馮亞萍 孔 杰 羅 坤 欒 生 李旭鵬 史曉麗曹家旺 王明珠 王 軍 董麗君 孟憲紅①

(1. 農(nóng)業(yè)部海洋漁業(yè)可持續(xù)發(fā)展重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室 中國(guó)水產(chǎn)科學(xué)研究院黃海水產(chǎn)研究所 青島 266071；2. 青島海洋科學(xué)與技術(shù)國(guó)家實(shí)驗(yàn)室海洋漁業(yè)科學(xué)與食物產(chǎn)出過程功能實(shí)驗(yàn)室 青島 266071；3. 上海海洋大學(xué)水產(chǎn)與生命學(xué)院 上海 201306)

白斑綜合征病毒(White spot syndrome virus,WSSV)是迄今對(duì)蝦養(yǎng)殖業(yè)危害最大的一種病毒。其具有很強(qiáng)的感染力，被感染對(duì)蝦在 3～10 d內(nèi)的死亡率高達(dá)100%，致使全球?qū)ξr養(yǎng)殖業(yè)遭受了巨大的經(jīng)濟(jì)損失(薛暉等, 2010; Cavalliet al, 2008)。為了解和控制疾病的發(fā)生，減少經(jīng)濟(jì)損失，諸多學(xué)者投身于對(duì)蝦WSSV的研究中，探究 WSSV的防治措施(閆冬春,2006)。然而，這些方法都不能有效控制WSSV的大規(guī)模暴發(fā)(Verbruggenet al, 2016)。病毒的大量增殖以及疫情大規(guī)模暴發(fā)受許多因素的影響，包括傳播媒介、宿主種類以及外界環(huán)境等，其中，溫度與白斑綜合征發(fā)生密切相關(guān)(李侃等, 2013)。

凡納濱對(duì)蝦(Litopenaeus vannamei)和斑節(jié)對(duì)蝦(Penaeus monodon)在人工注射感染W(wǎng)SSV后，其病毒復(fù)制的時(shí)間和抵抗力存在明顯差異(孫成波等,2006)。中國(guó)明對(duì)蝦(Fenneropenaeus chinensis)和日本囊對(duì)蝦(Marsupenaeus japonicus)人工感染W(wǎng)SSV后，日本囊對(duì)蝦的存活時(shí)間長(zhǎng)于中國(guó)明對(duì)蝦(Jianget al,2006)。蓋春雷等(2013)研究發(fā)現(xiàn)，在人工投喂感染W(wǎng)SSV后，中國(guó)明對(duì)蝦比日本囊對(duì)蝦的發(fā)病時(shí)間早并且發(fā)病率高。本文研究凡納濱對(duì)蝦與中國(guó)明對(duì)蝦在不同溫度條件下人工感染W(wǎng)SSV后的存活時(shí)間、累積死亡率以及對(duì)蝦肌肉內(nèi)的病毒載量變化情況，以期闡明不同溫度條件下這 2種對(duì)蝦抗WSSV性能的差異，可為實(shí)踐中優(yōu)化養(yǎng)殖條件和選育策略，以及為減少和控制對(duì)蝦疾病的暴發(fā)提供參考。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)材料

實(shí)驗(yàn)在中國(guó)水產(chǎn)科學(xué)研究院黃海水產(chǎn)研究所對(duì)蝦性狀測(cè)試車間進(jìn)行。實(shí)驗(yàn)所用凡納濱對(duì)蝦群體來自河北海壬水產(chǎn)種業(yè)科技有限公司，為凡納濱對(duì)蝦新品種"壬海1號(hào)"；中國(guó)明對(duì)蝦群體來自青島海水養(yǎng)殖引種育種中心的"黃海2號(hào)"。選取凡納濱對(duì)蝦平均體長(zhǎng)和體重約為48.99 mm和1.34 g，中國(guó)明對(duì)蝦平均體長(zhǎng)和體重約為38.82 g和0.41 g，數(shù)量均為1200尾。實(shí)驗(yàn)用水為經(jīng)砂濾的自然海水，海水鹽度為 30±1。養(yǎng)殖水箱體積為130 L，保證24 h充氣。實(shí)驗(yàn)前暫養(yǎng)8 d，每日投喂 3次(06:00、14:00、22:00)配合飼料(日投餌量占對(duì)蝦總體重3%～5%)，吸污1次，換水1次(約為50%)。實(shí)驗(yàn)前2種對(duì)蝦各隨機(jī)抽取3尾對(duì)蝦經(jīng)絕對(duì)實(shí)時(shí)熒光定量RT-PCR檢測(cè)其體內(nèi)WSSV病毒載量，結(jié)果均為陰性。文中L代表凡納濱對(duì)蝦，F(xiàn)代表中國(guó)明對(duì)蝦。

1.2 WSSV毒餌的制備

取甲殼有明顯白斑、發(fā)病瀕死的對(duì)蝦肌肉組織，并加入可食用紅色素，在充分預(yù)冷的組織勻漿機(jī)中攪拌，制成混合均勻、顏色醒目的毒餌。其制備過程須在低溫環(huán)境中快速進(jìn)行，–80℃冰箱保存。經(jīng)實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)毒餌WSSV拷貝數(shù)，毒餌病毒載量為 1×106copies/mg。

1.3 分組及管理

凡納濱對(duì)蝦與中國(guó)明對(duì)蝦各設(shè)置 3個(gè)溫度環(huán)境(24℃、28℃和32℃)，每個(gè)溫度各設(shè)置3個(gè)平行實(shí)驗(yàn)組和1個(gè)空白對(duì)照組，每組各100尾。實(shí)驗(yàn)前暫養(yǎng)期間，海水自然溫度為 24℃，28℃和 32℃組均用加熱棒進(jìn)行升溫，每天升溫 0.5℃，直至各組水溫均達(dá)到實(shí)驗(yàn)所需溫度，并且每日均用相應(yīng)溫度的海水分別進(jìn)行換水處理。

1.4 人工飼喂感染

飼喂毒餌前，對(duì)蝦饑餓處理6 h，保證其胃腸排空，用 WSSV毒餌進(jìn)行人工口飼感染。分別將不同實(shí)驗(yàn)組的蝦撈出放入單獨(dú)容器中，將新鮮制備的毒餌置于冰上，用鑷子夾取毒餌(約10 mg)輕輕送至對(duì)蝦口器處，待抱食后的對(duì)蝦胃部出現(xiàn)明顯的紅色，將其放回養(yǎng)殖水箱；對(duì)照組飼喂經(jīng)檢驗(yàn)為 WSSV陰性的健康對(duì)蝦肌肉。飼喂完畢后，正常投餌、換水，觀察對(duì)蝦死亡情況。

1.5 樣品采集及處理

實(shí)驗(yàn)開始分別在 12、24、48、72、96、120、144、168 h共8個(gè)時(shí)間點(diǎn)活體取樣，每組各取3尾對(duì)蝦肌肉組織用于檢測(cè)其病毒載量。第15天，在32℃組再各取3尾對(duì)蝦肌肉組織(24℃和28℃兩組對(duì)蝦已全部死亡)，并置于–80℃保存，實(shí)驗(yàn)共進(jìn)行15 d。

1.6 WSSV載量檢測(cè)方法

取 8個(gè)時(shí)間點(diǎn)的各組對(duì)蝦肌肉組織按照王偉繼(2008)的方法進(jìn)行DNA提取。DNA經(jīng) 1%的瓊脂糖凝膠電泳，利用凝膠成像系統(tǒng)(BioImaging Systems)檢測(cè)其完整性，使用超微量紫外分光光度計(jì)(Biodropsis BD-2000)測(cè)定DNA質(zhì)量及濃度，并將其稀釋至40 ng/μl。WSSV載量測(cè)定采用TaqMan實(shí)時(shí)熒光定量PCR法(Durandet al, 2002)，目標(biāo)片段長(zhǎng)度為69 bp，引物及探針由生工生物工程(上海)股份有限公司合成。熒光定量 PCR 反應(yīng)體系(20 μl)：1×Premix ExTaqTM(Probe qPCR)、正反向引物各 0.25 μmol/L(表1)、ROX Reference DyeⅡ 0.25 μmol/L、探針 0.125 μmol/L、病毒 DNA 模板2 μl，滅菌雙蒸水補(bǔ)足體積。PCR反應(yīng)程序：95℃預(yù)變性 10 s；95℃變性 5 s，60℃退火及延伸 34 s；共40個(gè)PCR循環(huán)。以本實(shí)驗(yàn)室自行制備含有目的片段的重組質(zhì)粒 pUCm-T/WSSV69為標(biāo)準(zhǔn)品，將 WSSV標(biāo)準(zhǔn)品進(jìn)行10倍系列梯度稀釋，共7個(gè)梯度，分別為(1.02×102)～(1.02×108) copies/μl，無菌雙蒸水作為陰性對(duì)照，每個(gè)稀釋度設(shè)置3個(gè)平行，用作陽(yáng)性對(duì)照及標(biāo)準(zhǔn)曲線的構(gòu)建。每個(gè)DNA樣品平行檢測(cè)3次，取其平均值作為該樣品的WSSV載量。

表1 實(shí)驗(yàn)所用引物Tab.1 PCR primers used in this study

1.7 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)及分析

從實(shí)驗(yàn)出現(xiàn)第1尾對(duì)蝦死亡開始，每隔1 h進(jìn)行觀察，撈出死亡對(duì)蝦并記錄其死亡時(shí)間、組別、體長(zhǎng)和體重，裝入取樣管并放置于–20℃冰箱中，直至實(shí)驗(yàn)結(jié)束。統(tǒng)計(jì)感染W(wǎng)SSV后每組對(duì)蝦的平均存活時(shí)間，結(jié)果表示為平均值±標(biāo)準(zhǔn)差(Mean±SD)。采用 SPSS 19.0軟件和Origin 9.0進(jìn)行數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析，并用單因素方差(One-way ANOVA)分析對(duì)蝦平均存活時(shí)間和體內(nèi)肌肉組織病毒載量的差異。

2 結(jié)果

2.1 WSSV感染后對(duì)蝦各性狀描述性統(tǒng)計(jì)

經(jīng)WSSV感染后，2種對(duì)蝦24℃組和28℃組死亡率均為100%。L-24℃組和F-24℃最大存活時(shí)間分別為324 h和214 h，L-28℃和F-28℃最大存活時(shí)間分別為198 h和130 h，2種對(duì)蝦28℃組最大存活時(shí)間均小于24℃組；而L-32℃和F-32℃截至實(shí)驗(yàn)結(jié)束，均有存活對(duì)蝦，存活率分別為45.74%和23.47%。24℃組和 28℃組中凡納濱對(duì)蝦最大存活時(shí)間均長(zhǎng)于中國(guó)明對(duì)蝦；在 32℃組中，凡納濱對(duì)蝦存活率大于中國(guó)明對(duì)蝦(表2)。

2.2 WSSV感染后各組對(duì)蝦到達(dá)不同死亡率的時(shí)間

L-24℃和 F-24℃、L-28℃和 F-28℃和 L-32℃和F-32℃各組到達(dá)死亡率為10%的時(shí)間分別為108 h和48 h、68 h和38 h、128 h和38 h；到達(dá)死亡率為50%的時(shí)間分別為178 h和98 h、98 h和74 h、292 h和78 h。在相同溫度、相同死亡率時(shí)，凡納濱對(duì)蝦的存活時(shí)間均大于中國(guó)明對(duì)蝦。

凡納濱對(duì)蝦和中國(guó)明對(duì)蝦到達(dá)相同死亡率時(shí)的時(shí)間，28℃組均小于24℃組和32℃組。中國(guó)明對(duì)蝦32℃組到達(dá)不同死亡率時(shí)的時(shí)間均小于24℃組(圖1)。

2.3 WSSV感染后各組對(duì)蝦不同時(shí)間段死亡尾數(shù)

在 24℃組中，L-24℃組和 F-24℃組第 2天死亡尾數(shù)分別為4尾和23尾；F-24℃組第3天死亡尾數(shù)較高，第4天達(dá)到死亡高峰，為56尾；L-24℃組前4 d死亡尾數(shù)一直較少，到第5天出現(xiàn)死亡高峰，為33尾；F-24℃組從第5～8天死亡數(shù)量持續(xù)下降，至第9天全部死亡；L-24℃組第6～9天死亡數(shù)量持續(xù)保持較高的水平(平均值約為25尾)，第10天迅速下降，到第15天全部死亡(圖2上)。

表2 凡納濱對(duì)蝦和中國(guó)明對(duì)蝦經(jīng)WSSV感染后各性狀描述性統(tǒng)計(jì)Tab.2 The characteristics of L. vannamei and F. chinensis after WSSV infection

圖1 不同溫度下2種對(duì)蝦WSSV感染后到達(dá)不同累積死亡率的時(shí)間Fig.1 The time vs mortality of two shrimps after the WSSV infection at different temperature

圖2 WSSV感染后不同時(shí)間段對(duì)蝦死亡數(shù)量Fig.2 The time point vs death of shrimps after the WSSV infection

在 28℃組中，L-28℃組和 F-28℃組第 2天死亡尾數(shù)分別為7尾和35尾；F-28℃組第3天死亡尾數(shù)急劇上升，到第4天達(dá)到死亡高峰，為80尾；L-28℃組第3天死亡尾數(shù)急劇上升，到第5天達(dá)到死亡高峰，為84尾；第6天2組死亡尾數(shù)均迅速下降，L-28℃組到第7天全部死亡，F(xiàn)-28℃組到第10天全部死亡(圖2 中)。

在 32℃組中，L-32℃組從第 1～7天的死亡尾數(shù)保持較低水平，第8天開始上升，到第10天達(dá)到死亡高峰，為28尾；F-32℃組死亡尾數(shù)從第2天迅速上升，到第4天達(dá)到死亡高峰，為71尾，第7天后無死亡對(duì)蝦(圖2下)。

2.4 WSSV感染后各組對(duì)蝦累積死亡率

在24℃組中，L-24℃組和F-24℃組在3 d時(shí)累積死亡率分別為3.81%和24.06%；8 d時(shí)分別達(dá)到56.57%和 99.00%；2組分別在 14 d和 9 d累積死亡率達(dá)到100%。在28℃組中，L-28℃組和F-28℃組在3 d時(shí)累積死亡率分別為 13.36%和 49.32%；5 d時(shí)分別達(dá)到85.74%和97.54%；2組分別在9 d和6 d累積死亡率達(dá)到100%。在32℃組中，L-32℃組和F-32℃組在3 d時(shí)累積死亡率分別為5.21%和39.23%；4 d分別達(dá)到8.07%和71.51%；到14 d時(shí)，2組累積死亡率分別為54.26%和 76.53%(圖3)。

圖3 WSSV感染后對(duì)蝦累積死亡率Fig.3 The cumulative mortality of shrimps after the WSSV infection

2.5 WSSV感染后各組對(duì)蝦肌肉組織內(nèi)病毒載量

在24℃組中，L-24℃組和F-24℃組在24 h之前對(duì)蝦肌肉組織病毒載量分別為(8.61×102±1.08×103)和(9.74×101±6.70×101) copies/ng DNA；2 d 時(shí)，L-24℃組為(8.12×102±1.01×103) copies/ng DNA，F(xiàn)-24℃組已達(dá)到(2.45×106±2.92×106) copies/ng DNA，2 組差異顯著(P＜0.05)；至 6 d，2 組分別達(dá)到(2.97×106± 7.44×106)和(8.08×106±3.22×106) copies/ng DNA，差異極顯著(P＜0.01)。

在28℃組中，L-28℃組和F-28℃組在24 h對(duì)蝦肌肉組織病毒載量分別為(1.65×102±1.92×102)和(1.23×103±1.73×103) copies/ng DNA，2 組差異不顯著(P＞0.05)；F-28℃組在2 d首先達(dá)到(1.51×106±2.49×106)copies/ng DNA，L-28℃組在 4 d 達(dá)到(4.40×106±2.31×106) copies/ng DNA；至 6 d，L-28℃組和 F-28℃組分別達(dá)到(6.73×106±1.49×106)和(1.20×107±6.15×105)copies/ng DNA，2組差異極顯著(P＜0.01)。

在32℃組中，L-32℃組和F-32℃組在前48 h對(duì)蝦肌肉組織病毒載量較低；F-32℃組在3 d首先達(dá)到(5.53×104±4.78×104) copies/ng DNA；L-32℃組 5 d 達(dá)到(1.04×104±1.12×104) copies/ng DNA；至 15 d，L-32℃組和F-32℃組分別為(5.18×103±4.32×103)和(3.78×104±8.97×103) copies/ng DNA，2 組差異顯著(P＜0.05)(圖4)。

圖4 WSSV感染后對(duì)蝦肌肉組織病毒載量變化Fig.4 The change of viral load in muscle tissue of shrimps after WSSV infection

3 討論

在感染對(duì)蝦的眾多病原中，WSSV的危害最為嚴(yán)重(Escobedo-Bonillaet al, 2007)。研究不同種類對(duì)蝦對(duì) WSSV的敏感性，對(duì)于蝦的遺傳選育有重要意義(劉慶慧等, 2005)。現(xiàn)已有中國(guó)明對(duì)蝦和日本囊對(duì)蝦(蓋春蕾等, 2013)、凡納濱對(duì)蝦和斑節(jié)對(duì)蝦(Wongtavatchaiet al,2010)、日本沼蝦(Macrobrachium nipponensis)、凡納濱對(duì)蝦(戚蘭等, 2003)、中國(guó)明對(duì)蝦和凡納濱對(duì)蝦(馮亞萍等, 2017)以及不同家系的中國(guó)明對(duì)蝦(董世瑞等, 2015)對(duì)疾病的敏感性差異研究。

3.1 對(duì)蝦自身特點(diǎn)

宿主對(duì) WSSV的敏感性和抵抗力因種而異，如WSSV引起印度對(duì)蝦(Penaeus indicus)、斑節(jié)對(duì)蝦、巨掌沼蝦(Macrobrachium superbum)100%死亡率的時(shí)間分別為感染后的72 h、48 h、5 d和8 d，而羅氏沼蝦(Macrobrachium rosenbergii)在注射感染W(wǎng)SSV 15 d后沒有死亡(Sahul Hameedet al, 2000)。吳仲慶等(2003)研究表明，日本囊對(duì)蝦和凡納濱對(duì)蝦在感染W(wǎng)SSV后 20 d的累積死亡率分別是 100.00%和83.33%，存在統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。Syed等(2006)研究表明，通過對(duì)波紋龍蝦(Panulirus homarus)和錦繡龍蝦(Panulirus ornatus)肌肉注射相同劑量的 WSSV病毒粒子，其達(dá)到 100%累積死亡率的時(shí)間分別是 168 h和120 h。李素紅等(2007)研究表明，即使同一種屬不同家系之間的中國(guó)明對(duì)蝦，對(duì) WSSV的敏感性也存在較大差異。黃永春等(2013)對(duì)凡納濱對(duì)蝦進(jìn)行WSSV感染實(shí)驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)不同家系的對(duì)蝦對(duì)WSSV的抗性不同。本研究中，凡納濱對(duì)蝦和中國(guó)明對(duì)蝦對(duì)WSSV的耐受性存在差異，其在平均存活時(shí)間、累積死亡率和對(duì)蝦體內(nèi)病毒載量均存在顯著差異。

3.2 選育效果

90年代以前，我國(guó)北方對(duì)蝦養(yǎng)殖品種主要是中國(guó)明對(duì)蝦。2001年后，由于凡納濱對(duì)蝦性狀優(yōu)良，在我國(guó)沿海養(yǎng)殖規(guī)模迅速擴(kuò)大，成為我國(guó)對(duì)蝦養(yǎng)殖的絕對(duì)優(yōu)勢(shì)種(黃永春等, 2013)。本研究所用凡納濱對(duì)蝦是中國(guó)水產(chǎn)科學(xué)研究院黃海水產(chǎn)研究所與青島海壬水產(chǎn)種業(yè)科技有限公司合作，培育出生長(zhǎng)優(yōu)勢(shì)顯著、存活率高的凡納濱對(duì)蝦"壬海1號(hào)"。其平均存活時(shí)間長(zhǎng)，各時(shí)間點(diǎn)累積死亡率低，并且隨著實(shí)驗(yàn)時(shí)間的延長(zhǎng)其肌肉內(nèi)病毒載量增殖速度慢。而中國(guó)明對(duì)蝦是采用群體、家系與多性狀復(fù)合育種技術(shù)，培育出中國(guó)明對(duì)蝦養(yǎng)殖新品種(品種登記號(hào)：GS01-002 -2008)。其表現(xiàn)出明顯的抗病性，能有效阻止 WSSV的感染規(guī)模以及感染進(jìn)程(逄錦菲等, 2013)。作者曾就中國(guó)明對(duì)蝦抗病新品種"黃海2號(hào)"與中國(guó)明對(duì)蝦野生群體進(jìn)行抗WSSV性能實(shí)驗(yàn)，"黃海2號(hào)"與之相比表現(xiàn)出了明顯的抗病優(yōu)勢(shì)，在一定程度上說明中國(guó)明對(duì)蝦的選育工作取得了一定的進(jìn)步和成果。通過抗病良種選育，可提高對(duì)蝦的免疫機(jī)能和抗病能力，是有效預(yù)防對(duì)蝦白斑病的重要措施之一(紀(jì)榮興等, 2008)。

3.3 不同溫度環(huán)境對(duì)WSSV增殖以及對(duì)對(duì)蝦耐受性的影響

對(duì)蝦白斑綜合征的暴發(fā)與水溫密切相關(guān)(Withyachumnarnkulet al, 2003)。Rahman 等(2007)研究水溫變化(27℃、33℃)對(duì)斑節(jié)對(duì)蝦幼體感染W(wǎng)SSV的影響，發(fā)現(xiàn)33℃組死亡率很低。You等(2010)分析了高溫(31℃)對(duì)感染W(wǎng)SSV的日本對(duì)蝦幼體和成體的死亡率、免疫反應(yīng)和病毒復(fù)制的影響，發(fā)現(xiàn) 31℃能大幅度降低死亡率(與 27℃相比)，高溫組對(duì)蝦成體的PO活性、血細(xì)胞總數(shù)與未感染對(duì)蝦無顯著差異(P＞0.05)，證實(shí)高溫抑制病毒復(fù)制，而不是提高對(duì)蝦免疫反應(yīng)。吳曉果等(2012)研究表明，高水溫(≥32℃)能不同程度地降低和減緩對(duì)蝦白斑綜合征引起的死亡。李侃等(2013)通過研究環(huán)境溫度與病毒增殖速度的相關(guān)性，得出高溫(33℃)對(duì)病毒的增殖具有一定的抑制作用，并且明顯改變了病毒基因的轉(zhuǎn)錄。

本研究中，凡納濱對(duì)蝦24℃組和28℃組最大存活時(shí)間分別為324 h和214 h，中國(guó)明對(duì)蝦分別為198 h和130 h，28℃組最大存活時(shí)間均小于24℃組(表2)。3個(gè)溫度組中，2種對(duì)蝦28℃組死亡高峰時(shí)的尾數(shù)均大于24℃和32℃，并且均最先達(dá)到100%的累積死亡率(圖2和圖3)。至第15天時(shí)，2種對(duì)蝦24℃組和28℃組累積死亡率均為 100%，而 32℃組依然有 45.74%和 23.47%的對(duì)蝦存活。從對(duì)蝦肌肉內(nèi)病毒載量的增殖情況來看，凡納濱對(duì)蝦24℃組和 28℃組病毒載量最大值為 6.40×106和 8.94×106copies/ng DNA，32℃組為6.04×104copies/ng DNA；中國(guó)明對(duì)蝦24℃組和28℃組病毒載量最大值為2.71×107和3.67×107copies/ng DNA，32℃組為 1.15×105copies/ng DNA(圖4)。綜上所述，3組溫度相比較，28℃組最大存活時(shí)間最短、病毒復(fù)制速度最快；32℃組15 d后依然有存活對(duì)蝦，且病毒復(fù)制水平低，表現(xiàn)出對(duì) WSSV增殖速度的抑制，減緩了白斑綜合征引起的死亡。

3.4 體型規(guī)格對(duì)對(duì)蝦抗病性的影響

本研究所使用的 2種對(duì)蝦由于其對(duì)生長(zhǎng)季節(jié)的要求不同等原因，致使相同時(shí)間段凡納濱對(duì)蝦與中國(guó)明對(duì)蝦相比規(guī)格較大，其平均體長(zhǎng)相差約1.02 cm。黃旭雄等(2006)研究不同規(guī)格中國(guó)明對(duì)蝦的非特異性免疫水平，表明實(shí)驗(yàn)用中國(guó)明對(duì)蝦的免疫水平與體長(zhǎng)或體重基本無關(guān)。董世瑞等(2015)研究不同家系中國(guó)對(duì)蝦形態(tài)性狀與抗病力的關(guān)系，表明體長(zhǎng)、全長(zhǎng)和體重均不是影響各家系對(duì)蝦感染 WSSV存活時(shí)間的主要相關(guān)性狀。而李優(yōu)等(2016)對(duì)3種規(guī)格凡納濱對(duì)蝦抗 WSSV進(jìn)行了初步研究，表明其具有規(guī)格越大抗WSSV性能越弱的趨勢(shì)。凡納濱對(duì)蝦規(guī)格相對(duì)較大，而表現(xiàn)出的抗 WSSV性能與中國(guó)明對(duì)蝦相比較強(qiáng)，推斷2種對(duì)蝦完全相同規(guī)格的情況下，凡納濱對(duì)蝦對(duì)WSSV的耐受性更強(qiáng)。

3.5 對(duì)蝦的爭(zhēng)勝行為

通過觀察實(shí)驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)中國(guó)明對(duì)蝦的爭(zhēng)勝行為要強(qiáng)于凡納濱對(duì)蝦，并且溫度越高，對(duì)蝦間相互啃食現(xiàn)象越嚴(yán)重。張沛東等(2008)通過研究中國(guó)明對(duì)蝦和凡納濱對(duì)蝦仔蝦的行為，發(fā)現(xiàn)中國(guó)明對(duì)蝦仔蝦自殘行為高發(fā)，攻擊頻率高；凡納濱對(duì)蝦仔蝦自殘現(xiàn)象少，攻擊頻率低。李玉全(2014)研究發(fā)現(xiàn)，日本囊對(duì)蝦的爭(zhēng)斗性行為發(fā)生的概率隨著溫度的升高而增加。趙玉超等(2016)研究發(fā)現(xiàn)，凡納濱對(duì)蝦個(gè)體在密度越高的環(huán)境下爭(zhēng)斗次數(shù)越高。本研究中，中國(guó)明對(duì)蝦 32℃組前期殘食現(xiàn)象嚴(yán)重，死亡數(shù)量較多；隨著密度的減小，死亡數(shù)量逐漸減少。

本研究中，2種對(duì)蝦在 3種溫度條件下感染W(wǎng)SSV后，凡納濱對(duì)蝦耐受 WSSV能力要高于中國(guó)明對(duì)蝦，凡納濱對(duì)蝦選育群體"壬海1號(hào)"在人工感染W(wǎng)SSV條件下表現(xiàn)出了較好的抗病性能，為我國(guó)對(duì)蝦抗病良種選育工作提供有價(jià)值的參考。

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