楊園園,許乾麗,黎殊
貴州省食品檢驗檢測所,貴陽 550001)
辣椒面作為貴州具有特色的辣椒制品,深受消費者喜愛。近年來,因違法添加染料等非食用物質(zhì)而導(dǎo)致的食品安全事故時有報道。衛(wèi)生部在2008年以來就陸續(xù)發(fā)布了5批《食品中可能違法添加的非食用物質(zhì)名單和易濫用的食品添加劑名單》,其中就包括堿性橙2、堿性橙21、堿性橙22和酸性橙II等非食用物質(zhì),這4種屬于染料,由于其著色穩(wěn)定、價格低廉,被一些商家非法添加到辣椒面中以改善色澤。但長期接觸這些染料可能會致癌,因此嚴禁將此使用于食品中。為此,建立簡單、快速、準確的檢測方法變得尤其重要。通過文獻報道,染料類物質(zhì)的檢測方法主要有高效液相色譜法[1-5]、高效液相色譜-質(zhì)譜法[6]等,目前關(guān)于同時測定辣椒面中堿性橙2、堿性橙21、堿性橙22和酸性橙II的國標方法未見報道。本實驗通過提取、離心、測試,建立了辣椒面中堿性橙2、堿性橙21、堿性橙22和酸性橙II的HPLC測定方法。
戴安Ultimate 3000高效液相色譜儀;Chromeleon 7.0工作站 美國Thermo Fisher公司;電子天平 梅特勒-托利多儀器有限公司;離心機 長沙平凡儀器儀表有限公司;XW-80A渦旋振蕩器 海門市其林貝爾儀器制造有限公司。
堿性橙2對照品(批號:6A15G020, 98%);堿性橙21對照品(批號:4A14K050,100%);堿性橙22對照品(批號:6A16G050,100%);酸性橙II對照品(批號:C1573500,德國Dr.Ehrenstorfer,96.3%);乙腈(色譜純,默克公司);乙酸銨、乙酸(分析純,成都市科龍化工試劑廠);辣椒面樣品(貴州省食品藥品監(jiān)督管理局稽查部門抽樣提供)。
分別精密稱取堿性橙2 對照品0.01096 g、堿性橙21對照品0.01071 g、堿性橙22對照品0.01036 g、酸性橙II對照品0.01012 g,置于100 mL量瓶中,加少量水溶解,再加50%甲醇至刻度,得到4種對照品儲備液,濃度分別為107.41,107.1,103.6,97.456 μg/mL。
吸取酸性橙II儲備液10 mL于100 mL量瓶中,加水至刻度搖勻,制得溶液濃度為9.7456 μg/mL。
加標實驗所需的標準溶液:分別吸取堿性橙2、堿性橙21、堿性橙22儲備液各1.00 mL,酸性橙II儲備液0.5 mL于25 mL容量瓶中,加水至刻度搖勻,制得堿性橙2、堿性橙21、堿性橙22和酸性橙II溶液濃度分別為4.296,4.284,4.144,1.949 μg/mL。
準確稱取5 g樣品于50 mL塑料離心管中,加入10 mL 70%乙腈水溶液,超聲提取20 min后,以4000 r/min離心10 min,取20 μL液相色譜測定。
2.3.1 色譜柱
Capcell PAK C18(4.6 mm×200 mm,5 μm)。
2.3.2 流動相
A:乙腈;B:10 mmol/L 乙酸銨水溶液(乙酸0.12%)0 min→14 min(A:30%→82%);14 min→15 min(A:82%→82%);15 min→16 min(A:82%→30%)。
2.3.3 檢測波長
酸性橙II和堿性橙2為450 nm;堿性橙21和堿性橙22為485 nm;柱溫:35 ℃;流速:1.0 mL/min。分別吸取標準溶液和樣品加標溶液注入色譜儀,其色譜圖見圖1。
圖1 A:混合標準溶液色譜圖;B:加標樣品溶液色譜圖Fig.1 A:The chromatogram of mixed standard solution; B:The chromatogram of spiked sample solution
2.4.1 堿性橙2、堿性橙21、堿性橙22、酸性橙II的線性關(guān)系考察
分別精密吸取堿性橙2、堿性橙21、堿性橙22、酸性橙II每種各1,3,5,7,9 mL于100 mL容量瓶中,制備成混合標準溶液。注入液相色譜儀,進樣體積為20 μL,記錄峰面積A,以峰面積A對濃度C(μg/mL)進行線性回歸計算,結(jié)果見表1。
表1 堿性橙2、堿性橙21、堿性橙22、酸性橙II的回歸方程、線性方程和線性范圍Table 1 The regression equation, linear equation and linear range of basic orange 2, basic orange 21, basic orange 22 and acid orange II
2.4.2 精密度測試
取標準曲線第二點,即堿性橙2、堿性橙21、堿性橙22標準溶液濃度為3 μg/mL,酸性橙II為0.3 μg/mL,連續(xù)進樣6次,每次20 μL,測得堿性橙2、堿性橙21、堿性橙22、酸性橙II峰面積的RSD分別為0.5%,1.0%,0.8%,1.6%。結(jié)果表明:本實驗所用儀器精密度良好。
2.4.3 回收率測試
準確稱取5 g樣品(精確至0.01 g),共9份,置于50 mL塑料離心管中,加入標準溶液(堿性橙2、堿性橙21、堿性橙22濃度分別為4.296,4.284,4.144 μg/mL)各0.25,0.5,0.75 mL,1.949 μg/mL酸性橙II各加入 0.3,1.0,1.5 mL,按2.2項下制備加標樣品溶液,取20 μL樣品溶液注入液相色譜儀測定,結(jié)果見表2。
表2 回收率和RSD結(jié)果表Table 2 The results of recoveries and RSDs
由表2可知,加標含量在0.1~0.6 mg/kg之間,回收率在91%~107%之間,RSD在1.1%~7.8%之間,符合食品理化檢測(GB/T 27404-2008《實驗室質(zhì)量控制規(guī)范 食品理化檢測》的要求。
2.4.4 檢出限測試
準確稱取5.00 g樣品(精確至0.01 g),置于50 mL塑料離心管中,加入經(jīng)稀釋的標準溶液(堿性橙2、堿性橙21、堿性橙22、酸性橙II的濃度分別為0.2148,0.2142,0.2072,0.1949 μg/mL)0.5,1.0,1.5 mL,按2.2項下制備樣品溶液。取20 μL樣品溶液注入液相色譜儀測定。記錄保留時間和峰面積,當峰面積與基線噪聲比值(S/N)為3時,以此時所加標的量來計算實際檢出限。測得當堿性橙2、堿性橙21、堿性橙22、酸性橙II的加標濃度分別為0.1074,0.1071,0.1036,0.09745 μg/mL時,S/N為3,當稱樣量為5 g時,堿性橙2、堿性橙21、堿性橙22、酸性橙II的實際檢出限為0.2 mg/kg。
最近2年,在進行國家監(jiān)督抽檢和省級監(jiān)督抽檢的辣椒面樣品中,偶有發(fā)現(xiàn)添加非食用物質(zhì)的情況,尤其是違法添加工業(yè)染料酸性橙、堿性橙等,本實驗室以辣椒面為基質(zhì),探索同時檢測堿性橙2、堿性橙21、堿性橙22、酸性橙II的高效液相色譜法。該方法處理簡單、快速,重復(fù)性和準確度可靠,可用于辣椒面中堿性橙2、堿性橙21、堿性橙22、酸性橙II的含量測定,為監(jiān)控辣椒面的質(zhì)量提供可靠、快速的依據(jù)。
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