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      中科院動物所開發(fā)新型基因組編輯工具CRlSPR/Cas12b

      2018-03-18 09:27:35
      首都食品與醫(yī)藥 2018年24期
      關鍵詞:基因治療哺乳動物堿基

      近年,CRISPR基因編輯技術及其相關應用成為生命科學領域備受關注的熱點研究方向?;谶@種技術,科學家們可高效、快速、便捷地對感興趣的基因進行編輯,從而在基礎科研、農業(yè)和醫(yī)學的發(fā)展中具有重要應用。

      目前CRISPR系統(tǒng)中有兩類效應蛋白家族(Cas9和Cas12a/Cpf1)被成功改造成哺乳動物及其他模式生物的基因組編輯工具??茖W家們利用Cas9系統(tǒng)有效地實現(xiàn)了哺乳動物基因組的編輯,并帶動了基因編輯領域的迅猛發(fā)展,將基因編輯技術成功拓展到基因轉錄表達調控、表觀遺傳修飾、全基因組功能篩選、堿基編輯、基因組成像和細胞譜系追蹤等多種生物學應用。Zhang F等人在2015年發(fā)現(xiàn)并改造的Cas12a(又稱為Cpf1)系統(tǒng),也能實現(xiàn)哺乳動物等多個物種的基因組編輯。與此同時,科學家們也在一直致力于新的基因編輯系統(tǒng)的建立,尤其是更適合基因治療使用的工具系統(tǒng)。

      近年來鑒定出的一個新的CRISPR系統(tǒng)——Cas12b(又稱為C2c1),因其嗜高溫的特性沒能應用于基因組編輯。中國科學院動物研究所研究團隊通過系統(tǒng)挖掘,成功地鑒定出若干能在人體生理溫度工作的Cas12b/C2c1酶。經過系統(tǒng)改造,兩種Cas12b/C2c1酶被成功開發(fā)成為哺乳動物基因組編輯工具,能夠編輯人類細胞基因組并應用于制備動物疾病模型。這些Cas12b/C2c1是雙RNA導向的核酸酶,識別5'-TTN的PAM序列,切割DNA后產生粘性末端。進一步改造可以將這些Cas12b/C2c1酶用于基因組的激活等延展應用。

      與Cas9和Cas12a/Cpf1酶相比,Cas12b/C2c1酶有若干優(yōu)勢與特點:①Cas12b/C2c1比應用最為廣泛的SpCas9和Cas12a/Cpf1更小,因此更容易用于需要在體遞送的基因治療。②Cas12b/C2c1能夠在寬廣的溫度范圍和pH范圍保持高的酶活性,有望適用于具有不同生理溫度的多個物種。同時與SpCas9相比,Cas12b/C2c1核糖核酸酶(RNP)在人血漿中更穩(wěn)定。③Cas12b/C2c1很難耐受向導RNA與靶DNA之間的堿基錯配,因此比SpCas9和Cas12a/Cpf1的脫靶效應更小,這意味著它在進行基因組編輯時更加安全。針對這項新技術,該研究團隊已于一年前提交了專利申請,并正在開發(fā)這項技術在基因治療中的應用。

      (本刊訊)

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