人參飲品中人參皂甙含量的測(cè)定

◎ 龍 妍，張佳玉，劉紅梅，慈 慧

（1.國(guó)家果酒及果蔬飲品監(jiān)督檢驗(yàn)中心，吉林 通化 134001；2.吉林省產(chǎn)品質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)院，吉林 長(zhǎng)春 130021；3.吉林市產(chǎn)品質(zhì)量檢驗(yàn)院，吉林 吉林 132013）

在現(xiàn)代化的生活模式下，飲料已成為生活中不可缺少的飲品，雖說(shuō)最健康的飲品還是純水，但是在很多社交場(chǎng)合中還是不太適合使用純水作為飲品。在生產(chǎn)設(shè)備和技術(shù)高速發(fā)展的今天，縱觀國(guó)內(nèi)飲料市場(chǎng)，功能飲料、植物飲料、蛋白飲料等多類型的飲料已占主導(dǎo)地位，以至于很多的企業(yè)和產(chǎn)品都是在不斷模仿和抄襲，由此帶來(lái)的同質(zhì)化的市場(chǎng)競(jìng)爭(zhēng)也成了眾多經(jīng)銷商對(duì)于飲料市場(chǎng)最大的擔(dān)憂[1]。因此，對(duì)新產(chǎn)品的開(kāi)發(fā)也是對(duì)企業(yè)提出的新要求。

人參飲料是最近幾年才興起的產(chǎn)業(yè)，食用人參會(huì)提高人體免疫力是眾所周知的事情，在盛產(chǎn)高麗參的韓國(guó)，人參幾乎是每個(gè)韓國(guó)家庭必不可少的健身補(bǔ)品，許多人甚至是從小吃到大。但在中國(guó)，由于人參的價(jià)格過(guò)高，在市場(chǎng)上的需求還僅限于少數(shù)人群。為此，就要將人參的使用普及開(kāi)來(lái)，這也是人參飲料在中國(guó)市場(chǎng)出現(xiàn)的原因。

人參飲料是以人參或人參提取物為主要成分制成的飲料或者保健飲品，這改變了人參的食用方式，突破了傳統(tǒng)人參及其制品不便于食用、吸收率低等困局。人參飲料保持人參原有的功效，具有大補(bǔ)元?dú)狻⒁嬷前采?、緩解疲勞、生津止渴、延緩衰老、防癌抗癌等突出功效[2-3]，并且不含咖啡因、?；撬岬扰d奮劑成分，安全性高，長(zhǎng)期服用對(duì)身體無(wú)不良影響。我國(guó)人參飲料市場(chǎng)發(fā)展迅速，產(chǎn)品產(chǎn)出持續(xù)擴(kuò)張，國(guó)家產(chǎn)業(yè)政策鼓勵(lì)人參飲料產(chǎn)業(yè)向高技術(shù)產(chǎn)品方向發(fā)展，國(guó)內(nèi)企業(yè)新增項(xiàng)目投資逐漸增多。投資者對(duì)人參飲料市場(chǎng)的關(guān)注越來(lái)越密切，這使得人參飲料市場(chǎng)越來(lái)越受到各方的關(guān)注。長(zhǎng)期以來(lái)，人參的功能和價(jià)值都被大多數(shù)人所接受，但是服用上的麻煩成為制約人參產(chǎn)品廣泛應(yīng)用的主要障礙。人參飲料克服了消費(fèi)者對(duì)人參食用方法上的困難。

隨著新產(chǎn)品的產(chǎn)生，對(duì)其品質(zhì)和質(zhì)量進(jìn)行把關(guān)和檢測(cè)的方法也應(yīng)該隨之產(chǎn)生，這樣才能達(dá)到監(jiān)督管理的目的。作為產(chǎn)品質(zhì)量監(jiān)督管理部門(mén)，研究出準(zhǔn)確可靠的檢測(cè)方法對(duì)人參飲品的品質(zhì)進(jìn)行把關(guān)，才能維護(hù)消費(fèi)者的利益，確保其身心健康。

1 儀器與方法

1.1 檢測(cè)儀器與試劑

儀器：紫外可見(jiàn)光分光光度計(jì)，超聲波發(fā)生器，液相色譜儀（紫外檢測(cè)器）。

試劑：甲醇、乙腈，均為色譜純；正丁醇、濃硫酸、無(wú)水乙醇、香草醛，均為分析純；人參皂甙Re、Rg1、Rb1對(duì)照品，中國(guó)藥品生物制品檢定所提供。

1.2 樣品處理

精確量取50 g或100 g樣品（視樣品中含量而定），置蒸發(fā)皿中，在水浴上揮去部分水分（如含酒精此過(guò)程可揮去酒精），留少量濃縮后的樣品，加入50 mL水飽和正丁醇浸泡，置于超聲發(fā)生器中超聲提取30 min，轉(zhuǎn)移至分液漏斗，取正丁醇層于蒸發(fā)皿中，沸水浴蒸干，殘?jiān)眉状既芙猓ㄈ葜?0 mL容量瓶，備用。

1.3 分光光度法測(cè)定人參總皂甙

1.3.1 供試品制備

精密量取處理后的樣品50 μL，分別置于具塞比色管中，蒸干后加入8%香草醛試液0.5 mL，72%硫酸溶液5 mL，充分搖勻后于60 ℃恒溫水浴上加熱10 min，立即用冰水冷卻10 min，搖勻。以試劑做空白，用紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)于544 nm波長(zhǎng)處分別測(cè)定吸光度。

1.3.2 標(biāo)準(zhǔn)溶液制備

精密稱取人參皂甙Re對(duì)照品20 mg，置10 mL容量瓶中，加甲醇適量溶解并定容，搖勻備用。

1.3.3 標(biāo)準(zhǔn)曲線的建立

吸取人參皂甙Re標(biāo)準(zhǔn)溶液（2.0 mg/mL）10、20、30、40、50 μL，于具塞比色管中，具體操作同1.3.1。得線性方程Y=0.005 0X+0.004 0，相關(guān)系數(shù)R2=0.998 2，表明人參皂甙Re含量在20～100 μg有良好的線性關(guān)系。標(biāo)準(zhǔn)曲線如圖1所示。

圖1 人參皂甙Re標(biāo)準(zhǔn)曲線圖

1.3.4 回收率試驗(yàn)

準(zhǔn)確吸取人參皂甙Re標(biāo)準(zhǔn)溶液（2.0 mg/mL）10、25、50 μL分別置于100 mL容量瓶，用已知含量的人參飲品稀釋定容（分別含人參皂甙Re 20、50、100 μg），采用1.2中的方法對(duì)3個(gè)樣品進(jìn)行處理，然后再以1.3方法測(cè)定，結(jié)果見(jiàn)表1。

表1 不同含量人參皂甙Re的測(cè)定值與回收率表

由表1可見(jiàn)知，本方法的回收率為92.5%～101.7%，表明采用本方法測(cè)定飲品中人參總皂甙含量的準(zhǔn)確性較高。對(duì)同一濃度的樣品重復(fù)測(cè)定5次，以吸光度值計(jì)算其相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差CV%=4.2%

1.4 高效液相色譜法測(cè)定人參皂甙單體Rg1、Re、Rb1含量

參考《中華人民共和國(guó)藥典》2015版一部中高效液相色譜法測(cè)定人參中皂甙單體的方法[4]，對(duì)其色譜分析條件進(jìn)行改進(jìn)優(yōu)化，通過(guò)對(duì)波長(zhǎng)、流動(dòng)相、流速、洗脫方式的優(yōu)化確定人參皂甙單體Rg1、Re、Rb1色譜分析條件具體如下：島津LC-20A液相色譜儀-紫外檢測(cè)器，色譜柱（4.6 mm×150 mm，5 μm）；流動(dòng)相，乙腈∶水（85∶15）；梯度洗脫；檢測(cè)波長(zhǎng)203 nm；流速1.0 mL/min；柱溫40 ℃；進(jìn)樣量10 μL。

分別將Rg1、Re、Rb1混合標(biāo)準(zhǔn)溶液和經(jīng)1.2處理的樣品過(guò)0.45 μm的微孔濾膜過(guò)濾，在上述色譜條件下，得到色譜圖，如圖2、3所示。

圖2 人參皂甙單體Rg1、Re、Rb1混標(biāo)色譜圖

圖3 供試品中人參皂甙單體Rg1、Re、Rb1色譜圖

1.5 方法學(xué)考察

①精密度實(shí)驗(yàn)：取供試品溶液，連續(xù)進(jìn)樣5次，記錄色譜圖，相對(duì)保留時(shí)間RSD＜0.8%，相對(duì)峰面積RSD為2.1%～3.3%，表明儀器精密度良好。②穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)：取供試品溶液，分別在0、2、4、8、12、24 h進(jìn)樣，記錄色譜圖，相對(duì)保留時(shí)間RSD＜0.76%，相對(duì)峰面積RSD為1.78%～3.11%，表明供試品在24 h內(nèi)穩(wěn)定。③重現(xiàn)性實(shí)驗(yàn)：相同條件下，制備5份供試品溶液，進(jìn)樣，記錄色譜圖，相對(duì)保留時(shí)間RSD＜0.83%，峰面積RSD為2.3%～4.1%，表明方法重現(xiàn)性良好。④回收率實(shí)驗(yàn)：已知含量的供試品溶液中，加入人參皂甙Re、Rg1、Rb1混標(biāo)對(duì)照品適量，按1.4色譜條件進(jìn)行色譜分析，測(cè)定人參皂甙Rg1、Re、Rb1回收率分別為95.3%、96.5%、98.9%，RSD為0.56%～3.12%。

2 結(jié)果與討論

本文中的方法能有效檢測(cè)人參飲品中的皂甙含量，該方法在以往方法的基礎(chǔ)上做了進(jìn)一步的優(yōu)化，克服了高效液相色譜法出峰時(shí)間長(zhǎng)的缺點(diǎn)，調(diào)整了色譜條件及流動(dòng)相中有機(jī)溶劑配比，在不影響檢測(cè)結(jié)果的基礎(chǔ)上縮短了出峰時(shí)間，提高了工作效率。該方法具有準(zhǔn)確高效的特點(diǎn)，能夠運(yùn)用于人參飲品中皂苷含量的檢測(cè)和研究工作。

[1]智研咨詢.2014—2019年中國(guó)人參飲料市場(chǎng)深度調(diào)查與產(chǎn)業(yè)競(jìng)爭(zhēng)現(xiàn)狀報(bào)告[R].專業(yè)市場(chǎng)調(diào)研報(bào)告網(wǎng)站，2015.

[2]張前進(jìn).人參的化學(xué)成分和藥理活性[J].光明中醫(yī)，2011，26（2）：368-369.

[3]LW Qi，CZ Wang，CS Yuan. American ginseng：Potential structure function relationship in cancer chemoprevention[J].Biochemical Pharmacology，2010，80（7）：947-954.

[4]國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典2015年版一部[M].北京：中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，2015.