張熙　陳德波　王青蘭

【摘要】 目的：探討CD44+/CD24-細(xì)胞在乳腺癌患者不同時(shí)期外周血中的表達(dá)。方法：隨機(jī)選取2011年1月-2013年6月筆者所在醫(yī)院收治的乳腺癌患者30例，將其作為乳腺癌組，另選取筆者所在醫(yī)院同期收治的30例乳腺良性病患者為良性組，對(duì)兩組患者不同時(shí)期外周血中CD44+/CD24-細(xì)胞表達(dá)情況進(jìn)行分析。結(jié)果：乳腺癌組化療后和淋巴結(jié)陽(yáng)性患者外周血中CD44+/CD24-細(xì)胞表達(dá)均顯著高于良性組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），但術(shù)前、術(shù)后、淋巴結(jié)陰性患者外周血中CD44+/CD24-細(xì)胞表達(dá)和良性組之間差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），而化療后患者外周血中CD44+/CD24-細(xì)胞表達(dá)顯著高于術(shù)前、術(shù)后，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），淋巴結(jié)陽(yáng)性患者外周血中CD44+/CD24-細(xì)胞表達(dá)顯著高于淋巴結(jié)陰性患者，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。結(jié)論：檢測(cè)CD44+/CD24-細(xì)胞在乳腺癌患者不同時(shí)期外周血中的表達(dá)能夠?yàn)榕R床患者病情的評(píng)估及預(yù)后的判斷工作提供有效依據(jù)，值得臨床充分重視。

【關(guān)鍵詞】 CD44+/CD24-細(xì)胞； 乳腺癌； 不同時(shí)期； 外周血

doi：10.14033/j.cnki.cfmr.2018.3.043 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼 B 文章編號(hào) 1674-6805（2018）03-0083-02

相關(guān)醫(yī)學(xué)研究表明，轉(zhuǎn)移與復(fù)發(fā)極易在微轉(zhuǎn)移的情況下發(fā)生，腫瘤干細(xì)胞（tumor stem cells，TSC）的提出將新的理論基礎(chǔ)提供給了腫瘤早期微轉(zhuǎn)移[1-2]。大多數(shù)腫瘤細(xì)胞處于有限增殖或不增殖狀態(tài)，但是TSC的轉(zhuǎn)移侵襲能力更強(qiáng)，對(duì)外周血中TSC的存在進(jìn)行檢測(cè)具有極為重要的臨床意義[3]。本研究探討了CD44+/CD24-細(xì)胞在乳腺癌患者不同時(shí)期外周血中的表達(dá)，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

隨機(jī)選取2011年1月-2013年6月筆者所在醫(yī)院收治的乳腺癌患者30例，作為乳腺癌組。納入標(biāo)準(zhǔn)：所有患者均經(jīng)病理學(xué)檢查確診為初治原發(fā)性浸潤(rùn)性導(dǎo)管癌，均為女性，將抽血前接受過(guò)治療的患者排除在外?；颊吣挲g45～85歲，平均（65.3±10.2）歲。在化療方案方面，6例為多西他賽+環(huán)磷酰胺，10例為多西他賽+表柔比星+環(huán)磷酰胺，14例為表柔比星+環(huán)磷酰胺+5FU；在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移方面，16例有，14例無(wú)。另選取筆者所在醫(yī)院同期收治的乳腺良性病患者為良性組，年齡46～85歲，平均（66.2±10.4）歲。兩組患者一般資料比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），具有可比性。

1.2 方法

1.2.1 儀器與試劑 采用美國(guó)BD公司生產(chǎn)的CD44-APC、異硫氰酸熒光素（CD24-FITC）、流式細(xì)胞儀（FACSCalibur，美國(guó)），高速離心機(jī)Centrifuge 5810R（Eppendorf），日本東芝公司生產(chǎn)的超低溫冰箱（-80℃），生物倒置顯微鏡系統(tǒng)（OLYMPUS）。

1.2.2 測(cè)定方法 術(shù)前1 d督促兩組患者空腹，不接受任何治療，取出其2 ml外周靜脈血，抗凝后送檢。將10 μl CD24、CD44抗體加入其中，混勻，進(jìn)行15 min的避光，將500 μl溶血素加入其中，混勻，進(jìn)行10 min的避光，將2 ml PBS加入其中，以1 500 r/min的速率進(jìn)行5 min離心，將上清液棄去，瀝干，將500 μl PBS加入其中，混勻，上機(jī)檢測(cè)。

1.3 陽(yáng)性判斷標(biāo)準(zhǔn)

乳腺癌的陽(yáng)性判斷標(biāo)準(zhǔn)為CD44呈胞膜著色、CD24呈胞質(zhì)著色。上機(jī)檢測(cè)，對(duì)CD44+/CD24-淋巴細(xì)胞數(shù)和陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)進(jìn)行計(jì)數(shù)，計(jì)算陽(yáng)性率[4]。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

采用SPSS 17.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件處理數(shù)據(jù)，CD44+/CD24-細(xì)胞表達(dá)情況以（x±s）表示，采用F或t檢驗(yàn)，P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

乳腺癌組化療后和淋巴結(jié)陽(yáng)性患者外周血中CD44+/CD24-細(xì)胞表達(dá)均顯著高于良性組（t=6.294 4、3.169 9，P=0.000 0、0.002 4），但術(shù)前、術(shù)后、淋巴結(jié)陰性患者外周血中CD44+/CD24-細(xì)胞表達(dá)和良性組之間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t=0.102 4、0.131 3、0.843 3，P=0.918 8、0.896 0、0.402 5），而化療后患者外周血中CD44+/CD24-細(xì)胞表達(dá)又顯著高于術(shù)前、術(shù)后（t=4.943 7、5.871 2，P=0.000 0、0.000 0），淋巴結(jié)陽(yáng)性患者外周血中CD44+/CD24-細(xì)胞表達(dá)顯著高于淋巴結(jié)陰性患者（t=3.373 7，P=0.001 3），見(jiàn)表1。

3 討論

近年來(lái)，在我國(guó)，乳腺癌的基礎(chǔ)及臨床研究發(fā)展迅速，在極大程度上改善了患者的生活質(zhì)量，但是仍然具有較高的死亡率，而死亡極易在遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移的情況下發(fā)生[5]。相關(guān)醫(yī)學(xué)研究將這種和腫瘤類似的細(xì)胞從死于癌癥的患者的外周血中分離出來(lái)，將循環(huán)腫瘤細(xì)胞（Circulating tumor cell，CTC）的概念提了出來(lái)[6]。乳腺癌初期就能夠檢測(cè)CTC，患者預(yù)后受到臨床分期、是否轉(zhuǎn)移的直接影響。轉(zhuǎn)移灶并不一定在存在CTC的情況下形成，TSC學(xué)說(shuō)認(rèn)為，大多數(shù)CTC只具有有限的增殖能力或不具有分化增殖能力，在腫瘤的發(fā)生發(fā)展中發(fā)揮著極為重要作用的TSC僅占總數(shù)較小的比例[7]。TSC概念的提出將新的方向提供給了乳腺癌微轉(zhuǎn)移的研究。相關(guān)醫(yī)學(xué)研究表明，外周血TSC表達(dá)和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況呈顯著的正相關(guān)關(guān)系，以此認(rèn)為對(duì)TSC進(jìn)行明確檢測(cè)，一方面能夠?qū)⒂行б罁?jù)提供給臨床評(píng)估乳腺癌患者病情工作，另一方面還能夠?qū)⒂行б罁?jù)提供給臨床對(duì)乳腺癌患者預(yù)后的判斷工作[8-10]。

本研究結(jié)果表明，乳腺癌組患者術(shù)前、化療后、術(shù)后外周血中CD44+/CD24-細(xì)胞表達(dá)分別為（20.7±9.4）%、（31.9±8.1）%、（20.7±6.6）%，淋巴結(jié)陽(yáng)性、淋巴結(jié)陰性患者外周血中CD44+/CD24-細(xì)胞表達(dá)分別為（27.5±10.2）%、（19.4±8.3）%，良性組患者外周血中CD44+/CD24-細(xì)胞表達(dá)為（20.9±5.1）%。乳腺癌組化療后、淋巴結(jié)陽(yáng)性患者外周血中CD44+/CD24-細(xì)胞表達(dá)均顯著高于良性組（P<0.05），但術(shù)前、術(shù)后、淋巴結(jié)陰性患者外周血中CD44+/CD24-細(xì)胞表達(dá)和良性組之間比較，差異均不顯著（P>0.05），而化療后患者外周血中CD44+/CD24-細(xì)胞表達(dá)又顯著高于術(shù)前、術(shù)后（P<0.05），淋巴結(jié)陽(yáng)性患者外周血中CD44+/CD24-細(xì)胞表達(dá)顯著高于淋巴結(jié)陰性患者（P<0.05），和上述相關(guān)醫(yī)學(xué)研究結(jié)果一致。發(fā)生這一現(xiàn)象的原因可能為化療一方面能夠?qū)⒛[瘤細(xì)胞殺傷，另一方面也會(huì)殺傷包括淋巴細(xì)胞在內(nèi)的正常細(xì)胞。與TSC減少情況相比，淋巴細(xì)胞數(shù)量減少情況顯著較高，從而提升了其比值?？梢灶A(yù)測(cè)治療結(jié)束一段時(shí)間后，患者恢復(fù)了免疫狀態(tài)，可能會(huì)導(dǎo)致患者外周血中具有顯著較低的TSC檢測(cè)比值。本試驗(yàn)良性疾病患者系導(dǎo)管內(nèi)乳頭狀瘤、乳腺葉狀腫瘤等，其病情和癌前期病變接近[11-12]。趙長(zhǎng)嘯等[13]研究報(bào)告中，采取流式細(xì)胞術(shù)相關(guān)雙染技術(shù)對(duì)50例存在原發(fā)性乳腺浸潤(rùn)性導(dǎo)管癌的患者在術(shù)前、術(shù)后2周、2個(gè)周期化療之后和50例存在良性乳腺疾病的患者其外周血中淋巴細(xì)胞內(nèi)CD44+/CD24-細(xì)胞數(shù)值，結(jié)果提示，CD44+/CD24-細(xì)胞于乳腺癌患者和良性乳腺疾病患者中的外周血淋巴細(xì)胞內(nèi)都存在表達(dá)現(xiàn)象，而且，乳癌患者2個(gè)周期化療之后的CD44+/CD24-細(xì)胞數(shù)值（31.882 8%）和術(shù)前（20.725 8%）對(duì)比，差異顯著（P<0.05），而且，化療之后的CD44+/CD24-細(xì)胞數(shù)值顯著提升，乳癌患者術(shù)后的外周血淋巴細(xì)胞內(nèi)CD44+/CD24-細(xì)胞數(shù)值（20.696 2%）和術(shù)前（20.725 8%）對(duì)比，差異不顯著（P>0.05）。乳癌患者術(shù)前和乳腺良性腫瘤患者的外周血淋巴細(xì)胞中CD44+/CD24-細(xì)胞數(shù)值對(duì)比（20.725 8%、20.874 6%），差異不顯著（P>0.05）。存在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組和不存在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組的外周血淋巴細(xì)胞內(nèi)CD44+/CD24-細(xì)胞數(shù)值對(duì)比（27.573 7%、19.460 9%），差異顯著（P<0.05）。與此文結(jié)果具有相似之處。不過(guò)，本文研究仍存在不足，本研究并沒(méi)有比較乳腺癌患者和健康者的情況，下一步試驗(yàn)應(yīng)該將健康者的資料收集起來(lái)進(jìn)行進(jìn)一步深入研究。

總之，檢測(cè)CD44+/CD24-細(xì)胞在乳腺癌患者不同時(shí)期外周血中的表達(dá)能夠?yàn)榕R床患者病情的評(píng)估及預(yù)后的判斷工作提供有效依據(jù)，值得臨床充分重視。

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（收稿日期：2017-01-03）