī)藥, 2016, 37(15):5-11.

[8] Masaki Ueno, Hidekazu Tomimoto, Ichiro Akiguchi , et al.Blood - brain barrier disruption in white matter lesions in a rat model of chronic cerebral hypoperfusion[J] . Journal of cerebral blood flow and metabolism: official journal of the International Society of Cerebral Blood Flow and Metabolism,2002, 22(1):97-104.

[9]馬大勇,韓振蘊,范吉平,等.參知健腦膠囊對記憶障礙小鼠模型行為學(xué)的影響[J].中國醫(yī)藥導(dǎo)報, 2012, 9(7):32-34.

[10]馬克信,韓振蘊,馬大勇,等.參知健腦膠囊對擬血管性癡呆大鼠模型皮層和海馬中Glu和GABA的影響[J].遼寧中醫(yī)雜志, 2016, 43(11):2421-2424

[11]J C de la Torre, T Fortin, G A Park, et al. Chronic cerebrovascular insufficiency induces dementia - like deficits in aged rats[J]. Brain research, 1992, 582(2):186-195.

[12] Cao X, Guo Q, Zhao Q, et al. The neuropsychological characteristics and regional cerebral blood flow of vascular cognitive impairment-no dementia[J]. Int J Geriatr Psychiatry, 2010, 25(11):1168-1176.

[13]孫莉,金濤,丁艷華,等.慢性前腦缺血致癡呆大鼠腦血流量及行為學(xué)對比研究[J].中國老年學(xué), 2009, 29(8):920-922.

[14]楊傲然,田昕,鐘華,等.參知健腦片有效組分的最佳配伍篩選[J].中華中醫(yī)藥學(xué)刊, 2009, 27(12):2600-2602.

[15] 王永炎.關(guān)于提高腦血管疾病療效難點的思考[J].中國中西醫(yī)結(jié)合雜志, 1997, 17(4):195-196.

[16]唐啟盛.“濁毒痹阻腦絡(luò)”對老年期癡呆的影響[J].北京中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報, 1997, 20(6):24-25.

[17]李澎濤,王永炎,黃啟福.“毒損腦絡(luò)”病機假說的形成及其理論與實踐意義[J].北京中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報, 2001,24(1):1-6,16.

[18] 姚細蕊. 銀杏葉提取物治療血管性癡呆的療效觀察[J]. 山西醫(yī)藥雜志, 2012, 41(9):928-929.

[19] 胡泉,涂翔,張嬿,等. 銀杏葉提取物治療血管性癡呆的系統(tǒng)評價[J].遼寧中醫(yī)雜志, 2013, 41(4):683-686.

[20]Gorelick PB. Status of risk factors for dementia associated with stroke [J]. Stroke, 1977, 28(2): 459-463.