梁 勇，潘 杰

（廣東省東莞市動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心，廣東 東莞 523086）

牛O-P液是牛食道-咽部分泌物的縮寫，主要作為口蹄疫等病原學(xué)檢測(cè)樣品，從而評(píng)估免疫抗體水平，了解病原分布狀況及疫情風(fēng)險(xiǎn)。掌握正確的牛O-P液采樣方法對(duì)保證樣品的真實(shí)性起著關(guān)鍵性作用。

1 材料

1.1工 具 金屬探杯、滅菌廣口瓶、采樣箱、記號(hào)筆、標(biāo)簽、封口膜、一次性手套、口罩、防護(hù)服、水鞋、防護(hù)鏡、牽引繩、保定架、鼻鉗。

1.2 試劑

1.2.1 10.1mol/L PBS液

氯化鈉80g，氯化鉀2g，磷酸氫二鈉30g，磷酸二氫鉀2g，蒸餾水1000mL，0.04mol/L pH7.4磷酸鹽緩沖液（0.1mol/L PBS液400mL,蒸餾水600mL）。

1.2.2 0.5%水解乳蛋白/Earle液

氯化鈉6.8g，氯化鉀0.4g，氯化鈣0.2g，硫酸鎂0.2g，磷酸二氫鈉0.14g，葡萄糖1g，10%酚紅2g，水解乳蛋白5g，加雙蒸餾水1000mL。按配方稱取各成分并逐個(gè)溶解，最后加雙蒸餾水1000mL，過(guò)濾除菌，或69kpa高壓蒸汽滅菌15min，室溫或4℃保存。

2 方法

2.1 樣品采集 采樣探杯在使用前經(jīng)0.2%檸檬酸或2%氫氧化鈉浸泡5min，再用自來(lái)水沖洗。采樣時(shí)動(dòng)物站立保定，將探杯隨吞咽動(dòng)作送入食道上部10～15cm處，輕輕來(lái)回移動(dòng)2～3次，然后將探杯拉出。

2.2 樣品保存將探杯采集到的8～10mL O-P液倒入25mL以上的滅菌玻璃容器中,容器中應(yīng)事先加有8～10mL細(xì)胞培養(yǎng)液（0.5%水解乳蛋白-Earle液）或磷酸鹽緩沖液（0.04mol/L、pH7.4），加蓋密封后充分搖勻，貼上防水標(biāo)簽，并做好標(biāo)識(shí)，盡快放入裝有冰塊的冷藏箱內(nèi)，然后轉(zhuǎn)往-30℃冰箱凍存待檢。

3 注意事項(xiàng)

3.1 動(dòng)物的保定盡量選擇牽有鼻繩的牛，配備保定架，將牛趕入保定架前后柵欄關(guān)上后，牽拉牛頭成45°仰角，將鼻繩在保定架轉(zhuǎn)角位置繞3～4圈，期間不斷測(cè)試是否容易松脫

，使牛頭完全固定好。對(duì)沒有鼻繩的牛，需要借助鼻鉗盡量向前向上牽引，牛肩胛骨位置套上保定裝置防止牛動(dòng)作太大，期間需要注意牛角對(duì)采樣人員的傷害。

3.2 樣品潔凈度被檢動(dòng)物在采樣前禁食（可飲水）12h，以免反芻胃內(nèi)容物嚴(yán)重污染O-P液。如采集的O-P液被反芻胃內(nèi)容物嚴(yán)重污染，要用生理鹽水或自來(lái)水沖洗口腔后重新采樣。

3.3 探杯的使用一頭動(dòng)物使用一個(gè)探杯，所使用的探杯與鐵絲焊好，采樣前檢查是否出現(xiàn)松脫等情況，防止探杯因動(dòng)物反抗過(guò)大被滯留在體內(nèi)。

3.4 人員的防護(hù)按順序穿戴防護(hù)用品，依次為口罩、防護(hù)鏡、第一層手套、防護(hù)服、口罩、第二層手套并套在防護(hù)服袖口外面。卸載順序則為外手套、防護(hù)鏡、防護(hù)服、水鞋、口罩、內(nèi)層手套，并將使用過(guò)的防護(hù)用品分開裝載，一般為可反復(fù)使用的水鞋待消毒后循環(huán)使用，其他一次性防護(hù)用品另外包裝集中銷毀。在采樣過(guò)程中，要首先保證動(dòng)物保定好，尤其是角、蹄等具傷害性部位處于安全防護(hù)范圍，保定欄結(jié)實(shí)防止動(dòng)物沖撞。