吳代武， 何 杰， 汪 冰， 王夢影， 周露陽，高敏敏， 葉元土*， 蔡春芳，吳 萍，浦琴華

（1.蘇州大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)與生物科學(xué)學(xué)院，江蘇蘇州 215123；2.浙江一星實(shí)業(yè)股份有限公司，浙江海鹽 314300）

以海洋捕撈的非食用魚、食用魚加工副產(chǎn)物為原料生產(chǎn)的魚粉，一直是養(yǎng)殖水產(chǎn)動(dòng)物飼料的重要蛋白質(zhì)原料。魚粉的營養(yǎng)組成因原料的選擇表現(xiàn)出較大的差異，不同的魚種類、不同生長階段蛋白質(zhì)含量不同，以魚頭、內(nèi)臟等水產(chǎn)品下腳料生產(chǎn)的魚粉，其蛋白質(zhì)和賴氨酸、甲硫氨酸含量低，“未知生長因子”含量少，促生產(chǎn)性能差（王中華，2006）。 金槍魚（Thunnus）和鱈魚（Gadus）是商品食用魚的主要捕撈對象，加工過程產(chǎn)生的大量下腳料常被用來生產(chǎn)魚粉。鳀魚（Engraulis japonicus）是鳀屬魚類的統(tǒng)稱，鳀屬魚類產(chǎn)量占世界水產(chǎn)品產(chǎn)量的10% ～20%（周明明，2010），捕撈后極易腐爛，鮮銷困難，是制作魚粉的優(yōu)質(zhì)原料。此外，鳀魚、金槍魚等紅肌魚類比白肌魚類（鱈魚等）可能含有更高的組胺等毒性因子（Vinci等，2002）。近幾年，魚粉資源愈加緊張，在維持養(yǎng)殖魚類健康生長的前提下，降低飼料成本是實(shí)現(xiàn)水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)可持續(xù)發(fā)展的基礎(chǔ)保障。因此，研究不同質(zhì)量的魚粉對黃顙魚生產(chǎn)性能的影響具有重要意義。

傳統(tǒng)的魚粉生產(chǎn)工藝中，原料魚在蒸煮、烘干等生產(chǎn)環(huán)節(jié)經(jīng)一定的高溫處理，使肌胃糜爛素等有害成分含量升高（韓凌霜，2015）。將原料魚酶解后直接用于水產(chǎn)飼料，避免了魚粉生產(chǎn)的高溫對油脂、蛋白質(zhì)的不利影響，可以更好的保持原料新鮮度和特殊活性成分。

本研究以三種魚粉（鳀魚粉、金槍魚粉、鱈魚排粉）和酶解鳀魚漿為試驗(yàn)材料，以黃顙魚（Pelteobagrus fulvidraco）為研究對象，探討酶解魚漿和傳統(tǒng)魚粉對養(yǎng)殖魚類生產(chǎn)性能、機(jī)體健康的影響，為配方飼料中魚粉的選擇提供科學(xué)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)飼料的制備 試驗(yàn)用鳀魚粉來自榮成市海圣飼料有限公司，以東海海域捕撈的鳀魚為主要原料生產(chǎn)；金槍魚粉來自中糧飼料原料貿(mào)易公司，以非洲捕撈的小型金槍魚為原料生產(chǎn)；鱈魚魚排粉來自浙江科盛飼料有限公司，以鱈魚魚排為原料生產(chǎn)；酶解鳀魚漿是以榮成市海圣飼料有限公司提供的冰凍鳀為原料，在實(shí)驗(yàn)室條件下制備（吳代武等，2015）。鳀魚粉、金槍魚粉、鱈魚魚排粉、酶解魚漿營養(yǎng)成分實(shí)測值見表1。

表1 魚粉、酶解魚漿營養(yǎng)成分組成（干物質(zhì)）%

以實(shí)測的鳀魚粉（FM）、金槍魚粉（TFM）、鱈魚魚排粉（CFM）蛋白質(zhì)含量為基礎(chǔ)，按相同蛋白質(zhì)計(jì)算其在試驗(yàn)飼料配方中用量（表2）。按照魚粉蛋白質(zhì)量的35%，在高植物蛋白飼料中添加酶解魚漿（FPH）。共設(shè)計(jì)4組試驗(yàn)飼料，試驗(yàn)所用飼料配方及其營養(yǎng)成分實(shí)測值見表2。各組間蛋白質(zhì)、脂肪、總磷、總能水平無顯著差異。原料粉碎后過60目篩，混勻加適量水?dāng)嚢瑁屏C(jī)加工成切成3～5 mm長的顆粒飼料，風(fēng)干后置于-20℃密封保存。飼料氨基酸組成見表3，生物胺組成見表4。

1.2 試驗(yàn)魚與養(yǎng)殖管理 養(yǎng)殖試驗(yàn)在浙江一星養(yǎng)殖基地池塘網(wǎng)箱中進(jìn)行，在面積為40 m×60 m的池塘中設(shè)置試驗(yàn)網(wǎng)箱 （規(guī)格為1.0 m×1.5 m×1.5 m），以海鹽縣長山河為水源，池塘中設(shè)置1臺(tái)1.5 kW的葉輪式增氧機(jī)，每天運(yùn)行12 h。

選取浙江一星養(yǎng)殖基地池塘培育的1冬齡、規(guī)格整齊、健康，體重為（30.08±0.35）g 的黃顙魚種240尾，隨機(jī)分成4組，每組設(shè)3個(gè)重復(fù)（n=3），每網(wǎng)箱20尾，試驗(yàn)魚網(wǎng)箱馴化適應(yīng)兩周后開始正式投喂。日投喂2次（07:00、16:00），日投喂量為魚體重的3%～5%，每10 d估算1次魚體增重量，調(diào)整投喂量。實(shí)際投喂60 d，養(yǎng)殖期間水溫24.1～36.0℃，溶解氧濃度 ＞7.0 mg/L，pH 8.0～8.4，氨氮濃度＜0.10 mg/L，亞硝酸鹽濃度＜0.005 mg/L，硫化物濃度＜0.05 mg/L。

表2 試驗(yàn)飼料配方與營養(yǎng)水平

1.3 樣品采集 正式試驗(yàn)前，從分組剩余的黃顙魚中隨機(jī)取6尾魚，作為初始樣本進(jìn)行全魚體成分分析。養(yǎng)殖結(jié)束時(shí)，停食24 h，對每個(gè)網(wǎng)箱黃顙魚進(jìn)行稱重、計(jì)數(shù)，計(jì)算成活率、特定生長率。每網(wǎng)箱隨機(jī)取3尾魚保留全魚樣品，進(jìn)行全魚體成分測定。分析試驗(yàn)前后魚體蛋白質(zhì)、脂肪含量，計(jì)算蛋白質(zhì)沉積率、脂肪沉積率。每網(wǎng)箱隨機(jī)取6尾魚測定體重、體長，解剖取內(nèi)臟團(tuán)、肝胰臟稱重，用于計(jì)算肥滿度、臟體比和肝體比。

表3 試驗(yàn)飼料氨基酸組成（干物質(zhì)）g/100g

表4 試驗(yàn)飼料生物胺組成（干物質(zhì)）mg/kg

每網(wǎng)箱隨機(jī)取3尾魚，解剖取胃黏膜組織，魚用生理鹽水清洗，2.5%戊二醛固定，用于掃描電鏡的樣品制備，觀察胃黏膜結(jié)構(gòu)。

每個(gè)網(wǎng)箱隨機(jī)取10尾魚，以無菌的1 mL注射器自尾柄靜脈采血，置于Eppendorf離心管中室溫自然凝固3 h，3000 r/min、室溫離心10 min，取上層血清混合，每個(gè)網(wǎng)箱作為1個(gè)樣品，液氮速凍后于-50℃冰箱保存待測。血清生理生化指標(biāo)采用雅培C800全自動(dòng)生化分析儀測定。

1.4 分析方法 將保存的飼料和全魚樣品解凍，用粉碎機(jī)低溫粉碎均勻，采用真空冷凍干燥方法測定水分；凱氏定氮法（GB 5009.5-2010）測定粗蛋白質(zhì)含量；索氏抽提法（GB/T 14772-2008）測定粗脂肪含量；GB 5009.4-2010中方法測定粗灰分含量；能量采用XRY-1C型氧彈氏熱量計(jì)測定；飼料、全魚氨基酸的測定采用SYKAM S-433D氨基酸分析儀（吳代武等，2017）。

各試驗(yàn)組飼料中的生物胺含量由新希望六和測試中心分析檢測，儀器Thermo Q-Exactive（配有ESI源），色譜柱Hypersil GOLD C18 100mm×2.1mm×3.0 μm，流動(dòng)相為甲醇：0.1%甲酸水溶液，流速0.3 mL/min，柱溫30℃。

1.5 計(jì)算方法

特定生長率（SGR）/（%/d）=（lnWt－lnWi）/t×100；

飼料系數(shù)（FCR）=Wa/（W1-W0）；

蛋白質(zhì)沉積率（PRR）/%=（P1-P0）/Wp×100；

脂肪沉積率（FRR）/%=（F1-F0）/WF×100；

肥滿度（CF）/（%/cm3）=W/L3×100；

臟體比（HSI）/%=Wh/W×100；

肝體比（VSI）/%=Wv/W×100；

式中：Wt、Wi分別為終末均重，g；初始均重，g；t為飼養(yǎng)天數(shù)，d；W1、W0分別為終末總體質(zhì)量，g；初始總體質(zhì)量，g；Wa為投喂飼料總質(zhì)量，g；P1、P0分別為終末體蛋白質(zhì)質(zhì)量，g；初始體蛋白質(zhì)質(zhì)量，g；Wp為蛋白質(zhì)攝入總質(zhì)量，g；F1、F0分別為終末體脂肪質(zhì)量，g；初始體脂肪質(zhì)量，g；WF為脂肪攝入總質(zhì)量，g；W 為魚體質(zhì)量，g；Wv為魚體內(nèi)臟重質(zhì)量，g；Wh為魚體肝胰臟質(zhì)量，g；L為魚體長，cm。

1.6 數(shù)據(jù)處理 試驗(yàn)結(jié)果使用SPSS 18.0進(jìn)行單因子方差分析，同時(shí)進(jìn)行Duncan’s多重比較分析試驗(yàn)數(shù)據(jù)的差異顯著性，結(jié)果以 “平均值±標(biāo)準(zhǔn)差”表示，以P＜0.05為差異顯著水平。

2 結(jié)果分析

2.1 不同來源魚粉對黃顙魚的生長和飼料效率的影響 養(yǎng)殖過程中各試驗(yàn)組黃顙魚的成活率（SR）無顯著差異（P ＞ 0.05）（表 5）。以 SGR 表示黃顙魚的生長速度，結(jié)果顯示，F(xiàn)M組最高，其次為FPH組，TFM和CFM組比FM組低了11.4%、14.9%，但差異不顯著（P＞0.05）。對于飼料效率，各處理組的FCR差異不顯著 （P＞0.05），TFM和CFM組比FM組高了28.6%；飼料的PRR和FRR也無顯著差異 （P＞0.05），F(xiàn)M組黃顙魚PRR和FRR最高。

表5 不同來源魚粉對試驗(yàn)黃顙魚生長、飼料效率的影響（n=3）

各組魚的體成分無顯著差異（表6）。對于形體指標(biāo)，CFM組 CF、VSI和 HSI均最高，HSI顯著高于 TFM（P＜ 0.05）。

表6 不同來源魚粉對黃顙魚體成分和形體指標(biāo)的影響（n=3）

2.2 不同來源魚粉對黃顙魚血清生理指標(biāo)的影響黃顙魚血清生理指標(biāo)見表7，各組的谷草轉(zhuǎn)氨酶（AST）和谷丙轉(zhuǎn)氨酶（ALT）、總蛋白（LTP）、白蛋白（ALB）、葡萄糖（GLU）、高密度脂蛋白（HDL）水平無顯著差異（P＞0.05）；而FPH組血清低密度脂蛋白（LDL）、膽固醇（CHOL）和甘油三酯（TG）比TFM組降低了42.0%、37.0%、35.0%，變化顯著（P ＜ 0.05）。

2.3 不同來源魚粉對黃顙魚胃黏膜組織形態(tài)的影響 CFM和FPH組胃部黏膜結(jié)構(gòu)清晰，上皮細(xì)胞形態(tài)完整、排列緊密；而FM、TFM組胃部黏膜損傷嚴(yán)重，上皮細(xì)胞出現(xiàn)破損，F(xiàn)M上皮細(xì)胞完全損壞，沒有基本的細(xì)胞形態(tài)。

3 討論

魚粉對養(yǎng)殖水產(chǎn)動(dòng)物表現(xiàn)出特殊的營養(yǎng)作用，對養(yǎng)殖動(dòng)物生長速度、飼料利用效率及魚體生理機(jī)能的影響是評(píng)價(jià)魚粉營養(yǎng)質(zhì)量最綜合的指標(biāo)。原料質(zhì)量的判別常以營養(yǎng)成分作為依據(jù)，而魚粉的營養(yǎng)組成因原料的選擇表現(xiàn)出較大的差異。飼料魚粉蛋白質(zhì)用量相同時(shí)，鳀魚粉、鱈魚魚排粉的灰分含量高于金槍魚粉，導(dǎo)致飼料中魚源灰分含量也高于金槍魚粉飼料。研究表明，魚排粉（粗蛋白質(zhì)55.74%，灰分22.65%）會(huì)降低凡納濱對蝦（Litopenaeus vannamei） 的生長 （程傳龍，2010）；Toppe等（2006）在飼料中添加魚排粉，飼料中魚源灰分含量為8.4%～18%時(shí)，大西洋鱈（Gadus morhua）的攝食率、特定生長率隨灰分升高而增加；Li等（2004）用高灰分的魚頭粉替代25%魚粉粗蛋白養(yǎng)殖美國紅魚（Sciaenops ocevatus），養(yǎng)殖效果無顯著差異。本研究中，魚粉飼料的黃顙魚生長速度、飼料利用效率無顯著差異，意味著黃顙魚能在一定范圍能有效利用高灰分魚粉。在相同魚粉蛋白質(zhì)用量的條件下，魚粉飼料氨基酸的平衡模式均與魚體氨基酸模式接近（表3）。以冰凍魚為原料制備的酶解魚漿，其主要營養(yǎng)組成與魚粉差異較大，但保全了原料魚的主要組成物質(zhì)，氨基酸的平衡性好，12%魚漿（干物質(zhì)）與30%的魚粉在生產(chǎn)性能方面具有一定的等效性。

生物胺在魚粉中的含量是評(píng)價(jià)魚粉質(zhì)量的重要指標(biāo)。鳀魚等紅肌魚類比白肌魚類含更高的組氨酸（Suyama 和 Yoshizawa，1973），在一定條件下，組氨酸在微生物脫羧酶及尿酐酸酶作用下生成組胺（趙利等，2006），因此，紅魚粉中的組胺含量高于白魚粉（周天政，2009；Vinci等，2002）。Opstvedt等 （2000）在飼料中添加腐胺（600 mg/kg）、尸胺（1600 mg/kg）、組胺（1600 mg/kg），大西洋鮭（Salmo salar L.）生長不受影響。Fairgrieve（1992）在飼料中添加0～2000 mg/kg組胺，或同時(shí)加入 500 mg/kg的腐胺、尸胺 （Fairgrieve等，1994），虹鱒 （Oncorhynchus mykiss）生長也不受影響。本研究中，試驗(yàn)鳀魚粉飼料組胺為322 mg/kg，是金槍魚粉飼料的6倍、鱈魚魚排粉飼料的75倍，尸胺、腐胺水平也遠(yuǎn)高于金槍魚粉飼料，但黃顙魚生長未受到鳀魚粉高組胺的影響，與虹鱒（Fairgrieve，1994、1992）結(jié)果相似。 組胺所帶來的毒性影響因子（肌胃糜爛素）可能會(huì)影響魚體胃部肌肉收縮。研究表明，用組胺含量高的魚粉投喂虹鱒時(shí)發(fā)現(xiàn)，其胃部產(chǎn)生了嚴(yán)重的生理病變（Fairgrieve 等，1994；Watanabe 等，1987）。 本研究中鳀魚粉、金槍魚粉組黃顙魚胃部絨毛基礎(chǔ)結(jié)構(gòu)完整，但黏膜上皮細(xì)胞出現(xiàn)損傷，意味著高組胺的魚粉有導(dǎo)致黃顙魚胃腸道病理變化的風(fēng)險(xiǎn)。

表7 不同來源魚粉對黃顙魚血清生理指標(biāo)的影響

血清生理指標(biāo)可以反映魚類的營養(yǎng)代謝與健康狀況。轉(zhuǎn)氨酶是催化氨基轉(zhuǎn)移的一類酶，是反映肝臟功能的指標(biāo)。在正常情況下，血清轉(zhuǎn)氨酶的活性保持在一個(gè)適當(dāng)?shù)姆秶鷥?nèi)，當(dāng)肝胰臟等組織受到損傷時(shí)，會(huì)導(dǎo)致大量的轉(zhuǎn)氨酶釋放到血液中，引起血清中轉(zhuǎn)氨酶活性的升高。有研究發(fā)現(xiàn)，在飼料中添加大量的菜籽會(huì)造成肝臟的損傷，引起血清轉(zhuǎn)氨酶活性顯著升高（葉元土等，2005；馬利等，2005），而本試驗(yàn)中高植物蛋白中添加魚漿，兩種轉(zhuǎn)氨酶的活性與高魚粉飼料差異不顯著，表明魚漿可以緩解植物蛋白對肝臟的損傷作用。血清蛋白含量也與機(jī)體健康、營養(yǎng)狀況等密切相關(guān)（Yildirim等，2003），但研究表明魚粉質(zhì)量不影響黃顙魚血清總蛋白水平（黃文文等，2015），與本研究結(jié)果相符。

膽固醇是脂質(zhì)代謝的重要部分，主要在肝胰臟參與合成膽汁酸。高密度脂蛋白和低密度脂蛋白是膽固醇的主要運(yùn)輸者，高密度脂蛋白（HDL）的功能是將膽固醇由外周組織轉(zhuǎn)運(yùn)至肝胰臟進(jìn)行代謝；而低密度脂蛋白（LDL）將其由肝胰臟向外周轉(zhuǎn)運(yùn)。酶解魚漿組黃顙魚血清LDL水平較低，導(dǎo)致血清中膽固醇和甘油三酯也隨之降低，意味著減少飼料魚粉用量，在高植物蛋白質(zhì)中添加魚漿，有利于膽固醇參與代謝。

4 結(jié)論

本研究中，高植物蛋白飼料中添加12%的魚漿（干物質(zhì)），其生長性能與30%魚粉具有一定的等效性；魚粉蛋白質(zhì)用量相同時(shí)，黃顙魚的生長速度和飼料利用效率不受魚粉主要營養(yǎng)成分的影響，但飼料組胺水平較高時(shí)，黃顙魚胃黏膜上皮細(xì)胞會(huì)出現(xiàn)損傷。

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