鄧 文， 張世昌， 蔡榮斌， 任時成， 周小娟

（1.河南省農(nóng)業(yè)科學(xué)院畜牧獸醫(yī)研究所，河南鄭州450002；2.河南雄峰科技股份有限公司，河南鄭州 450008；3.河南省動物衛(wèi)生監(jiān)督所，河南鄭州 450008）

仔豬的斷奶應(yīng)激除了可造成仔豬采食量減少、掉膘、腹瀉等，還會損傷仔豬體內(nèi)的免疫和腸道微生物體系，打破機體氧化還原平衡系統(tǒng)，自由基增加，抗氧化能力下降，導(dǎo)致氧化應(yīng)激的產(chǎn)生（Zhu等，2012）。同時，氧化應(yīng)激和腸道菌群失衡可導(dǎo)致腸細胞與組織的損傷，進而加劇斷奶仔豬腹瀉的程度（華朱鳴，2012）。

目前在預(yù)防仔豬腹瀉方面，使用抗生素和氧化鋅的負面效應(yīng)已經(jīng)逐漸被大家所熟知。其中，抗生素的耐藥性、食品安全問題，氧化鋅的環(huán)境污染和影響后期長勢和毛色等均成為社會關(guān)注的焦點。因此，尋求一種高效、環(huán)保、綠色的飼料添加劑已經(jīng)成為現(xiàn)代仔豬養(yǎng)殖的必然。目前，飼料行業(yè)中綠色安全且功效明確的飼料添加劑主要有酶制劑、酸化劑、植物提取物、中草藥添加劑、微生態(tài)制劑等（李瑞珍等，2011）。這些物質(zhì)在一定程度上均可以調(diào)節(jié)腸道菌群結(jié)構(gòu)，抑制有害菌的生長繁殖，促進營養(yǎng)物質(zhì)的消化吸收，提高動物機體免疫能力，緩解斷奶應(yīng)激的影響。

植物單寧是酚酸或其衍生物與葡萄糖或多元醇主要通過酯鍵形成的多酚，根據(jù)分子質(zhì)量大小可分為縮合單寧和水解單寧。分子質(zhì)量較大的縮合單寧通常被視為抗?fàn)I養(yǎng)因子，分子質(zhì)量較小的水解單寧則具有抗氧化、抗菌、抗炎等生物學(xué)功能（鄧奇風(fēng)和高鳳仙，2015）。水解單寧主要存在于栗樹中，有研究表明，栗樹水解單寧能改善肉雞和肉兔的生產(chǎn)性能，并可改善其抗氧化能力（Xiong等，2016；Liu等，2012）。但水解單寧作為飼料添加劑在斷奶仔豬中的應(yīng)用卻鮮有報道，為此，本試驗旨在研究日糧中添加水解單寧對斷奶仔豬生長性能、體內(nèi)抗氧化、腸道形態(tài)及腸道通透性的影響，為其在仔豬營養(yǎng)中的應(yīng)用提供科學(xué)依據(jù)和參考。

1 材料與方法

1.1 試驗材料 本試驗所使用的單寧由意大利SilvaTeam公司提供，該產(chǎn)品為從栗樹提取的水解單寧，水解單寧含量為干物質(zhì)的76.5%。

1.2 試驗設(shè)計與飼養(yǎng)管理 試驗選取160頭（25±1）日齡的“杜長大”斷奶仔豬，根據(jù)體重、性別、健康狀況等條件均衡分布為4組，每組4個重復(fù)，每個重復(fù)10頭仔豬。其中，A組為對照組，飼喂基礎(chǔ)日糧，B、C、D組為試驗組，分別在基礎(chǔ)日糧中添加500、1000、1500 mg/kg的水解單寧。飼養(yǎng)試驗在河南雄峰科技股份有限公司滎陽斯格豬場進行，試驗過渡期3 d，正式期25 d。其他按照該場正常的飼養(yǎng)管理和防疫流程進行。

1.3 試驗日糧 試驗日糧為玉米-豆粕型基礎(chǔ)飼糧，其各項營養(yǎng)指標(biāo)均可以滿足斷奶仔豬的營養(yǎng)需求（NRC，2012），基礎(chǔ)日糧組成及營養(yǎng)水平見表1。

表1 基礎(chǔ)日糧組成及營養(yǎng)水平（風(fēng)干基礎(chǔ)）

1.4 樣品采集與處理 在試驗期內(nèi)每天對豬的采食量、余料量、腹瀉情況進行收集及記錄。在試驗第25天，每個重復(fù)隨機選擇2頭仔豬，靜脈采血，分離血清，待測抗氧化指標(biāo)和腸道通透性指標(biāo)；每個重復(fù)選取1頭、每組共4頭仔豬（體重接近窩平均體重），共屠宰16頭仔豬，按照常規(guī)方法進行采樣，分別采集十二指腸、空腸、回腸腸段各2 cm。

1.5 測定指標(biāo)與方法

1.5.1 生長性能測定 每天記錄豬群的腹瀉情況，以重復(fù)為單位記錄豬群耗料量，在試驗開始和結(jié)束時分別早晨空腹稱重，計算平均日增重（ADG）、平均日采食量（ADFI）和料肉比（F/G），并計算腹瀉率。

腹瀉率/%=[試驗期內(nèi)腹瀉頭數(shù)/（試驗天數(shù)×試驗頭數(shù)）]×100。

1.5.2 腸道形態(tài)檢測 取腸道的十二指腸、空腸和回腸各2 cm左右，輕輕刮去腸道食糜，用生理鹽水沖洗干凈，然后用吸干紙吸取殘余水分，置于10%甲醛磷酸緩沖液中固定，然后經(jīng)過脫水-透明-浸臘-包埋-修塊等處理后，制成5 μm厚切片，用蘇木精-伊紅染色法染色。觀察測定絨毛高度（VH）、隱窩深度（CD），并計算絨隱比（VH/CD）。

1.5.3 血清抗氧化指標(biāo)和腸道通透性指標(biāo)測定平均每頭仔豬靜脈采血8 mL，迅速轉(zhuǎn)移至10 mL離心管中，室溫下傾斜靜置1 h后，3000 r/min離心15 min，分離血清，-20℃冰箱保存，待測血清抗氧化和腸道通透性指標(biāo)。其中，超氧化物歧化酶SOD）、谷胱甘肽還原酶（GSH）以及丙二醛（MDA）含量分別采用黃嘌呤氧化酶法、比色法、硫代巴比妥酸法測定；D-乳酸含量和二胺氧化酶 （DAO）用酶聯(lián)免疫吸附法測定，所用試劑盒購自南京建成生物工程研究所。

1.6 數(shù)據(jù)處理與分析 運用SPSS19.0統(tǒng)計軟件進行單因素方差分析和Duncan氏法多重比較；所有結(jié)果均以“平均值±標(biāo)準(zhǔn)誤”來表示，P＜0.05表示差異顯著。

2 結(jié)果與分析

2.1 栗樹單寧對斷奶仔豬生長性能和腹瀉率的影響 由表2可知，與對照組相比，試驗C組在平均日增重、料肉比和腹瀉率方面均有顯著改善（P＜0.05），平均日增重提高了22.39%、料肉比和腹瀉率分別降低了15%和54.06%；試驗D組與對照組相比腹瀉率降低了47.21%（P＜0.05）；試驗B組與對照組相比差異不顯著 （P＞0.05）；各組平均日采食量差異也不顯著（P＞0.05）。

表2 日糧中添加栗樹單寧對斷奶仔豬生長性能和腹瀉率的影響

2.2 栗樹單寧對斷奶仔豬腸道形態(tài)的影響 由表3可知，對于絨毛高度，與對照組相比，試驗C組十二指腸和D組空腸分別提高了8.36%和13.51%（P＜0.05）；對于隱窩深度，與對照組相比，試驗C組回腸顯著降低14.21%（P＜0.05）；對于絨隱比，與對照組相比，試驗C組回腸和D組空腸分別提高了27.52%和26.59%（P＜0.05）。

2.3 栗樹單寧對斷奶仔豬腸道通透性的影響由表4可知，試驗C和D組的血清D-乳酸與對照組相比顯著降低（P＜0.05）；對于血清DAO水平，試驗D組顯著低于對照組（P＜0.05）。

表4 日糧中添加栗樹單寧對斷奶仔豬腸道通透性的影響

2.4 栗樹單寧對斷奶仔豬抗氧化性能的影響由表5可知，與對照組相比，試驗B和C組的SOD水平顯著提高（P＜0.05），分別提升了9.44%和14.04%；試驗C和D組的MDA含量顯著降低（P＜0.05），分別降低了 26.95%和 32.03%；在GSH方面，各組差異不顯著（P＞0.05）。

表5 日糧中添加栗樹單寧對斷奶仔豬抗氧化性能的影響

3 討論

3.1 栗樹單寧對斷奶仔豬生長性能和腹瀉率的影響 仔豬斷奶后產(chǎn)生的斷奶應(yīng)激綜合征通常會導(dǎo)致斷奶仔豬腹瀉、采食量下降和生長緩慢等常見問題。安文亭等（2014）研究單寧酸對仔豬生產(chǎn)性能的影響發(fā)現(xiàn)，日糧中添加單寧酸可以提高仔豬生長速度，改善飼料報酬，促進仔豬對日糧粗纖維、鈣磷的消化吸收，還能改善仔豬消化道微生態(tài)環(huán)境，抑制大腸桿菌生長繁殖，降低仔豬腹瀉和死淘率。與上述研究類似，本研究也發(fā)現(xiàn)日糧中添加栗樹水解單寧可提高斷奶仔豬的生產(chǎn)性能，降低腹瀉率。栗樹水解單寧作為植物單寧的一種，屬于多酚類物質(zhì)。研究表明，植物多酚具有抗氧化、抑菌、抗炎等功效，從而能提高動物的生產(chǎn)性能（王妍君等，2011）。本研究中，栗樹水解單寧對斷奶仔豬生產(chǎn)性能和腹瀉的改善可能與其抗氧化功能及對腸道健康的改善相關(guān)。

3.2 栗樹單寧對斷奶仔豬腸道形態(tài)的影響 腸道形態(tài)的變化是動物應(yīng)激反應(yīng)的重要敏感指標(biāo)之一。仔豬斷奶會對其腸道完整性產(chǎn)生較大損傷，腸道絨毛萎縮、隱窩深度增加，絨隱比降低（任曼等，2014；Hampson，1986）。 本研究發(fā)現(xiàn)日糧中添加栗樹水解單寧能改善仔豬斷奶應(yīng)激時腸道絨毛形態(tài)的損傷。與此研究結(jié)果相似的是其他植物多酚如茶多酚也能改善斷奶仔豬的腸道絨毛形態(tài)（李永義等，2011）。 Zhu 等（2012）的研究發(fā)現(xiàn)，斷奶應(yīng)激時仔豬腸道絨毛的形態(tài)損傷可能與氧化應(yīng)激相關(guān)，氧化應(yīng)激產(chǎn)生的自由基可誘發(fā)腸道上皮細胞損傷，因此，栗樹水解單寧對斷奶仔豬腸道形態(tài)的保護可能與其抗氧化能力有關(guān)，能降低斷奶時腸道的氧化應(yīng)激，減少自由基對上皮細胞的損傷。另外，仔豬斷奶時腸道微生物區(qū)系發(fā)生紊亂，有害微生物大量增殖產(chǎn)生的毒素也能造成腸道絨毛損傷。植物多酚被證實能抑制有害微生物的繁殖，調(diào)節(jié)腸道微生物區(qū)系（王妍君等，2011），這也可能是栗樹水解單寧改善腸道形態(tài)損傷的另一途徑。而且，腸道絨毛高度的增加會提高營養(yǎng)物質(zhì)的吸收面積，有利于改善生產(chǎn)性能，這與栗樹單寧對斷奶仔豬生產(chǎn)性能的改善相一致。

表3 日糧中添加栗樹單寧對斷奶仔豬腸道形態(tài)的影響

3.3 栗樹單寧對斷奶仔豬腸道通透性的影響腸道屏障功能的完整是腸道運轉(zhuǎn)正常的基礎(chǔ)，當(dāng)腸道屏障受到損傷時會使其通透性增加，而斷奶應(yīng)激往往會造成仔豬腸道受損、菌群失調(diào)、免疫屏障下降，進而增大腸道的通透性。研究發(fā)現(xiàn)，95%以上的血清二胺氧化酶（DAO）存在于動物小腸的黏膜或纖毛上皮細胞中，當(dāng)小腸黏膜屏障受損時，腸黏膜細胞脫落入腸腔，DAO進入腸細胞間隙淋巴管和血流，導(dǎo)致血DAO升高；另外，D-乳酸是腸道多種細菌代謝和裂解的產(chǎn)物，正常情況下其在血中水平很低，當(dāng)腸道通透性異常升高時，腸道細菌產(chǎn)生的大量D-乳酸穿過腸黏膜進入血液循環(huán)。因此血DAO活性和D-乳酸均可反映腸道應(yīng)激受損情況 （胡紅蓮和高明，2012）。本試驗結(jié)果表明，栗樹水解單寧能改善斷奶仔豬腸道通透性。Xiong等（2016）研究發(fā)現(xiàn)，肉雞日糧中添加栗樹單寧可提高其腸道表皮生長因子的表達，該因子在腸道上皮損傷的修復(fù)中發(fā)揮重要作用。另外，其他多種植物多酚如柚皮素、槲皮素和姜黃素等通過調(diào)節(jié)腸道緊密連接蛋白的表達來增強腸道上皮的屏障功能，降低其通透性（Wang 等，2012）。

3.4 栗樹單寧對斷奶仔豬抗氧化性能的影響斷奶應(yīng)激會誘導(dǎo)機體發(fā)生氧化應(yīng)激，氧化應(yīng)激產(chǎn)生的自由基會攻擊各器官的細胞，從而造成氧化損傷。而且斷奶應(yīng)激時仔豬的抗氧化能力顯著下降，從而加劇了氧化應(yīng)激。本研究發(fā)現(xiàn)日糧中添加栗樹水解單寧可以提高血清SOD活性，降低MDA水平，有效的提高了斷奶仔豬的抗氧化能力，改善了抗氧化狀態(tài)。Dong等（2015）在體外以腸道上皮細胞系作為模型也發(fā)現(xiàn)，栗樹單寧能改善腸道上皮細胞的抗氧化狀態(tài)；另外，紅酒中的單寧也被證實能提高嚙齒類動物結(jié)腸的抗氧化能力（Dolara等，2005）。栗樹水解單寧可能通過誘導(dǎo)抗氧化酶相關(guān)基因的表達來提高動物的抗氧化能力，大量多酚被證實能調(diào)控氧化還原敏感元件如NF-kB和Nrf2的信號通路（Redondo 等，2014）。

4 結(jié)論

栗樹水解單寧可以有效增強斷奶仔豬抗氧化能力，改善斷奶仔豬腸道健康狀況，降低腸道通透性，改善腸道絨毛形態(tài)，提高仔豬生長性能和減少腹瀉；日糧中最佳添加劑量為1000 mg/kg。

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