賴重波，李 崇，黃榮春，司紅彬*

(1.廣西大學(xué) 動(dòng)物科學(xué)技術(shù)學(xué)院，廣西 南寧 530005；2 廣西玉林農(nóng)業(yè)學(xué)校，廣西 玉林 537000)

奶牛乳房炎又名奶牛乳腺炎，廣泛存在于中國及世界各地，該病每年造成的經(jīng)濟(jì)損失嚴(yán)重，不僅危害奶牛健康，使奶牛泌乳量下降，乳制品的質(zhì)量下降，降低養(yǎng)殖的利潤，同時(shí)還使乳制品中的耐藥菌、致病因子殘留，危害人體健康[1]。引起奶牛乳房炎的原因是致病因子對機(jī)體的感染。奶牛自身的生理特點(diǎn)、營養(yǎng)、環(huán)境以及飼養(yǎng)管理不當(dāng)?shù)龋鶗?huì)使奶牛的抗病力下降，患乳房炎的幾率加大[2]。

1 奶牛乳房炎的致病因素

奶牛乳房炎的致病因素較多，大致歸納如下：

1.1 致病微生物

引發(fā)奶牛乳房炎的病原微生物種類和數(shù)量繁多，主要有細(xì)菌、真菌、支原體、鉤端螺旋體等。細(xì)菌中主要由革蘭氏陽性菌、真菌和細(xì)菌導(dǎo)致的乳房炎較易產(chǎn)生耐藥性[3]。羅金印等[4]對蘭州奶牛乳房炎的病原菌調(diào)查結(jié)果為無乳鏈球菌30.0%，金黃色葡萄球菌21.4%。

1.2 管理因素

飼養(yǎng)管理不當(dāng)，使得畜舍環(huán)境衛(wèi)生條件不達(dá)標(biāo)。通風(fēng)、溫度、濕度不適，易滋生多種致病微生物；擠奶不規(guī)范，對擠奶器操作不熟練直接或間接導(dǎo)致奶牛乳房損傷。營養(yǎng)因素是指管理飼料時(shí)飼料的突然改變或者成分不均衡，例如飼料中的氮水平或蛋白質(zhì)含量過高則可促發(fā)乳房炎[5]。

1.3 疾病繼發(fā)

奶牛乳房炎可繼發(fā)于子宮內(nèi)膜炎、胎衣不下、流產(chǎn)，甚至腹瀉、口蹄疫等。中毒、高熱、前胃弛緩等疾病可誘發(fā)乳房炎[3]。董全吉[6]在治療過程中發(fā)現(xiàn)奶牛子宮內(nèi)膜炎可繼發(fā)奶牛乳房炎。

1.4 個(gè)體和遺傳因素

奶牛乳房炎具有一定的遺傳性，例如患有奶牛乳房炎的母牛，其雌性后代發(fā)病率較其他雌性母牛高。且與奶牛乳房形狀有關(guān)，前后乳房附著較松散、乳房下垂、乳頭位置朝外發(fā)育的母牛易患乳房炎。當(dāng)然，也有個(gè)體差異[7]。

2 奶牛乳房炎的治療

在奶牛乳房炎的治療中，抗生素是主要治療藥物。隨著抗生素耐藥性的逐漸增強(qiáng)，現(xiàn)在中草藥以及其它治療方法和藥物也漸漸發(fā)展起來。

2.1 抗生素治療乳房炎

引起乳房炎的致病微生物較多，需通過藥敏試驗(yàn)來確定相應(yīng)致病微生物種類，這樣才能正確用藥配藥，從而提高治愈率。

侯曉申[8]使用了復(fù)方阿莫西林乳房注射劑和速諾LC對臨床型奶牛乳房炎進(jìn)行分組治療，試驗(yàn)結(jié)果表明兩組的療效均較好，但復(fù)方阿莫西林乳房注射劑對于奶牛乳房炎耐藥病原菌效果更顯著。高健[9]在對奶牛乳房炎常見致病菌的致病特點(diǎn)分析后，提出了關(guān)于抗生素治療乳房炎的新理念，即在已經(jīng)確定某種治療的抗生素并且給藥2-3d后，立即停止治療，給予乳腺組織以自行恢復(fù)的時(shí)間，使它的炎癥、臨床癥狀逐漸消失，從而治愈。

雖然抗生素對奶牛乳房炎的治療有一定作用，但引起奶牛乳房炎的致病菌對抗生素的耐藥性也在逐漸增大。田曉英等[10]通過調(diào)查發(fā)現(xiàn)，天津地區(qū)檢測出的奶牛乳房炎中的金黃色葡萄球菌對大環(huán)內(nèi)酯類、林可酰胺類等8類29種抗生素均有較高的耐藥性,其中對乙酰螺旋霉素、林可霉素和β-內(nèi)酰胺類的耐藥率達(dá)到了100%。武君元等[11]研究發(fā)現(xiàn)，新疆阿克蘇地區(qū)奶牛乳房炎大腸桿菌對四環(huán)素和氟喹諾酮類表現(xiàn)出較高的耐藥性。孫垚等[12]調(diào)查發(fā)現(xiàn)，廣東省部分地區(qū)奶牛乳房炎分離出的葡萄球菌對臨床常用的抗生素均有較高的耐藥性。鑒于各地奶牛乳房炎致病菌均存在對抗生素耐藥的情況，國內(nèi)許多專家學(xué)者逐漸發(fā)現(xiàn)中草藥對治療奶牛乳房炎的良好前景。

2.2 中草藥治療乳房炎

中草藥毒副作用幾乎不存在，殘留極少、不產(chǎn)生抗藥性和耐藥性、對乳制品品質(zhì)和質(zhì)量無影響，所含多種有效成分克服了抗生素的某些不足，因而具有其獨(dú)特的優(yōu)勢。

研究表明，中藥制劑對奶牛乳房炎有較理想的效果。譚武貴等[13]研究發(fā)現(xiàn)在“萬乳康”基礎(chǔ)上,添加了蒲公英、金銀花等中藥成分后所得新藥“泰乳康”較“萬乳康”的轉(zhuǎn)陰率和治愈率均顯著提高。張偉等[14]通過臨床治療實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)復(fù)方(蒲公英、車前草、紫花地丁各30克，黃芪、當(dāng)歸、赤芍、紅花各20克組成的方劑)治療奶牛輕微乳房炎療效顯著。劉明江[15]通過基因轉(zhuǎn)錄深度測序分析、GO 分析、KEGG Pathway分析實(shí)驗(yàn)初步證明：脂多糖(LPS)是通過激活奶牛乳腺上皮細(xì)胞(bMEC)的NF-κB，MAPKs信號(hào)通路誘導(dǎo)奶牛乳房炎。而純中藥灌注劑“金浦”中的主要活性成分咖啡酸可抑制bMEC的NF-κB的活性和細(xì)胞MAPKs信號(hào)通路的轉(zhuǎn)導(dǎo)，從而減弱了LPS對 bMEC的誘導(dǎo)炎性損傷。

近些年來，中草藥提取物治療乳房炎等其他疾病已經(jīng)成為熱點(diǎn)。呂平等[16]通過正交試驗(yàn)研究出的復(fù)配方(苦丁茶、蒲公英、丁香的提取物加上溶菌酶)對從臨床型奶牛乳房炎病例的奶樣分離出的致病菌具有良好的抑制效果。張宇[17]對蘭州及其周邊奶牛場中分離出的奶牛乳房炎耐藥菌進(jìn)行試驗(yàn)：通過培養(yǎng)篩選出耐藥菌的質(zhì)粒消除后，再經(jīng)過堿裂解法抽離，最后使用瓊脂凝膠糖電泳檢測9種中藥(五倍子、五味子、艾葉、大黃、黃連、黃芩、三顆針、烏梅、黃柏)提取液作用，觀察耐藥菌株質(zhì)粒條帶的改變；最后用9種中藥亞抑菌濃度提取液作用于耐藥菌中篩選出的超廣譜β-內(nèi)酰胺酶的菌。結(jié)果表明，9種中藥提取液對耐藥質(zhì)粒有消除作用，對超廣譜β-內(nèi)酰胺酶的菌有抑制作用。證實(shí)這9種中藥提取液可以降低該病致病菌的耐藥性。

2.3 中西醫(yī)結(jié)合

使用中西醫(yī)結(jié)合方法治療奶牛乳房炎，能夠發(fā)揮兩類藥物優(yōu)勢，提高治療效果，是目前應(yīng)用前景最廣闊的方法。陳萬良[18]取20頭隱性或慢性乳房炎病例，隨機(jī)分2組，分別用抗生素和中西醫(yī)結(jié)合進(jìn)行治療；結(jié)果顯示中西醫(yī)治療組的抗生素殘留遠(yuǎn)小于抗生素組。議旦吉[19]治療實(shí)驗(yàn)結(jié)果：16例患乳房炎病牛經(jīng)中西醫(yī)結(jié)合治療后有效率達(dá)到了93.75%。

2.4 其它治療藥物

除了以上提到的治療方法和藥物以外，還有一些天然、人工的化合物等可治療乳房炎。研究表明，該類治療藥物的療效均較好。

王琪等[20]通過大蒜素對引起奶牛乳房炎的金黃色葡萄球菌的最小抑菌濃度和對奶牛乳房炎的臨床治療試驗(yàn)，證明大蒜素對該菌具有良好的抑制效果且大蒜素對奶牛乳房炎有較好的治療效果，大蒜素與中草藥進(jìn)行協(xié)同治療時(shí)效果更好。冷秀芬[21]使用苦參堿類生物堿對奶牛乳房炎進(jìn)行臨床治療，治療的總有效率為93.33%。程浩等[22]用天然化合物肉桂醛對引起奶牛乳房炎的大腸桿菌、金黃色葡萄球菌和鏈球菌的最小抑菌濃度和最小殺菌濃度進(jìn)行檢測，從其生長曲線可知肉桂醛對該三類致病菌均有較強(qiáng)的抑制和殺滅作用。

3 生物制劑預(yù)防乳房炎

3.1 細(xì)胞因子

細(xì)胞因子具有可調(diào)節(jié)機(jī)體多種免疫細(xì)胞的功能，能增強(qiáng)免疫細(xì)胞對病原微生物的抵抗力和殺傷力[23]。弓素梅等[24]使用酶聯(lián)免疫吸附法對使用中藥“乳炎消”的臨床型奶牛乳房炎進(jìn)行檢測，試驗(yàn)結(jié)果表明，白細(xì)胞介素2、白細(xì)胞介素1β和腫瘤壞死因子α三種細(xì)胞因子有明顯影響。

3.2 疫苗

對于奶牛乳房炎疫苗的研究，只有少數(shù)針對性的細(xì)菌疫苗，無法對所有病原菌產(chǎn)生影響。目前的疫苗種類主要有:

3.2.1 滅活苗

ysigin苗(針對金黃色葡萄球菌性)、J5疫苗(針對大腸桿菌性)、Mycomune疫苗(針對分支桿菌性)、Startvac多聯(lián)苗(針對大腸桿菌和金黃色葡萄球菌性)等。謝昆等[25]成功將奶牛隱性乳房炎大腸桿菌蜂膠滅活苗研制出來，并在經(jīng)過建立動(dòng)物模型、小鼠攻毒試驗(yàn)后證明該疫苗具有較好的安全性且具有良好的免疫效果。Bradley, A. J.等[26]成功將奶牛隱性乳房炎大腸桿菌蜂膠滅活苗研制出來，并在經(jīng)過建立動(dòng)物模型、小鼠攻毒試驗(yàn)后證明該疫苗具有較好的安全性且具有良好的免疫效果。

3.2.2 弱毒活苗

Tollerud T等[27]用減毒菌株金黃色葡萄球菌(w79)對奶牛乳房炎有抗感染作用。Pellegrino M等[28]利用金黃色葡萄球菌無毒突變體RC122免疫奶牛，用RC108攻毒，結(jié)果表明，此疫苗能夠顯著誘導(dǎo)產(chǎn)生抗體，并顯著降低牛奶中體細(xì)胞數(shù)量。

3.2.3 亞單位疫苗

根據(jù)研究人員提取的成分又可分為：

3.2.3.1 夾膜多糖疫苗

pfiter公司于2010在純化的金黃色葡萄球菌CP5和CP8加上ClfA疫苗，可有效防止病原菌黏附到細(xì)胞。楊嵐等[29]將牛源金黃色葡萄球菌CP8與CLFA和FnB-PB偶聯(lián)加入佐劑制成疫苗，能使奶牛體細(xì)胞數(shù)保持在正常范圍。侯書寶[30]成功研制的奶牛乳房炎大腸桿菌lps基因亞單位疫苗，具有較好的免疫保護(hù)作用。

3.2.3.2 表面蛋白疫苗

這是由金黃色葡萄球菌主要表面黏附蛋白和無乳鏈球菌主要黏附蛋白作為目的抗原進(jìn)行試驗(yàn)研究所得的疫苗。姚笛[31]成功構(gòu)建了抗乳鏈球菌和金黃色葡萄球菌感染的表位疫苗，并通過實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證了該疫苗的效果。Song, Baifen等[32]研究了引起奶牛乳房炎的鏈球菌的表面蛋白GapC蛋白，可知該蛋白為主要毒力因子。他們將GapC蛋白重組替換大腸桿菌的ompA基因進(jìn)行重組后肌注小鼠，用ELISA檢測小鼠血清中的抗GapC,通過酶聯(lián)免疫斑點(diǎn)法檢測白細(xì)胞介素-4和干擾素-γ，最后使用致病鏈球菌攻毒小鼠，可得GapC蛋白使免疫的小鼠表現(xiàn)出更好的細(xì)胞和體液免疫，表明在大腸桿菌表面展示作為針對鏈球菌物種的疫苗的GapC是可行的。

3.2.3.3 重組亞單位疫苗

重組技術(shù)是通過克隆和表達(dá)一種或幾種微生物中的部分抗原來研發(fā)疫苗。李月穎等[33]用乳鏈球菌免疫分泌蛋白基因(IPS)構(gòu)建重組質(zhì)粒并轉(zhuǎn)化到大腸桿菌進(jìn)行表達(dá)，再經(jīng)IPTG誘導(dǎo)后就可得到抗原性良好的目的蛋白。

3.2.3.4 其它單位疫苗

王登峰等[34]利用Blast分析來源不同的克隆菌菌株的Isdb所得的Isdb蛋白作為疫苗，可降低攻毒菌對攻毒鼠的損傷和感染力。

3.2.4 載體疫苗和核酸疫苗

劉永夏[35]研究的奶牛乳房炎大腸桿菌F17A-MF59疫苗，能有效增強(qiáng)機(jī)體對大腸桿菌的抗感染免疫反應(yīng)。Su Y等[36]構(gòu)建了含kozak和不含kozak序列的牛乳金黃色葡萄球菌的FnBPA-A基因的重組質(zhì)粒，分別對小鼠免疫后進(jìn)行攻毒實(shí)驗(yàn)，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，未免疫小鼠全部死亡，證明Kozak 序列對加強(qiáng) Fn BPA 的重組 DNA 疫苗誘導(dǎo)的免疫應(yīng)答起了不容忽視的功能。Camussone, C. M.等[37]研究了一種用Iscom Matrix佐劑的金黃色葡萄球菌CP5裂解物疫苗，可誘導(dǎo)中性粒細(xì)胞進(jìn)行吞噬作用，并與調(diào)控和促炎細(xì)胞因子的表達(dá)有關(guān)。還能有效阻止金黃色葡萄球菌對纖維蛋白原的結(jié)合，并將這些抗原作為候選體，置于體外，以防止葡萄球菌性乳房炎的形成。

3.3 抗菌肽

抗菌肽是一種具備生物活性的小分子多肽，是微生物入侵機(jī)體后的反應(yīng)產(chǎn)物。抗菌肽具有很好的應(yīng)用和開發(fā)潛力。應(yīng)用于乳房炎奶牛致病菌的生物活性分子抗菌肽，對于乳房炎具有一定的防御作用，對隱性乳房炎具有積極的效果。

呂月琴等[38]研究發(fā)現(xiàn)，抗菌肽復(fù)合制劑可有效預(yù)防奶牛隱性乳房炎。葉滔等[39]通過實(shí)驗(yàn)研究發(fā)現(xiàn)，抗菌肽菌絲霉素成膜劑對奶牛隱性乳房炎有明顯的預(yù)防效果。

4 小結(jié)

乳房炎是影響奶牛養(yǎng)殖業(yè)的主要疾病之一，由于病因較多，徹底治愈或消除的希望較小。國內(nèi)外研究者研制出的多種防治奶牛乳房炎的中草藥產(chǎn)品，效果和抗生素一樣，甚至優(yōu)于抗生素。但在臨床治療中，中草藥要取代抗生素成為治療乳房炎的主要手段還有很長的路要走。因?yàn)橹胁菟幍闹委熀妥饔脵C(jī)制有待明確；而且中草藥的來源、生產(chǎn)和使用的安全保障也不足。奶牛乳房炎應(yīng)該以預(yù)防為主，搞好環(huán)境衛(wèi)生，進(jìn)行徹底消毒和清洗；保持通風(fēng)狀態(tài)，及時(shí)清除致病原微生物；加強(qiáng)對養(yǎng)殖場工作人員培訓(xùn)，在擠奶前進(jìn)行徹底消毒和中草藥藥物清潔，最好能進(jìn)行乳房按摩。國際上，牛奶中的體細(xì)胞數(shù)是判定奶牛隱性乳房炎的主要指標(biāo)，應(yīng)對奶牛體細(xì)胞數(shù)進(jìn)行定期檢測。在發(fā)生奶牛乳房炎的時(shí)候能夠及時(shí)處理，防止傳染。加強(qiáng)對奶牛乳房炎各種疫苗的研制，爭取形成以疫苗等其他預(yù)防措施為主，藥物治療為輔的機(jī)制。應(yīng)大力提倡中西醫(yī)結(jié)合治療乳房炎，因?yàn)橹形麽t(yī)結(jié)合不僅能使乳房炎的治愈率大大提高，而且獸藥殘留量遠(yuǎn)遠(yuǎn)低于抗生素治療。