陳紅偉 李彥明 李彥章

(新鄉(xiāng)市中心醫(yī)院心內(nèi)科，河南 新鄉(xiāng) 453000)

凝集素樣氧化低密度脂蛋白受體(LOX)-1是目前動(dòng)脈粥樣硬化疾病研究最熱門的蛋白，Pirillo等〔1,2〕研究發(fā)現(xiàn)，LOX-1可以被某些蛋白水解酶及炎性因子裂解為可溶性LOX-1并釋放入血，可作為早期診斷急性心肌梗死(AMI)的一個(gè)指標(biāo)。Inoue等〔3,4〕研究發(fā)現(xiàn)，在反映低密度脂蛋白(LDL)致動(dòng)脈粥樣硬化的作用方面，包含載脂蛋白(Apo)B的LOX-1配體(LAB)指標(biāo)更優(yōu)，而且LAB在反映LDL致動(dòng)脈粥樣硬化作用方面的效果優(yōu)于氧化LDL(ox-LDL)、LDL或氧化脂類。Misaka等〔5〕將血清中LAB和可溶性LOX(sLOX)-1兩個(gè)指標(biāo)結(jié)合，建立指標(biāo)LOX-1 Index，在急性冠脈綜合征(ACS)患者早期診斷中比sLOX-1更具有優(yōu)勢〔6〕。本文探討冠狀循環(huán)和體循環(huán)LOX-1 Index在ACS病人早期診斷中的作用。

1 材料與方法

1.1研究對象 2013年1～12月因典型胸痛來河南大學(xué)淮河醫(yī)院心內(nèi)科住院治療的患者。根據(jù)美國心臟病協(xié)會(huì)/歐洲心臟病協(xié)會(huì)(ACC/ESC)的診斷標(biāo)準(zhǔn)〔7〕和排除標(biāo)準(zhǔn)〔①入院前進(jìn)行過心肺復(fù)蘇的ACS病人；②入院前3個(gè)月內(nèi)有明顯的炎性疾病(感染性疾病、風(fēng)濕性疾病、發(fā)熱、自身免疫性疾病、肌病及肌炎進(jìn)展期等)、腦血管疾病或其他嚴(yán)重的心臟?。虎廴朐呵?個(gè)月內(nèi)服用過抗生素及炎癥抑制藥；④合并腫瘤、肝腎及其他器官功能不全；⑤入院前3個(gè)月有外科手術(shù)史，AMI病人經(jīng)靜脈溶栓及急診介入治療術(shù)后病情危重者〕，最終納入ACS 50例及臨床確診為穩(wěn)定型心絞痛(EAP)50例。ACS組平均年齡為(61.92±7.63)歲；EAP組平均年齡為(62.20±6.16)歲，ACS和EAP組男性構(gòu)成比分別為66%和58%且ACS和EAP組高血壓(84% vs 90%)、糖尿病(48% vs 52%)、血脂異常(66% vs 74%)、肥胖(28% vs 40%)和吸煙率(62% vs 54%)差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。本研究得到了河南大學(xué)淮河醫(yī)院倫理委員會(huì)的批準(zhǔn)，研究對象均知情同意。

1.2資料收集 病人入院后，詳細(xì)記錄冠心病家族史、身高、體重、吸煙史、高血壓史、糖尿病史及血脂異常等資料信息。同時(shí)根據(jù)病情，ACS患者行急診冠狀動(dòng)脈造影(CAG)，EAP患者行擇期CAG后行經(jīng)皮冠狀動(dòng)脈介入(PCI)。

1.3標(biāo)本采集 所有患者行PCI前即刻采集外周靜脈血5 ml(體循環(huán))，然后根據(jù)冠狀血管病變部位在PCI前采集冠狀動(dòng)脈病變處血液5 ml(冠狀循環(huán))，上述采集到的血液立即處理，放于-80℃冰箱內(nèi)保存待測。檢測指標(biāo)包括sLOX-1、LAB等。參照Misaka等〔5〕建立的LOX-1 Index計(jì)算方法(LOX-1 Index=LAB × sLOX-1)。

1.4主要儀器及試劑 醫(yī)用低速離心機(jī)(上海盧湘儀離心機(jī)儀器有限公司TDZ5-WS)、電熱恒溫培養(yǎng)箱〔常州潤華電器有限公司(DHP-9012)〕、全自動(dòng)酶標(biāo)讀數(shù)儀(美國Bio-RAD255)、全自動(dòng)生化分析儀(日本日立7600)、全自動(dòng)酶聯(lián)免疫分析儀〔貝克曼庫爾特公司(UniCel DxI 800)〕、384孔檢測微孔板(上海百賽生物技術(shù)有限公司)、sLOX-1試劑盒(美國R&D公司)、磷酸沖洗液(PBS)、牛血清蛋白(BSA)、HEPES緩沖液、乙二胺四乙酸(EDTA)、四甲基聯(lián)苯胺(TMB)均購自上海百賽生物技術(shù)有限公司。

1.5指標(biāo)測定 采用抗體酶聯(lián)免疫夾心法檢測sLOX-1濃度，根據(jù)購買試劑盒說明書規(guī)范操作，用全自動(dòng)酶標(biāo)讀數(shù)儀在450 nm波長下測定OD值，用6個(gè)標(biāo)準(zhǔn)孔測量值繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，通過標(biāo)準(zhǔn)計(jì)算樣品中sLOX-1濃度。根據(jù)購買的試劑盒說明進(jìn)行規(guī)范操作，用全自動(dòng)酶標(biāo)讀數(shù)儀在450 nm波長下測定OD值，用6個(gè)標(biāo)準(zhǔn)孔測量值繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，通過標(biāo)準(zhǔn)計(jì)算樣品中LAB濃度。以上實(shí)驗(yàn)均重復(fù)3次，分別取平均值。

1.6統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 應(yīng)用SPSS16.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行t檢驗(yàn)、非參數(shù)秩和檢驗(yàn)和受試者工作特征(ROC)曲線分析及Spearman分析。

2 結(jié) 果

2.1體循環(huán)和冠狀循環(huán)血液sLOX-1、LAB及LOX-1 Index水平 ACS和EAP組冠狀循環(huán)sLOX-1、LAB和LOX-1 Index水平均顯著高于體循環(huán)；ACS組冠狀循環(huán)sLOX-1、LAB和LOX-1 Index水平均分別高于EAP組，同時(shí)ACS組體循環(huán)sLOX-1、LAB和LOX-1 Index水平也均分別高于EAP組(P<0.05)。見表1。

表1 兩組體循環(huán)和冠狀循環(huán)sLOX-1、LAB及LOX-1 Index比較

與體循環(huán)比較：1)P<0.05；與ACS組比較：2)P<0.05

2.2體循環(huán)和冠狀循環(huán)血液LOX-1 Index水平相關(guān)性 ACS患者冠狀循環(huán)和體循環(huán)血液LOX-1 Index呈正相關(guān)(Rs=0.98，P<0.05)；EAP患者冠狀循環(huán)和體循環(huán)血液LOX-1 Index呈正相關(guān)(Rs=0.96，P<0.05)。

2.3ROC曲線分析LOX-1 Index在ACS早期診斷中的應(yīng)用 以患者冠狀循環(huán)或體循環(huán)LOX-1 Index 值為目標(biāo)變量，以患者是否確診為ACS(1=ACS,0=EAP)為診斷變量，冠狀循環(huán)和體循環(huán)LOX-1 Index值在ACS早期診斷中均具有良好的效果，ROC曲線下面積(AUC)分別為0.87(95%CI:0.81～0.94)和0.79(95%CI:0.71～0.88)，根據(jù)ROC曲線圖最左上角點(diǎn)為最佳截?cái)帱c(diǎn)原則，可以將冠狀循環(huán)LOX-1 Index值≥347，體循環(huán)LOX-1 Index值≥305作為ACS早期診斷的截?cái)帱c(diǎn)。

3 討 論

LOX-1是在牛的主動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞內(nèi)發(fā)現(xiàn)的〔8〕。LOX-1與ox-LDL特異性結(jié)合，促使血液循環(huán)的單核細(xì)胞轉(zhuǎn)至內(nèi)皮下，促進(jìn)平滑肌細(xì)胞和巨噬細(xì)胞吞噬脂質(zhì)，生成泡沫細(xì)胞〔9〕。LOX-1可誘導(dǎo)血管平滑肌細(xì)胞凋亡，并通過二磷酸腺苷抑制劑抑制其誘導(dǎo)的血小板聚集〔10，11〕，參與動(dòng)脈粥樣硬化從早期到后期的全過程。Murase等〔12〕發(fā)現(xiàn)，LOX-1可以被某些蛋白水解酶及炎性因子裂解為sLOX-1并釋放入血，可作為早期診斷AMI的一個(gè)指標(biāo)。

Inoue等〔3〕于2007年建立了血清LAB含量的測量標(biāo)準(zhǔn)，為研究人員從配體角度分析LDL致動(dòng)脈粥樣硬化的生物學(xué)活性提供了方法。

目前，臨床上用于心肌梗死的輔助診斷的心臟標(biāo)志物包括肌紅蛋白(Myo)、肌鈣蛋白(cTn)I、肌酸激酶同工酶(CK-MB)、超敏C反應(yīng)蛋白(hs-CRP)、sLOX-1等，單一的心臟標(biāo)志物用于臨床檢測已經(jīng)不能滿足心內(nèi)科醫(yī)生的要求，將多種生物標(biāo)志物聯(lián)合檢測能夠更好地服務(wù)于臨床。研究表明〔13〕，聯(lián)合檢測CK-MB、Myo、cTnI、hs-CRP對ACS診斷的靈敏度為100.0%，特異度為92.7%，顯著高于4種指標(biāo)的單獨(dú)診斷效率。本研究提示ACS患者冠狀動(dòng)脈血管病變過程中，LOX-1 Index比sLOX-1和LAB更具優(yōu)勢〔3，14〕，是一個(gè)ACS早期診斷的更全面綜合指標(biāo)。本研究提示冠狀循環(huán)和體循環(huán)血液LOX-1 Index值在ACS早期診斷中均有良好的效果，這與Kobayashi等〔3,6〕研究結(jié)果一致。

本研究為患者做PCI時(shí)采集冠狀動(dòng)脈病變部位的血液來代表冠狀循環(huán)，改進(jìn)了Misaka等〔5〕采集冠狀靜脈竇血液來反映冠狀循環(huán)的方法，減少了患者的痛苦，提高了依從性。雖然該方法采集的血液在反映冠狀循環(huán)的代表性不如冠狀靜脈竇血液，但本研究的結(jié)論與日本學(xué)者的結(jié)果一致，并找出了該方法采集血液中LOX-1 Index在ACS早期診斷的臨界值，所以通過采集冠狀動(dòng)脈病變部位的血液來代表冠狀循環(huán)仍具有良好的可靠性。但本研究具有一些局限性，首先由于本課題設(shè)計(jì)屬于探索性研究，樣本量相對較少；其次是研究對象納入時(shí)間跨度較長，患者就診時(shí)間和表現(xiàn)差異較大，存在選擇性偏倚。

1Pirillo A,Catapano AL.Soluble lectin-like oxidized low density lipoprotein receptor-1 as a biochemical marker for atherosclerosis related diseases〔J〕.Dis Markers,2013;35(5):413-8.

2郭瑞霞,張 曉,朱記法,等.急性冠脈綜合征患者血清可溶性血凝素氧化低密度脂蛋白受體-1和膽紅素表達(dá)水平的臨床意義〔J〕.中國老年學(xué)雜志,2014;34(7):1929-30.

3Inoue N,Okamura T,Kokubo Y,etal.LOX index,a novel predictive biochemical marker for coronary heart disease and stroke〔J〕.Clin Chem,2010;56(4):550-8.

4Okamura T,Sekikawa A,Sawamura T,etal.Series:clinical study from Japan and its reflections;LOX-1 ligrands containing apolipoprotein B and carotid intima media thickness in middle aged community dwelling us Caucasian and Japanese men〔J〕.Nihon Naika Gakkai Zasshi,2014;103(1):173-80.

5Misaka T,Suzuki S,Sakamoto N,etal.Significance of soluble lectin like oxidized LDL receptor-1 level in systemic and coronary circulation in acute coronary syndrome〔J〕.Biomed Res Int,2014;2014(649185):1-7.

6Kobayashi N,Takano M,Hata N,etal.Soluable lectin-like oxidized LDL receptor-1(sLOX-1)as a valuable diagnostic marker for rupture of thin-cap fibroatheroma:verification by optical coherence tomography〔J〕.Int J Cardiol,2013;168(4):3217-23.

7Zhang YC,Tang Y,Chen Y,etal.Oxidized low density lipoprotein and C-reactive protein have combined utility for better predicting prognosis after acute coronary syndrome〔J〕.Cell Biochem Biophys,2014;68(2):379-85.

8Sawamura T,Kume N,Aoyama T,etal.An endothelial receptor for oxidized low-density lipoprotein〔J〕.Nature,1997;386(6620):73-7.

9Thakkar S,Wang X,Khaidakov M,etal.Structure based design targeted at LOX-1,a receptor for oxidized low density lipoprotein〔J〕.Sci Rep,2015;5:16740.

10Stancel N,Chen CC,Ke LY,etal.Interplay between CRP,atherogenic LDL,and LOX-1 and its potential role in the pathogenesis of atherosclerosis〔J〕.Clin Chem,2016;62(2):320-7.

11Chu CS,Wang YC,Lu LS,etal.Eletronegative low density lipoprotein increases C-reactive protein expression in vascular endothelial cells through the LOX-1 receptor〔J〕.PLoS One,2013;8(8):e70533.

12Murase T,kume N.Identification of soluble forms of lectin-like oxidized LDL receptor-1〔J〕.Arterioscler Thromb Vasc Biol,2000;20(3):715-20.

13Sabatine MS,Morrow DA,Gibson CM,etal.Multimarker approach to risk stratification in non-ST elevation acute coronary syndromes:simultaneous assessment of troponin I,C-reactive protein,and B-type natriuretic peptide〔J〕.Circulation,2002;105(15):1760-3.

14Sawamura T,Wakabayashi I,Okamura T.LOX-1 in atherosclerotic disease〔J〕.Clin Chim Acta,2015;440:157-63.