口腔鱗癌組織SOX4、E-cadherin表達及其臨床意義

張建全，張翀

(1天津醫(yī)科大學寶坻臨床學院，天津301800；2中國醫(yī)科大學口腔醫(yī)學院)

據統(tǒng)計，口腔鱗狀細胞癌(簡稱口腔鱗癌)約占頭頸部腫瘤的1/3[1]?？谇击[癌患者5年生存率為50%～60%[2]。腫瘤細胞的上皮間質轉化(EMT)過程是腫瘤細胞轉移的關鍵步驟。性別決定區(qū)相關高遷移率族盒蛋白4(SOX4)屬于轉錄因子SOX家族成員，其編碼基因定位于染色體6q22.3，參與調節(jié)腫瘤細胞的EMT過程，進而促進腫瘤細胞轉移[3,4]。E鈣黏附蛋白(E-cadherin)是一種重要的EMT相關蛋白，在多種腫瘤組織中異常表達[5]。本研究觀察了口腔鱗癌組織SOX4和E-cadherin表達變化，現(xiàn)分析結果并探討其臨床意義。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 選擇2014年1月～2015年12月天津醫(yī)科大學寶坻臨床學院收治并行手術治療的口腔鱗癌患者91例(觀察組)。納入標準：①術后病理檢查診斷為口腔鱗癌；②術前未接受放化療；③臨床病理資料完整。排除標準：合并其他惡性腫瘤、全身感染性疾病、嚴重肝腎功能不全等。其中，男48例、女43例，年齡≤55歲51例、>55歲40例；腫瘤直徑≤3 cm 45例，>3 cm 46例；分化程度為低分化31例，中高分化60例；腫瘤形態(tài)為外生型39例，浸潤型52例；有淋巴結轉移61例，無淋巴結轉移30例；臨床分期Ⅰ、Ⅱ期69例，Ⅲ、Ⅳ期22例。對照組為50例同期健康志愿者，男28例、女22例，年齡≤55歲26例、>55歲24例。兩組性別比例、年齡分布具有可比性。本研究已獲天津醫(yī)科大學寶坻學院醫(yī)學倫理委員會批準，患者均知情同意并簽署知情同意書。

1.2 口腔癌組織及正常組織SOX4 mRNA和E-cadherin mRNA檢測 采用實時熒光定量PCR法。取手術切除的口腔鱗癌組織和正?？谇火つそM織標本(取自兩頰)，置于EP管中，加入TRIzol溶液1 mL，采用微量電動組織勻漿器進行組織勻漿，然后依次加入氯仿、異丙醇、75%乙醇，提取組織總RNA。微量分光光度計檢測總RNA純度及濃度。取500 ng總RNA，參照反轉錄試劑盒說明書將總RNA反轉錄為cDNA，置于- 80 ℃冰箱中保存?zhèn)溆?。取cDNA采用實時熒光定量PCR法檢測SOX4 mRNA和E-cadherin mRNA相對表達量。SOX4、E-cadherin、GAPDH引物序列由上海吉瑪制藥技術有限公司合成。 PCR反應體系及反應條件均參照實時熒光定量 PCR試劑盒(SYBR Green)說明書。采用2-ΔΔCt法計算目的mRNA相對表達量。

1.3 口腔鱗癌組織SOX4 mRNA與E-cadherin mRNA表達的相關性分析 采用Spearman相關分析。分析口腔鱗癌組織SOX4 mRNA和E-cadherin mRNA相對表達量與患者臨床病理參數(shù)關系及二者表達的關系。

2 結果

2.1 兩組SOX4、E-cadherin mRNA相對表達量比較 觀察組SOX4 mRNA相對表達量高于對照組(P<0.05)，E-cadherin mRNA相對表達量低于對照組(P<0.05)。見表1。

表1 兩組SOX4 mRNA和E-cadherin mRNA相對表達量比較

注：與對照組比較，*P<0.05。

2.2 口腔鱗癌組織SOX4、E-cadherin mRNA表達與患者臨床病理參數(shù)的關系 口腔鱗癌組織SOX4 mRNA表達與患者性別、年齡、腫瘤大小、類型均無關(P均>0.05)，與組織分化程度、淋巴結轉移、臨床分期有關(P均<0.05)；組織分化程度低、有淋巴結轉移和臨床分期Ⅲ、Ⅳ期患者腫瘤組織SOX4 mRNA相對表達量較高(P均<0.05)?？谇击[癌組織E-cadherin mRNA表達與患者性別、年齡、腫瘤大小、腫瘤形態(tài)不相關(P均>0.05)，而與組織分化程度、淋巴結轉移、臨床分期顯著相關(P均<0.05)；組織分化程度低、有淋巴結轉移和臨床分期Ⅲ、Ⅳ期患者腫瘤組織E-cadherin mRNA表達水平較低(P均<0.05)。見表2。

表2 口腔鱗癌組織SOX4、E-cadherin mRNA表達與患者臨床病理參數(shù)的關系

2.3 口腔鱗癌組織SOX4 mRNA和E-cadherin mRNA表達關系 口腔鱗癌組織SOX4 mRNA和E-cadherin mRNA表達呈負相關(r=-0.735，P=0.000)。

3 討論

EMT是指上皮細胞向間質細胞的轉化過程，細胞轉化后具備轉移和侵襲能力。EMT不僅在生長發(fā)育過程中起著關鍵作用，還與組織愈合、器官纖維化和腫瘤轉移等密切相關[6]。SOX4是介導腫瘤細胞EMT的關鍵因子之一[7]。正常情況下，SOX4可促進胚胎發(fā)育和細胞分化[8]。SOX4在多種腫瘤細胞中表達升高，且SOX4高表達與腫瘤惡性進展、不良預后密切相關[9]。多種機制可調控SOX4基因表達，如微小RNA(miRNA)和長鏈非編碼RNA(lncRNAs)可通過增強SOX4基因表達誘導EMT，進而促進腫瘤細胞發(fā)生淋巴結轉移或遠處轉移[10～12]。E-cadherin表達缺失為EMT的關鍵步驟之一。E-cadherin表達缺失可導致上皮細胞間的極性消失，細胞骨架重構，轉移能力增強，最終導致腫瘤發(fā)生淋巴結轉移或遠處轉移[13]。本研究結果顯示，口腔鱗癌組織SOX4 mRNA表達升高而E-cadherin mRNA表達降低，提示在口腔鱗癌發(fā)生過程中SOX4發(fā)揮促癌作用而E-cadherin則發(fā)揮抑癌作用。本研究相關分析顯示，口腔鱗癌組織SOX4 mRNA與E-cadherin mRNA表達呈負相關關系，提示兩者在口腔鱗癌形成過程中發(fā)揮拮抗作用。SOX4作為轉錄因子，可能通過調控EMT相關基因表達，參與并促進EMT。由此推測，SOX4可能參與調控E-cadherin基因表達，后續(xù)研究將對此推論進行驗證。

本研究還發(fā)現(xiàn)，口腔鱗癌組織SOX4 mRNA和E-cadherin mRNA表達與組織分化程度、淋巴結轉移和臨床分期均相關。提示SOX4 mRNA高表達者腫瘤分化程度較低、可能存在淋巴結轉移以及可能處于較晚的臨床分期。Watanabe等[14]研究亦證實，SOX4 高表達與口腔鱗癌組織分化程度和淋巴結轉移相關，本研究結果與其一致。多項研究證實，E-cadherin低表達與口腔鱗癌組織分化程度、淋巴結轉移有關[15,16]。本研究組織分化程度較低、有淋巴結轉移和臨床分期較晚患者口腔鱗癌組織E-cadherin表達較低。提示SOX4高表達和E-cadherin低表達的口腔鱗癌患者預后較差。

綜上所述，SOX4高表達和E-cadherin 低表達可促進口腔鱗癌的發(fā)生、發(fā)展；SOX4和E-cadherin具有作為口腔鱗癌治療靶標的潛力。

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