王愛青，何 媛

(1.洛陽市食品藥品檢驗所，河南 洛陽 471023； 2.鄭州大學(xué)，河南 鄭州 450001)

糖尿病是非酒精性脂肪肝發(fā)生的獨立危險因素。II型糖尿病患者糖、脂代謝紊亂，血液中游離脂肪酸含量增加，從而引起肝臟內(nèi)三酰甘油增多，造成肝臟代謝紊亂，形成非酒精性脂肪肝。臨床研究[1-3]表明：Ⅱ型糖尿病與肝臟脂代謝紊亂有密切關(guān)系，糖尿病患者中非酒精性脂肪肝的患病率近半。因此，尋找治療Ⅱ型糖尿病患者非酒精性脂肪肝具有重要的臨床意義。枸杞是茄科植物，花紫、果紅，其果實枸杞子是我國傳統(tǒng)的名貴中藥材，具有滋腎補髓、養(yǎng)肝明目的功效?，F(xiàn)代醫(yī)學(xué)認(rèn)為其可以調(diào)節(jié)機體免疫力、抑制腫瘤生長和細(xì)胞突變、延緩衰老及抗脂肪肝等藥理作用[4]。枸杞多糖作為枸杞子的主要活性成分之一，具有增強免疫力、抗癌、抗衰老、保護視神經(jīng)、防止細(xì)胞凋亡等作用[5]。本實驗研究了枸杞多糖對II型糖尿病大鼠非酒精性脂肪肝的干預(yù)作用，以期為臨床用藥提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 動 物

6周齡純系雄性Wistar 大鼠58只，體質(zhì)量140～160 g，清潔級，購自河南省實驗動物中心，許可證號：SCXK(豫)2016-0024。

1.2 藥品、試劑與儀器

枸杞子，購自安徽省亳州市藥材總公司中藥公司。枸杞多糖，自制，方法如下：精密稱取枸杞3 000 g，料液比1∶35，溫度90 ℃，pH值 11，浸提3 h，提取2次，合并提取液，加3倍體積 950 mL/L乙醇沉淀6 h時，Sevage 法和DATE-纖維素法純化，濃縮干燥，檢測純度為68.6%。使用時以無菌生理鹽水配置為混懸液。鏈脲佐菌素(STZ)，美國Sigma公司產(chǎn)品，批號 8008193473；總膽固醇(TC)試劑盒，深圳市寶安康生物技術(shù)有限公司產(chǎn)品，批號170402；3 g/L 膽酸鈉及膽固醇,鄭州利偉生物實業(yè)有限公司產(chǎn)品，批號170504。5424R型低溫高速離心機，德國艾本德股份公司產(chǎn)品；UV-1600型紫外可見分光光度計，上海美譜達儀器有限公司產(chǎn)品；INFORS 全自動生化分析儀，北京桑翌實驗儀器研究所產(chǎn)品。

1.3 動物分組、模型的建立與給藥

隨機選出10只大鼠為正常對照組，給予常規(guī)飼料喂養(yǎng)；其余48只大鼠給予高脂飼料喂養(yǎng)，4周后，給藥STZ(35 μg/g)一次性腹腔注射，3 d后測空腹血糖。以空腹血糖值>11.1 mmol/L確定為II型糖尿病模型[6]。將造模成功的大鼠隨機分為模型對照組、枸杞多糖高劑量組、枸杞多糖中劑量組與枸杞多糖低劑量組，每組10只，并持續(xù)給予高脂飼料至實驗結(jié)束。枸杞多糖高、中、低劑量組分別給予枸杞多糖混懸液300，150，75 μg/g灌胃，正常對照組和模型對照組給予等體積生理鹽水，1 d 2次，持續(xù)14周。每周稱量體質(zhì)量1次，并隨體質(zhì)量調(diào)整給藥劑量。

1.4 檢測指標(biāo)

灌胃結(jié)束后的第2天稱量大鼠體質(zhì)量，空腹于尾靜脈取血；摘除肝臟并稱量質(zhì)量，計算肝重指數(shù)；制作肝臟病理切片，光鏡下進行組織病理學(xué)觀察。采用全自動生化分析儀測定血清丙氨酸轉(zhuǎn)移酶(ALT)、天冬氨酸轉(zhuǎn)移酶(AST)、血清三酰甘油(TG)、總膽固醇(TC)、空腹血糖(FBG)及游離脂肪酸(FFA)。

1.5 統(tǒng)計學(xué)方法

2 結(jié) 果

2.1 各組大鼠體質(zhì)量、肝濕重與肝重指數(shù)對比

與模型對照組對比，枸杞多糖中劑量組、高劑量組大鼠體質(zhì)量升高，枸杞多糖各劑量組大鼠肝濕重與肝重指數(shù)降低，差別有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05或P<0.01)。見表1。

組 別動物數(shù)體質(zhì)量/g肝濕重/g肝重指數(shù)/%正常對照組10508．7±16．4??25．8±1．97??5．01±0．32??模型對照組10376．4±17．831．2±2．03 7．94±0．33枸杞多糖低劑量組10387．4±16．928．97±2．08? 5．94±0．25??枸杞多糖中劑量組10413．8±17．3??26．39±2．13?? 5．67±0．29??枸杞多糖高劑量組10432．9±16．5??25．6±2．17??5．32±0．35??

注：與模型對照組對比，*P<0.05，**P<0.01

2.2 各組大鼠FBG、FFA、ALT、AST、TG和TC水平對比

與模型對照組對比，枸杞多糖各劑量組大鼠FBG、FFA、ALT、AST、TG水平下降，枸杞多糖中劑量組、高劑量組大鼠TC水平下降，差別有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05或P<0.01)。見表2。

組 別FBG/(mmol·L-1)FFA/(mmol·L-1)ALT/(U·L-1)AST/(U·L-1)TG/(mmol·L-1)TC/(mmol·L-1)正常對照組4．54±0．68??1．10±0．21??50．16±4．29??178．35±9．56??1．08±0．05??1．67±0．20??模型對照組26．32±2．213．64±0．28171．20±9．56301．26±8．322．16±0．114．20±0．21枸杞多糖低劑量組15．34±3．61??2．13±0．49??131．66±7．43??241．98±7．48??1．74±0．16??4．12±0．16枸杞多糖中劑量組12．88±2．69??1．98±0．52??123．66±7．95??234．73±7．15??1．46±0．11??3．92±0．14??枸杞多糖高劑量組9．32±2．36??1．69±0．21??98．78±7．69??193．58±6．23??1．25±0．14??3．81±0．17??

注：與模型對照組對比，*P<0.05，**P<0.01

2.3 各組大鼠肝臟組織病理變化

正常對照組:肝小葉結(jié)構(gòu)正常，肝細(xì)胞形態(tài)飽滿，大小均勻一致，肝細(xì)胞分界清析并以中央靜脈為中心向四周呈放射狀整齊排列。模型對照組：肝小葉結(jié)構(gòu)明顯紊亂，肝細(xì)胞索模糊，肝竇消失，肝細(xì)胞高度氣球樣變，呈現(xiàn)以大泡性為主的脂肪性變化，為重度脂肪肝改變。枸杞多糖各劑量組大鼠肝細(xì)胞索模糊，肝竇狹窄，肝細(xì)胞內(nèi)脂滴減少，以大、小泡性混雜，為中度脂肪肝改變。見圖1。

A.正常對照組；B.模型對照組； C.枸杞多糖高劑量組； D.枸杞多糖中劑量組； E.枸杞多糖低劑量組圖1 各組大鼠肝臟組織病理學(xué)變化(HE染色，×200)

3 討 論

糖、脂代謝紊亂在Ⅱ型糖尿病非酒精性脂肪肝的發(fā)生、發(fā)展中發(fā)揮著重要作用，但因治療時程較長，嚴(yán)重影響著患者的生活質(zhì)量和健康狀況[7]。枸杞子的藥理和保健作用與枸杞多糖的含量有很大關(guān)系。枸杞多糖是枸杞子中重要的活性成分之一，具有抗氧化、抗衰老、提高免疫力、抗腫瘤、保肝、降血壓、降血糖、降血脂等多種功能，且無任何毒副作用[5]。馬藝鑫等[8]研究揭示：枸杞多糖對由于雌激素降低而引起的脂代謝紊亂有改善作用；但針對其對II型糖尿病大鼠非酒精性脂肪肝的干預(yù)作用研究較少。因此，枸杞多糖降糖作用的相關(guān)機制有待進一步研究。

本實驗參考相關(guān)文獻[9]，通過高脂飲食與小劑量STZ建立了II型糖尿病非酒精性脂肪肝的大鼠模型，與正常對照組對比，模型對照組大鼠體質(zhì)量降低，肝重指數(shù)升高，且ALT、AST、TG、TC、FBG和FFA水平均有所升高，且差別有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01)。枸杞多糖高、中、低劑量組大鼠經(jīng)灌胃枸杞多糖混懸液14周，體質(zhì)量升高，肝功能好轉(zhuǎn)，血糖、血脂水平降低；肝細(xì)胞病理組織學(xué)表現(xiàn)改善。結(jié)果表明：枸杞多糖可改善肝臟脂質(zhì)代謝，減緩大鼠II型糖尿病非酒精性脂肪肝的病變，但其機制有待進一步研究。

[1]鄭歡,洪士聰,余杰,等.貞清方對2型糖尿病大鼠非酒精性脂肪肝病變及肝臟鹽誘導(dǎo)激酶1表達的影響[J].中國中西醫(yī)結(jié)合雜志,2014,34(7):846-851.

[2]張珊,張潔,傅力,等.2型糖尿病患者血清脂聯(lián)素與肝臟脂肪含量的相關(guān)性研究[J].國際內(nèi)分泌代謝雜志,2017,37(3):155-158.

[3]李衛(wèi)東,傅坤發(fā),連燕舒,等.成人非酒精性脂肪肝與2型糖尿病發(fā)病關(guān)系的前瞻性隊列研究[J].中國全科醫(yī)學(xué),2015,18 (28):3426-3429.

[4]任奕.枸杞多糖提取純化工藝研究進展[J].農(nóng)業(yè)科技與裝備,2015,257(11):47-48.

[5]張芳,郭盛,錢大瑋,等.枸杞多糖的提取純化與分子結(jié)構(gòu)研究進展及產(chǎn)業(yè)化開發(fā)現(xiàn)狀與前景分析[J].中草藥,2017,48(3):424-431.

[6]何方平.非酒精性脂肪性肝病的治療:歐洲肥胖-2型糖尿病-消化臨床實踐指南解讀[J].中華肝臟病雜志,2017,25(2):119-121.

[7]劉如.2型糖尿病合并脂肪肝的相關(guān)因素分析[J].糖尿病新世界,2016,19(3):57-58.

[8]馬藝鑫,宋囡,賈連群,等.枸杞多糖改善去卵巢大鼠脂質(zhì)代謝紊亂的作用研究[J].時珍國醫(yī)國藥,2017,28(4):774-777.

[9]朱紅霞,鄧曉龍,高靜,等.利拉魯肽對糖尿病合并脂肪肝大鼠的脂代謝相關(guān)基因表達的影響[J].中國臨床研究,2017,30(1):7-10.