楊 曉 王 畋,2 ,2 劉 暢 黃 瑩

(1. 武漢躍萊健康產(chǎn)業(yè)有限公司研究院，湖北 武漢 430090；2. 中國保健協(xié)會，北京 100142)

大豆肽是一種比大豆蛋白更具有營養(yǎng)價值的植物蛋白[1]，由大豆蛋白通過酶解法[2]或者微生物發(fā)酵法[3]得到，主要成分為3～6個氨基酸組成的肽，且相對分子質(zhì)量為300～700[4]。研究表明大豆肽具有優(yōu)良的生物活性[5-7]，解酒[8]、降血脂[9]、提高免疫力[10-12]、抗氧化[13-15]、降低膽固醇[16]、促進脂肪代謝[17]、促進鈣和微量元素的吸收[18-19]以及抗疲勞[20]4[21]等。其中大豆肽的抗疲勞作用十分顯著，例如：電裂解制備的大豆肽能夠顯著延長小鼠的爬桿時間和負(fù)重游泳時間，極顯著地提高大鼠運動過程中肝糖原和肌糖原的含量，以及降低運動后血清中乳酸的含量，表明大豆肽具有明顯的抗疲勞作用[22]；大豆寡肽能夠提高乳酸脫氫酶的活性，從而降低血液中乳酸的含量，以緩解疲勞[23]。

牛磺酸，也稱為牛膽堿、牛膽素，最早是從牛的膽汁中分離得到[24]。?；撬嶙鳛橐环N含硫的必需氨基酸，對人體的各個臟器、內(nèi)分泌系統(tǒng)都起著一定的作用，促進人體細(xì)胞代謝，能調(diào)節(jié)生理功能、治療疾病等[25]。大量研究表明，牛磺酸具有較好的抗疲勞效果，魏源等[26]研究發(fā)現(xiàn)大鼠食用?；撬岷罅哌\動時間比未食用?；撬岬拈L，具有緩解大鼠疲勞的作用；余杰等[27]研究發(fā)現(xiàn)同對照組比較，添加?；撬崮苁剐∈罅哂斡緯r間明顯延長，延長趨勢與牛磺酸的添加量有明顯的相關(guān)性；魏智清等[28]經(jīng)動物試驗證明，?；撬峋哂酗@著的抗疲勞(P<0.01)和抗缺氧效應(yīng)(P<0.01)，同時對異丙腎上腺素增加的小鼠心肌耗氧有明顯的抑制作用，可顯著延長小鼠的游泳時間(P<0.01)和存活時間(P<0.01)；劉華榮等[29]發(fā)現(xiàn)?；撬峥裳娱L小鼠負(fù)重游泳存活時間，可使小鼠血清尿素含量和血乳酸曲線下面積減少，增加小鼠肝糖原的含量。

本試驗擬將一定量的大豆肽和牛磺酸混合均勻形成大豆肽和?；撬釓?fù)合粉(SPT復(fù)合粉)，通過測定SPT復(fù)合粉對小鼠的負(fù)重游泳時間、血乳酸含量、血清尿素含量、肝糖原含量的影響，研究SPT復(fù)合粉是否具有緩解疲勞的作用，并明確兩者緩解疲勞的作用機制，為其后續(xù)的開發(fā)利用提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 樣品

大豆肽粉：武漢天天好生物制品有限公司；

牛磺酸：潛江永安藥業(yè)股份有限公司；

動物飼料：登記證號滬飼證(2014)04002，上海福貝寵物用品有限公司。

1.2 試驗對象

KM小鼠：SPF級，18～22 g，生產(chǎn)許可證號SCXK(瀘)2013-0006，上海杰思捷實驗動物有限責(zé)任公司。飼養(yǎng)室溫度20～22 ℃，相對濕度58%～68%，試驗動物使用許可證號：SYXK(瀘)2013-0008。

1.3 主要儀器

電子天平：ACS-3A型，上海友聲衡器廠；

電子天平：ME3002型，塞多利亞(中國)有限公司；

全自動生化分析儀：AU680型，美國貝克曼庫爾特有限公司；

血乳酸儀：Lactate Scout+型，濟南天舜生物技術(shù)有限公司。

1.4 試驗方法

1.4.1 受試物劑量設(shè)計 設(shè)低、中、高3個劑量組，即0.25，0.50，1.50 g/kg，相當(dāng)于樣品人體推薦劑量的5，10，30倍，另設(shè)蒸餾水作空白對照組。

1.4.2 配制受試物 分別稱取樣品0.25，0.50，1.50 g，加蒸餾水至20 mL，按此比例均勻混合配制成低、中、高劑量組。

1.4.3 受試物給予方法 取小鼠160只，逐只稱重，按體重分層隨機分為16組，每組10只，分別用于負(fù)重游泳試驗、血乳酸測定試驗、血清尿素測定試驗和肝糖原測定試驗4項試驗，每項試驗設(shè)3個劑量組、1個空白對照組。所有動物按劑量設(shè)計連續(xù)喂養(yǎng)30 d，每周稱重。

1.4.4 負(fù)重游泳試驗 將各組小鼠于末次給樣30 min后，放入水中游泳，水深30 cm，水溫(25.0±1.0) ℃，鼠尾根部負(fù)荷5%體重的鉛皮，記錄小鼠自游泳開始至死亡的時間。

1.4.5 血乳酸測定 將各組小鼠于末次給樣30 min后，眼眶毛細(xì)血管內(nèi)眥采血，測游泳前血乳酸；動物在溫度30 ℃水中不負(fù)重游泳10 min后，立即采血測游泳后0 min血乳酸；然后休息20 min，再次采血測游泳后20 min血乳酸。以3個時間點血乳酸曲線下面積來判斷試驗結(jié)果：任一試驗組的面積小于對照組，且差異有顯著性，可判定該試驗結(jié)果為陽性，血乳酸曲線下面積按式(1)計算：

C=5×(m1+3×m2+2×m3)，

(1)

式中：

C——血乳酸曲線下的面積，mmol/L；

m1——游泳前血乳酸值，mmol/L；

m2——游泳后0 min血乳酸值，mmol/L；

m3——游泳后休息20 min血乳酸值，mmol/L。

1.4.6 血清尿素測定 將各組小鼠于末次給樣30 min后，放入30 ℃水中不負(fù)重游泳90 min，取出擦干，休息60 min后采血，離心，取血清測尿素。

1.4.7 肝糖原測定 將各組小鼠于末次給樣30 min后處死，立刻取肝臟，用生理鹽水漂洗，濾紙吸干水分，精確稱取1 g 肝組織，加生理鹽水至10 mL，用勻漿機制成10%肝組織勻漿，3 000 r/min離心15 min后，取上清液，測定肝糖原。

1.5 數(shù)據(jù)處理和統(tǒng)計

應(yīng)用SPSS 13.0軟件進行方差分析統(tǒng)計。先對數(shù)據(jù)進行正態(tài)性和方差齊性檢查，若方差齊，采用單因素方差分析進行總體比較，發(fā)現(xiàn)差異再用Dunnett法進行多個劑量組與一個對照組均數(shù)間的兩兩比較。若方差不齊則進行適當(dāng)?shù)淖兞哭D(zhuǎn)換，仍不齊則改用秩和檢驗進行統(tǒng)計，若總體比較有差異，則采用不要求方差齊性的Dunnett T3檢驗進行兩兩比較。

2 結(jié)果與分析

2.1 負(fù)重游泳

由表1可知，各劑量組間動物體重在試驗初和試驗?zāi)┗疽恢拢頎顟B(tài)正常，并未出現(xiàn)任何異常。與空白對照組相比，SPT復(fù)合粉的低、中、高劑量組小鼠負(fù)重游泳時間分別為(487.0±16.6)，(492.0±12.9)，(624.0±18.1) s，比空白對照組(437.0±15.8) s均有所增加，說明在本試驗條件下SPT復(fù)合粉能夠延長小鼠負(fù)重游泳時間。

低、中劑量組的小鼠負(fù)重游泳時間與空白對照組相比無統(tǒng)計學(xué)意義；高劑量組(1.5 g/kg)的小鼠負(fù)重游泳時間為(624.0±18.1) s，與空白對照組相比，負(fù)重游泳時間增加3.12 min，具有顯著性差異(P<0.05)。文獻[20]34-55報道，采用2.5 g/kg 的大豆肽喂食的小鼠負(fù)重游泳時間比空白對照組的增加1.32 min。因此SPT復(fù)合粉比大豆肽能明顯地延長小鼠負(fù)重游泳時間。

表1 SPT復(fù)合粉對小鼠負(fù)重游泳時間的影響?

Table 1 The effect of Soybean Peptide and Taurine Compound Powder on mice of loaded swimming time (n=10)

組別體重/g試驗初試驗?zāi)┴?fù)重游泳時間/s空白對照組21.0±1.242.7±2.6437.0±15.8低劑量組 21.1±1.141.0±2.2487.0±16.6中劑量組 20.6±1.342.1±3.2492.0±12.9高劑量組 20.9±1.341.6±2.5624.0±18.1*

? *表示與空白對照組相比有顯著性差異，P<0.05。

2.2 血乳酸測定

由表2可知，各劑量組間動物體重在試驗初和試驗?zāi)┗疽恢?，生理狀態(tài)正常，并未出現(xiàn)任何異常。與空白對照組相比，SPT復(fù)合粉的低、中、高劑量組小鼠血乳酸曲線下面積分別為(95.0±21.0)，(91.4±14.3)，(71.0±8.3) mmol/L，比空白對照組[(98.1±24.4) mmol/L]均有所降低，說明在本試驗條件下SPT復(fù)合粉能夠降低小鼠血乳酸含量。

表2 SPT復(fù)合粉對小鼠運動前后血乳酸的影響?

Table 2 The effect of Soybean Peptide and Taurine Compound Powder on mice of blood lactic acid (n=10)

組別體重/g試驗初試驗?zāi)┭樗崆€下面積/(mmol·L-1)空白對照組21.0±1.242.8±2.798.1±24.4低劑量組 20.9±1.342.1±2.895.0±21.0中劑量組 21.3±0.941.1±2.691.4±14.3高劑量組 20.8±1.342.0±3.271.0±8.3*

? *表示與空白對照組相比有顯著性差異，P<0.05。

低、中劑量組的小鼠血乳酸曲線下面積與空白對照組相比無統(tǒng)計學(xué)意義；高劑量組(1.5 g/kg)的小鼠血乳酸曲線下面積為(71.0±8.3) mmol/L，與空白對照組相比，小鼠血乳酸曲線下面積降低了27.1 mmol/L，具有顯著性差異(P<0.05)。文獻[20]34-55報道采用2.5 g/kg 的大豆肽喂食的小鼠血乳酸曲線下面積比空白對照組的降低了22.94 mmol/L。因此，SPT復(fù)合粉比大豆肽能明顯地降低小鼠血乳酸含量。

2.3 血清尿素測定

由表3可知，各劑量組間動物體重在試驗初和試驗?zāi)┗疽恢拢頎顟B(tài)正常，并未出現(xiàn)任何異常。與空白對照組相比，SPT復(fù)合粉的低、中、高劑量組小鼠血清尿素含量分別為(9.08±0.86)，(8.63±0.59)，(8.35±1.25) mmol/L，比空白對照組[(9.26±1.95) mmol/L]均有所降低，但各劑量組與空白對照組相比無顯著性差異(P>0.05)。

表3 SPT復(fù)合粉對小鼠運動前后血清尿素含量的影響

Table 3 The effect of Soybean Peptide and Taurine Compound Powder on mice of blood urea nitrogen (n=10)

組別體重/g試驗初試驗?zāi)┠蛩氐?(mmol·L-1)空白對照組21.1±1.142.6±2.59.26±1.95低劑量組 20.9±1.441.5±2.89.08±0.86中劑量組 21.2±1.242.7±3.18.63±0.59高劑量組 20.7±1.441.9±2.68.35±1.25

2.4 肝糖原測定

由表4可知，各劑量組間動物體重在試驗初和試驗?zāi)┗疽恢?，生理狀態(tài)正常，并未出現(xiàn)任何異常。與空白對照組相比，SPT復(fù)合粉的低、中、高劑量組小鼠肝糖原含量分別為(19.34±2.52)，(22.21±3.51)，(22.82±3.89) mg/g，比空白對照組[(19.24±2.49) mg/g]均有所增加，說明在本試驗條件下SPT復(fù)合粉能夠增加小鼠肝糖原的含量。

低、中劑量組的小鼠肝糖原含量與空白對照組相比無統(tǒng)計學(xué)意義；高劑量組(1.5 g/kg)的小鼠肝糖原含量為(22.82±3.89) mg/g，與空白對照組相比，小鼠肝糖原含量增加了3.58 mg/g，且差異顯著(P<0.05)。文獻[20]34-55報道采用2.5 g/kg 的大豆肽喂食的小鼠肝糖原含量比空白對照組的增加了2.61 mg/g。因此，SPT復(fù)合粉比大豆肽能明顯地增加小鼠肝糖原含量。

表4 SPT復(fù)合粉對小鼠運動前后肝糖原含量的影響?

Table 4 The effect of Soybean Peptide and Taurine Compound Powder on mice of hepatic glycogen (n=10)

組別體重/g試驗初試驗?zāi)└翁窃?(mg·g-1)空白對照組20.7±1.341.5±2.619.24±2.49低劑量組 21.2±1.142.5±2.519.34±2.52中劑量組 21.0±1.242.8±2.722.21±3.51高劑量組 20.8±1.242.1±2.822.82±3.89*

? *表示與空白對照組相比有顯著性差異，P<0.05。

3 結(jié)論

通過研究SPT復(fù)合粉對小鼠負(fù)重游泳時間、血乳酸含量、血清尿素含量、肝糖原含量的影響。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，SPT復(fù)合粉能使小鼠負(fù)重游泳時間增加、血乳酸含量降低、尿素含量降低、肝糖原含量增加，說明SPT復(fù)合粉具有較好的緩解體力疲勞功能。

前期大量研究報道大豆肽具有很好的抗疲勞作用，例如：采用2.5 g/kg的大豆肽喂食的小鼠負(fù)重游泳，與空白對照組相比，負(fù)重游泳時間增加了1.32 min、血乳酸含量降低了22.94 mmol/L、血乳酸含量增加了2.61 mg/g[20]34-55。SPT復(fù)合粉對小鼠的抗疲勞試驗中，高劑量組(1.5 g/kg)與空白對照組相比，小鼠負(fù)重游泳時間增加了3.12 min、血乳酸含量降低了27.1 mmol/L、血乳酸含量增加了3.58 mg/g，均比大豆肽的各項指標(biāo)要高，大豆肽和?；撬釓?fù)合粉的緩解疲勞作用要優(yōu)于大豆肽，因此在大豆肽中加入適量的?；撬崮芴岣呖蛊诘哪芰Γ瑑烧呔徑馄诘淖饔脼閰f(xié)同作用。

本研究發(fā)現(xiàn)大豆肽和?；撬峄旌现髮π∈蟮目蛊谛Ч麅?yōu)于大豆肽的，為開發(fā)抗疲勞保健食品提供一種新的開發(fā)思路，不再局限于使用單一原料開發(fā)產(chǎn)品，可以將相同功效的產(chǎn)品搭配食用能起到協(xié)同的效果。后續(xù)還需對SPT復(fù)合粉進行安全性毒理學(xué)試驗評價，以及通過人群試驗研究其對人體的功效作用，為相關(guān)產(chǎn)品的開發(fā)提供更為科學(xué)的理論依據(jù)。

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