• 
    

    
    

      99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看

      ?

      微濕布條DNA檢驗

      2018-02-27 01:56:40章冬青
      安徽警官職業(yè)學院學報 2018年6期
      關鍵詞:檢材離心管分型

      葉 娟,趙 敏,章冬青

      (1,3.安徽省天長市公安局刑事科學技術室,安徽 天長 239300;2.江蘇省宿遷市沭陽縣公安局,江蘇 沭陽 223600)

      目前制約接觸DNA檢驗成功率的瓶頸主要在接觸DNA檢材的發(fā)現(xiàn)和提取上,如何從微量接觸檢材中提取到足夠量的DNA,得出完整的STR基因分型圖譜,以滿足法醫(yī)檢驗需要,為偵查破案指明方向,已成為每一個DNA技術工作者研究的課題。硅珠法是提取和純化DNA的常用方法之一,適用于各類生物檢材,尤其適用于腐敗、污穢等檢材,具有經濟、簡便、快速等優(yōu)點。但由于常規(guī)硅珠法實驗操作復雜,實驗過程中模板DNA量損失較大,對微量檢材的檢驗效果欠佳。本文通過對硅珠法進行了改良,與常規(guī)硅珠法進行比較,得出不同的檢測圖譜,驗證了采用改良硅珠法更易得到完整的STR基因分型圖譜,為硅珠法的改進提供強有力的證實。

      一、案情簡介

      2017年11月13日,安徽省天長市銅城鎮(zhèn)龍崗社區(qū)聯(lián)盟隊丁某福家被人剪鎖入室,被盜三十五只老母雞。接警后,DNA實驗人員與現(xiàn)勘人員同步到達現(xiàn)場,對現(xiàn)場進行研判,被盜現(xiàn)場為簡易搭建的牲畜棚,但由于近期陰雨連連,加之嫌疑人反偵查意識強,中心現(xiàn)場條件十分有限,技術人員立即向外勘查,在外圍現(xiàn)場的墻角處提取一份微濕布條送檢。該檢材被雨水淋濕,DNA含量較低,檢驗難度較大,對檢驗人員是極大的考驗。檢驗人員考慮到各種因素,采用了改良硅珠與常規(guī)硅珠法提取,最終檢出一完整男性STR基因分型圖譜,成功比中盜竊前科人員王某某,從而破獲系列盜竊家禽案。

      二、檢材與方法

      (一)DNA 提取

      生物樣本的采集:用剪刀直接將潮濕布條褶皺較多處剪碎,分成均等的兩份,一份置于1號離心套管采用改良硅珠法提取DNA,一份置于2號離心管采用常規(guī)硅珠法進行處理。

      (1)改良硅珠法:采用D-盾超敏DNA提取試劑盒(上?;菸纳锛夹g有限公司)。在1號離心套管中加入裂解液 180ul,99oC裂解 10min,16000r/min離心2min,棄套管后在離心液中加入1000ul吸附液(12gGuSCN 溶于 10ml 0.1mol/L Tris-HCl(pH6.4),加入 0.8ml 0.5mol/L EDTA 和 0.5ml TritomX-100),硅珠 20ul,渦旋后靜置 15min,8000r/min 離心 1min,棄上清,加入400ul漂洗液 (12g GuSCN溶于10ml 0.1mol/L Tris-HCl(pH6.4)),充分混勻后8000r/min離心1min,棄上清;重復漂洗一次;56oC金屬浴烘干沉淀物,加入20ul洗脫液,充分混勻后56oC金屬浴15min;16000r/min離心2min,取上清進行PCR。[1]

      (2)常規(guī)硅珠法:在2號離心管中加入緩沖消化體系(TES100ul,SLS20ul,PK5ul)。震蕩,水浴 3h,將水浴后的離心管,加入三倍的吸附液(375ul),震蕩,12000r/min離心2min,轉移至另一個新的3號離心管中,加入硅珠15ul,靜置15min,將靜置好的3號離心管離心(12000r/min,2min),棄上清,重復一次;加入200ul的70%冷乙醇漂洗1次,棄上清,重復一次;99oC烘干沉淀物,加入15ul純水,充分混勻后56oC金屬浴15min;12000r/min離心2min,取上清進行PCR。[2]

      (二)PCR 擴增

      擴增在Veriti System (Thermo Fisher公司,美國)上進行。使用ID plus試劑盒,10 ul擴增體系,內含模板 DNA 為 2.0ul,mix4ul,primer2ul,純水 2ul。反應條件為 95oC11min,94oC20s,59oC3min,共 28 個循環(huán);60oC11min。[3]

      (三)電泳分析

      PCR擴增產物應用ABI-3500XL型DNA序列分析儀電泳分離和激光掃描分析 (Thermo Fisher公司,美國),采用GeneMapperID-X軟件分析STR基因型。操作步驟按照試劑與儀器說明書進行。

      三、結果

      按照圖譜峰值在50RFU以上視為檢出、200RFU及以上為可用數(shù)據(jù),統(tǒng)計采用改良硅珠法和常規(guī)硅珠法所得圖譜峰值在50RFU及以上的基因座。結果顯示:采用常規(guī)硅珠法提取DNA,大片段位點丟失嚴重,未能得到完整STR基因分型圖譜,且峰值高度和平衡性欠佳(如圖1);采用改良硅珠法提取DNA,可得到16個基因座的完整STR基因分型圖譜,且峰值水平相當,分型準確(如圖2)。驗證采用改良硅珠法提取接觸性DNA更易得到完整的STR基因圖譜。

      圖1 微濕布條STR分型圖譜(常規(guī)硅珠法)

      圖2 微濕布條STR分型圖譜(改良硅珠法)

      四、討論

      隨著DNA檢驗技術的普及和發(fā)展,在各級公安機關偵查破案中發(fā)揮著殺手锏的作用,偵查員利用DNA技術破案的意識日益增強,與此同時,犯罪嫌疑人的反偵查意識也逐漸提高,遺留在現(xiàn)場中的生物檢材已由煙蒂、血跡等常規(guī)性檢材轉變?yōu)榇嬖谛问教厥獾姆浅R?guī)性生物檢材,即接觸性DNA。接觸DNA是指通過皮膚接觸遺留在客體表面的DNA,主要來源于人體皮膚脫落的上皮細胞[4]。采用常規(guī)提取方法難以獲得高質量的DNA模板。本案中的微濕檢材屬于接觸性DNA,微量生物檢材,實際檢驗時,難度較大。

      處理接觸性DNA的生物檢材方法很多,如膠帶粘取法[5]、兩步擦拭法、直接剪取法、負壓吸附法[6]、震蕩沖洗法[7],DNA檢驗技術人員根據(jù)長期積累的經驗,針對不同檢材采取不同方法。每種方法都有其優(yōu)缺點,本論文中采用直接剪取法,操作簡單,易獲得單一基因型,但是會破壞檢材的完整性,將載體置于裂解液中也會影響DNA的質量。

      在法醫(yī)DNA物證檢驗中,微濕檢材易受到水的酸堿度、溫度、微生物等未知因素的影響,DNA含量低,易于降解,加之提取和處理環(huán)節(jié)較復雜,不易檢出完整的STR基因分型。有報道稱,適當增加吸附液和硅珠量同時減少洗脫體系可提高硅珠法回收模板DNA的濃度。[8]

      硅珠法是提取和純化DNA的常用方法之一,適用于各類案件的檢材,尤其是腐敗、污穢等微量生物檢材,具有經濟、簡便、快速等優(yōu)點。硅珠法是在高濃度硫氰酸胍存在條件下,DNA被二氧化硅特異性地吸附,當條件消失后,被解離下來。由于裂解比較充分,而且硫氰酸胍的存在和漂洗過程可以將雜質及PCR抑制物除去,從而獲得純度高的DNA[9]。硅珠法可在0.5~1ul新鮮血液中提取出足以成功擴增的DNA,提取靈敏度與聚苯乙烯二乙烯基苯樹脂法相當,且不受檢材種類和條件的限制,提取時限短,適用于絕大多數(shù)案件現(xiàn)場檢材的處理。

      本實驗中采取改良硅珠法和常規(guī)硅珠法作為對照提取微量生物檢材中DNA,改良硅珠法省去繁瑣的移管步驟,減少漂洗次數(shù),大大降低了DNA的耗損;同時,適當增加吸附液及硅珠量可保證硅珠與DNA充分結合,小體系洗脫則更易提取到高濃度DNA。常規(guī)硅珠法實驗操作復雜,實驗過程中模板DNA量耗損較大,在DNA提取純化過程中易受移管、試劑劑量、漂洗步驟等因素的影響,在處理微量生物檢材方面效果欠佳[10]。

      綜上,本文實驗結果表明,采用改良硅珠法提取和純化樣本DNA,更易得到完整的STR基因分型圖譜。在犯罪現(xiàn)場,一般接觸性檢材DNA來源于脫落細胞,涉及的檢材種類很多,包括各種人體接觸的工具、衣物、電動車把手擦拭物等,DNA含量較少,較難提取。采用改良硅珠法對這些檢材進行檢驗,可以有效地減少DNA的降解,操作方便,穩(wěn)定性較好。

      猜你喜歡
      檢材離心管分型
      魔方型離心管架的設計及研發(fā)
      科技視界(2020年26期)2020-09-24 03:25:06
      失眠可調養(yǎng),食補需分型
      離心管架研究現(xiàn)狀及魔尺型離心管架的設計
      科技視界(2020年17期)2020-07-30 14:03:27
      便秘有多種 治療須分型
      燃燒條件演示實驗的新設計
      化學教學(2018年1期)2018-02-28 21:26:29
      疑難生物檢材DNA的檢驗探究
      微量接觸類生物檢材的游離DNA問題分析
      直接擴增法提取脫落細胞DNA
      海峽科學(2015年11期)2015-09-19 06:48:18
      基于分型線驅動的分型面設計研究
      頸椎病中醫(yī)辨證分型與影像探討
      安溪县| 金堂县| 尉氏县| 龙南县| 东方市| 景泰县| 铁岭市| 江都市| 上蔡县| 米脂县| 绩溪县| 陆河县| 崇仁县| 佳木斯市| 周宁县| 新宾| 云阳县| 舟山市| 北京市| 伊吾县| 札达县| 五华县| 和政县| 开阳县| 山西省| 沾益县| 河西区| 平昌县| 白银市| 金沙县| 勃利县| 克什克腾旗| 辽源市| 循化| 江口县| 丹寨县| 永顺县| 海门市| 徐汇区| 阿拉善右旗| 石家庄市|