朱亞珠 林森森

(浙江國(guó)際海運(yùn)職業(yè)技術(shù)學(xué)院，浙江 舟山 316021 )

中國(guó)毛蝦蝦皮是一種營(yíng)養(yǎng)豐富的傳統(tǒng)水產(chǎn)制品，因其味道鮮美，蛋白質(zhì)含量高，且富含人體所需多種維生素與礦物質(zhì)而深受消費(fèi)者喜愛。然而在生產(chǎn)流通過程中蝦皮易受微生物、氧化等的影響，容易出現(xiàn)變色、異味甚至腐敗變質(zhì)的情況[1]。采用合適的保鮮處理方式，以抑制蝦皮在貯藏期間微生物的生長(zhǎng)，延緩其品質(zhì)的劣變，已成為當(dāng)前急需解決的問題。保鮮劑是添加到食品中實(shí)現(xiàn)抑制微生物生長(zhǎng)、抗氧化等目的的食品添加劑。

前期研究[2]表明，腐生葡萄球菌是蝦皮貯藏過程中的主要優(yōu)勢(shì)腐敗菌之一，為葡萄球菌屬非致病性革蘭氏陽性菌。腐生葡萄球菌能分泌蛋白酶和脂酶，在肉制品貯藏過程中可導(dǎo)致脂質(zhì)分解和蛋白質(zhì)降解，從而產(chǎn)生小分子醛、酮、醇、胺和有機(jī)酸等腐敗代謝產(chǎn)物影響產(chǎn)品品質(zhì)[3]。王芳等[4]研究了肉桂精油對(duì)腐生葡萄球菌的抑菌作用，得到了較好的效果。汪玲玲等[5-7]比較了幾種食用防腐劑對(duì)金黃色葡萄球菌的抑菌作用，結(jié)果表明抑菌(殺菌)效果較好的均為一些生物防腐劑如乳酸鏈球菌素、茶多酚、殼聚糖和溶菌酶等。山梨酸鉀能有效防止葡萄球菌的生長(zhǎng)和繁殖[8]，選擇山梨酸鉀、苯甲酸鈉、蔗糖酯等復(fù)合食品添加劑，檢測(cè)其對(duì)金黃色葡萄球菌生物被膜的影響，發(fā)現(xiàn)在一定質(zhì)量濃度范圍內(nèi)，對(duì)金黃色葡萄球菌生物被膜的形成均具有一定的抑制作用[9]。施建兵等[10]34-43采用復(fù)合保鮮劑(茶多酚、溶菌酶和殼聚糖)對(duì)鯧魚塊中腐生葡萄球菌的抑菌效果進(jìn)行研究，結(jié)果表明該復(fù)合保鮮劑能夠顯著抑制腐生葡萄球菌的生長(zhǎng)，并顯著延緩魚塊品質(zhì)的變化。生物防腐劑由于價(jià)格高、用量大等因素限制了實(shí)際應(yīng)用。而山梨酸鉀、雙乙酸鈉和異抗壞血酸鈉是安全性較高且價(jià)格相對(duì)低的防腐劑，在食品保鮮中已廣泛應(yīng)用。目前，復(fù)合保鮮劑主要應(yīng)用在果蔬和水產(chǎn)品中，水產(chǎn)品中的應(yīng)用主要集中在對(duì)新鮮的魚類和對(duì)蝦的保鮮[11]，但在蝦皮中的應(yīng)用鮮有報(bào)道，而采用山梨酸鉀、雙乙酸鈉和異抗壞血酸鈉組成的復(fù)合保鮮劑對(duì)腐生葡萄球菌的抑制作用未見報(bào)道。因此，研究復(fù)合保鮮劑對(duì)蝦皮中腐生葡萄球菌的抑菌機(jī)制具有重要意義。本課題組前期有關(guān)蝦皮保鮮劑篩選及保鮮效果研究表明[12]，山梨酸鉀和雙乙酸鈉具有較好的抑菌效果，而異抗壞血酸鈉具有較好的護(hù)色和抗氧化作用，通過不同特性的抗菌保鮮劑復(fù)合使用，對(duì)蝦皮的貯藏與流通過程可起到較好的保鮮效果。

本試驗(yàn)在前期研究基礎(chǔ)上，以腐生葡萄球菌為對(duì)象，將山梨酸鉀、雙乙酸鈉與異抗壞血酸鈉復(fù)配成復(fù)合保鮮劑，由酶標(biāo)法確定復(fù)合保鮮劑對(duì)腐生葡萄球菌的最低抑菌濃度(MIC)和最低殺菌濃度(MBC)，并結(jié)合抑菌活力、細(xì)菌生長(zhǎng)曲線、細(xì)胞膜完整性、堿性磷酸酶(AKP)含量與細(xì)菌超微結(jié)構(gòu)觀察，進(jìn)一步探討復(fù)合保鮮劑的抑菌機(jī)制，綜合評(píng)價(jià)復(fù)合保鮮劑在不同處理時(shí)間對(duì)腐生葡萄球菌的影響，闡明復(fù)合保鮮劑對(duì)腐生葡萄球菌的抑菌機(jī)理。

1 材料與方法

1.1 材料與儀器

1.1.1 試驗(yàn)材料

試驗(yàn)菌株分離自中國(guó)毛蝦蝦皮，經(jīng)16S rDNA鑒定為腐生葡萄球菌(ATCC 15305)。

1.1.2 試劑與培養(yǎng)基

山梨酸鉀、雙乙酸鈉：食品級(jí)，寧波王龍集團(tuán)有限公司；

異抗壞血酸鈉：食品級(jí)，江西省德興市百勤異VC鈉有限公司；

堿性磷酸酶(AKP)測(cè)試盒：南京建成生物工程研究所；

平板計(jì)數(shù)培養(yǎng)基(PCA培養(yǎng)基)：國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司；

營(yíng)養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基：杭州微生物試劑有限公司；

戊二醛、乙醇、叔丁醇、磷酸鹽：分析純，國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司。

1.1.3 儀器與設(shè)備

立式壓力蒸汽滅菌器：LDZX-75KBS型，上海申安醫(yī)療器械廠；

超凈工作臺(tái)：ZHJH-C1118B型，上海智成分析儀器制造有限公司；

掃描電子顯微鏡：S-3400N型，日立有限公司；

掃描型紫外可見分光光度計(jì)：UV-3200型，上海美譜達(dá)儀器有限公司；

落地高速冷凍離心機(jī)：D-37520型，美國(guó)Thermo Fisher Scientific公司；

電導(dǎo)率儀：DDS-11C型，上海儀電科學(xué)儀器股份有限公司；

酶標(biāo)儀：Plate Reader M200 型，瑞士Tecan集團(tuán)有限公司。

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 復(fù)合保鮮液制備 復(fù)合保鮮劑由山梨酸鉀、雙乙酸鈉和異抗壞血酸鈉按一定比例和方法配制，配制比例參考前期使用的方法[12]，配比濃度為山梨酸鉀1.0 g/L、雙乙酸鈉0.5 g/L 與異抗壞血酸鈉2.0 g/L。

1.2.2 菌株活化 將試驗(yàn)菌腐生葡萄球菌菌株在營(yíng)養(yǎng)肉湯中活化后，接種于100 mL營(yíng)養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基中，于搖床(37 ℃、160 r/min)培養(yǎng)24 h后離心(4 000 r/min，15 min)，用無菌去離子水洗滌3次，并將其稀釋成106CFU/mL的菌懸液備用。

1.2.3 最低抑菌濃度(MIC)與最低殺菌濃度(MBC)的測(cè)定

根據(jù)韋何雯[13]的96孔板酶標(biāo)比濁法，修改如下：用無菌蒸餾水配制好復(fù)合保鮮劑(3 500 μg/mL)，備用。在96孔酶標(biāo)板上，用無菌營(yíng)養(yǎng)肉湯將復(fù)合保鮮劑依次稀釋成濃度為3 500，1 750，875，438，219，109，55，0 μg/mL的抗菌液100 μL。在8個(gè)孔中分別加入事先稀釋好的腐生葡萄球菌菌懸液(104CFU/mL)100 μL，此時(shí)，各孔中的有效保鮮劑濃度依次為1 750，875，438，219，109，55，27，0 μg/mL。平行操作3次。用酶標(biāo)儀測(cè)定各孔的初始OD600值，再將酶標(biāo)板置于37 ℃恒溫培養(yǎng)24 h，取出后再次測(cè)定各孔的OD600值，并計(jì)算前后△OD600的絕對(duì)值，取3次操作的平均值。

(1) 最低抑制濃度(MIC)的確定：△OD600≤0.05的保鮮劑最低濃度，并結(jié)合肉眼觀察澄清者。

(2) 最低殺菌濃度(MBC)的確定：從細(xì)胞板中，將含有大于MIC復(fù)合保鮮劑的菌懸液各吸取0.1 mL涂布于營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基平板上，置于37 ℃恒溫箱中繼續(xù)培養(yǎng)24 h，活菌數(shù)與初始值相比減少99.9%的最低抑菌劑濃度即為保鮮劑的最低殺菌濃度，每個(gè)濃度梯度做2個(gè)平行，試驗(yàn)重復(fù)3次。

1.2.4 抑菌活力的測(cè)定 根據(jù)藍(lán)蔚青等[6]的方法，修改如下：按1.2.3中的方法配制復(fù)合保鮮劑濃度為MIC和MBC的菌懸液，并用無菌去離子水代替保鮮劑作對(duì)照組，于37 ℃、160 r/min搖床培養(yǎng)，分別于培養(yǎng)0，1，2，3，4，5，6，7 h時(shí)用酶標(biāo)儀測(cè)定630 nm處的吸光度值，并繪制曲線。抑菌活力按式(1)計(jì)算[14]：

(1)

式中：

U——抑菌活力；

A0——對(duì)照組的吸光度；

A——處理組的吸光度。

1.2.5 復(fù)合保鮮劑對(duì)腐生葡萄球菌生長(zhǎng)的影響 參考翁佩芳等[15]的方法，按1.2.3中的方法配制復(fù)合保鮮劑濃度為MIC和MBC的菌懸液，并用無菌去離子水代替保鮮劑作對(duì)照組。用酶標(biāo)儀測(cè)定各孔的初始OD600值；然后將酶標(biāo)板置于37 ℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24 h，每隔2 h測(cè)定并記錄菌懸液的OD600值。相同過程重復(fù)3次，求平均值。以培養(yǎng)時(shí)間為橫坐標(biāo)，OD600值為縱坐標(biāo)，繪制腐生葡萄球菌的生長(zhǎng)曲線。

1.2.6 復(fù)合保鮮劑對(duì)菌體細(xì)胞壁、細(xì)胞膜通透性的影響

(1) 對(duì)細(xì)胞壁通透性影響：配制復(fù)合保鮮劑濃度分別為MIC和MBC的菌懸液，并用無菌去離子水代替保鮮劑作對(duì)照組。于37 ℃、160 r/min搖床培養(yǎng)，分別于培養(yǎng)0，1，2，3，4，5，6，7 h時(shí)取樣，離心(4 000 r/min，10 min)后取上清液，用堿性磷酸酶(AKP)測(cè)試盒測(cè)定其含量。

(2) 對(duì)細(xì)胞膜通透性影響：取1.2.6(1)離心后的上清液，測(cè)定其在260 nm處的吸光度值。

(3) 對(duì)細(xì)胞質(zhì)滲漏影響：取1.2.6(1)離心后的上清液，用電導(dǎo)儀測(cè)定其電導(dǎo)率。每個(gè)樣品重復(fù)3次，取平均值。

1.2.7 菌體細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)觀察 根據(jù)藍(lán)蔚青等[6]的方法，修改如下：取適量菌懸液(對(duì)數(shù)期)離心(4 000 r/min，15 min)，用無菌去離子水洗滌菌體沉淀3次，并稀釋成菌落總數(shù)為105CFU/mL的菌懸液。試驗(yàn)組加入復(fù)合保鮮劑使其終濃度為MBC，對(duì)照組加入等量的無菌生理鹽水，2組菌液于37 ℃、160 r/min 搖床培養(yǎng)10 h。分別取10 mL菌液，離心(4 000 r/min，15 min)，菌體沉淀用PBS緩沖液洗滌3次后，用2.5%的戊二醛固定12 h，再分別用30%，50%，70%，90%的乙醇梯度脫水，隨后叔丁醇干燥，冷凍干燥后固定、噴金，最后在掃描電鏡下觀察菌體的形態(tài)結(jié)構(gòu)。

2 結(jié)果與分析

2.1 復(fù)合保鮮劑最低抑菌濃度(MIC)與最低殺菌濃度(MBC)的確定

MIC與MBC的測(cè)定結(jié)果見表1。由表1可知，復(fù)合保鮮劑濃度≥109 μg/mL時(shí)，其△OD600值均<0.05，且在109，55 μg/mL濃度下的△OD600值差距明顯，且隨著濃度的增加，△OD600值下降較為顯著。這表明復(fù)合保鮮劑濃度≥109 μg/mL 時(shí)，對(duì)腐生葡萄球菌有較好的抑制效果，且其抑菌作用隨著保鮮劑濃度的下降而逐漸減弱。故復(fù)合保鮮劑對(duì)菌體的最低抑菌濃度為109 μg/mL。選擇復(fù)合保鮮劑濃度>109 μg/mL的幾個(gè)梯度處理菌體進(jìn)行瓊脂平板培養(yǎng)，結(jié)果顯示最低殺菌濃度(MBC)為219 μg/mL。資料顯示，較多保鮮劑和復(fù)合保鮮劑對(duì)葡萄球菌的最低抑菌濃度和最低殺菌濃度為千分比濃度，如藍(lán)莓提取物對(duì)金黃色葡萄球菌的MIB和MBC分別為300，450 mg/mL[16]；殼聚糖、溶菌酶與茶多酚配制而成的復(fù)合保鮮劑對(duì)金黃色葡萄球菌的MIB和MBC分別為0.8，1.6 mg/mL[6]。本研究中采用的復(fù)合保鮮劑對(duì)腐生葡萄球菌的MIB和MBC則為百萬分比濃度，抑菌效果較為突出。

表1 復(fù)合保鮮劑濃度對(duì)腐生葡萄球菌的抑菌效果

2.2 復(fù)合保鮮劑的抑菌活力

為進(jìn)一步表征在MIC和MBC濃度下復(fù)合保鮮劑的抑菌活力，研究了復(fù)合保鮮劑的抑菌活性與時(shí)間的關(guān)系，結(jié)果見圖1。分別用MIC與MBC濃度的復(fù)合保鮮劑處理腐生葡萄球菌后，都分別在1，3 h時(shí)出現(xiàn)活性最高峰，隨后抑菌活力逐漸減弱。此外，MBC處理后的抑菌活性明顯高于MIC處理組，故復(fù)合保鮮劑質(zhì)量濃度與抑菌效果呈正相關(guān)。

圖1 復(fù)合保鮮劑對(duì)腐生葡萄球菌的抑菌動(dòng)力學(xué)

Figure 1 Antibacterial kinetics of complex preservatives againstStaphylococcussaprophyticus

2.3 復(fù)合保鮮劑對(duì)腐生葡萄球菌生長(zhǎng)的影響

細(xì)菌培養(yǎng)液一般在600 nm左右具有最大的吸光值，故可以根據(jù)菌懸液的OD600值來判斷細(xì)菌的菌體數(shù)量。由圖2可知，對(duì)照組的腐生葡萄球菌生長(zhǎng)正常，2～12 h階段為細(xì)菌的生長(zhǎng)對(duì)數(shù)期，該階段菌體數(shù)量增長(zhǎng)迅速，12 h后增長(zhǎng)較緩慢，進(jìn)入穩(wěn)定期。與對(duì)照組相比，2～12 h時(shí)，MIC組與MBC組的生長(zhǎng)速度顯著降低，進(jìn)入穩(wěn)定期(12 h)后，MIC組與MBC組的菌體量也顯著小于對(duì)照組。結(jié)果表明，經(jīng)MIC和MBC濃度的復(fù)合保鮮劑處理后，腐生葡萄球菌的生長(zhǎng)受到明顯抑制，且MBC濃度的抑制作用明顯高于MIC濃度的。

圖2 復(fù)合保鮮劑對(duì)腐生葡萄球菌生長(zhǎng)的影響

Figure 2 Effects of complexpreservatives on the growth ofStaphylococcussaprophyticus

2.4 復(fù)合保鮮劑對(duì)細(xì)菌細(xì)胞壁的影響

堿性磷酸酶(AKP)是一種廣泛存在于動(dòng)植物及微生物體內(nèi)的磷酸單酯水解酶，在生物體內(nèi)的物質(zhì)代謝中具有重要作用，它參與了磷酸基團(tuán)的轉(zhuǎn)移和代謝，能調(diào)節(jié)Ca2+的代謝，并且與多種大分子位置的代謝有關(guān)[17]。AKP一般存在于細(xì)胞壁和細(xì)胞膜間，一般情況下無法在活體細(xì)胞外檢測(cè)到其活性，當(dāng)細(xì)胞壁或細(xì)胞膜(尤其是細(xì)胞壁)遭到破壞后，細(xì)胞的通透性增加，AKP則會(huì)泄漏至胞外。因此，可通過檢測(cè)菌體胞外的AKP含量來了解細(xì)胞壁通透性的變化[18]。

從圖3可知，在0～6 h時(shí)，3個(gè)試驗(yàn)組的AKP量都緩慢增長(zhǎng)，6 h后增長(zhǎng)迅速。1 h后MIC組和MBC組的AKP量明顯高于對(duì)照組，其中，MBC組的AKP量增加更為明顯。表明復(fù)合保鮮劑處理使腐生葡萄球菌細(xì)胞壁通透性增加，影響其生長(zhǎng)與代謝。此外，細(xì)胞壁通透性增加還可能造成菌體電解質(zhì)外泄增多，破壞細(xì)胞內(nèi)環(huán)境和細(xì)胞膜的穩(wěn)定性，從而進(jìn)一步抑制菌體的生長(zhǎng)[10]49-50。

Figure 3 Effects of complex preservatives on cell wall ofStaphylococcussaprophyticus

2.5 復(fù)合保鮮劑對(duì)細(xì)菌細(xì)胞膜穩(wěn)定性的影響

細(xì)胞膜是細(xì)菌的第2道屏障，當(dāng)細(xì)胞膜遭到破壞后，膜內(nèi)小分子物質(zhì)及核酸等大分子物質(zhì)隨之泄漏出來。故通過檢測(cè)菌液260 nm處的吸光值來測(cè)定菌液中胞外核酸的含量，從而了解細(xì)胞膜的破壞程度。由圖4可知，隨著作用時(shí)間的延長(zhǎng)，MIC組與MBC組的吸光值明顯高于對(duì)照組，且在2～8 h時(shí)其吸光值快速上升，分別從0.205，0.313增加到0.935，1.285；處理8 h后，試驗(yàn)組的吸光值顯著高于對(duì)照組(0.35)(P<0.05)；對(duì)照組的吸光值隨時(shí)間的延長(zhǎng)其增速較為緩慢。由此可見，復(fù)合保鮮劑對(duì)細(xì)菌細(xì)胞膜有一定的破壞作用，且破壞強(qiáng)度與保鮮劑濃度呈正相關(guān)。

當(dāng)復(fù)合保鮮劑破壞細(xì)胞膜后，菌體的保護(hù)屏障被打破，菌體內(nèi)部電解質(zhì)外泄至培養(yǎng)液中，從而使培養(yǎng)液的電導(dǎo)率值上升[19]。因此，可通過菌液電導(dǎo)率值的變化來了解細(xì)菌細(xì)胞膜的通透性變化[20]。由圖5可知，在0～8 h時(shí)，MIC組和MBC組菌懸液的電導(dǎo)率明顯高于對(duì)照組，且隨著時(shí)間的延長(zhǎng)，MIC組和MBC組的電導(dǎo)率值顯著增大，而對(duì)照組增速較為緩慢。

圖4 復(fù)合保鮮劑對(duì)腐生葡萄球菌膜完整性的影響

Figure 4 Effects of complex preservatives on adventitia permeability ofStaphylococcussaprophyticus

圖5 復(fù)合保鮮劑對(duì)腐生葡萄球菌細(xì)胞質(zhì)滲漏的影響

Figure 5 Effects of complex preservatives on cytoplasmic leakage ofStaphylococcussaprophyticus

MBC組菌懸液的電導(dǎo)率明顯高于對(duì)照組，且隨著時(shí)間的延長(zhǎng)，MIC組和MBC組的電導(dǎo)率值顯著增大，而對(duì)照組增速較為緩慢。

0 h時(shí)，MBC組、MIC組和對(duì)照組的電導(dǎo)率分別為16.465，16.342，16.462 μs/cm，說明試驗(yàn)組培養(yǎng)液中含有的復(fù)合保鮮劑和對(duì)照組中含有的去離子水的電導(dǎo)率基本一致，故排除了由于培養(yǎng)液成分不同造成的影響。在0～1 h時(shí)，對(duì)照組的電導(dǎo)率增加較明顯，在其后時(shí)間中電導(dǎo)率增加較緩慢，維持在相對(duì)穩(wěn)定的狀態(tài)，與藍(lán)蔚青等[19]研究結(jié)果一致，對(duì)照組菌懸液的相對(duì)電導(dǎo)率在0～2 h時(shí)增加較快，可能與對(duì)照試驗(yàn)采用的無菌去離子水有關(guān)，菌體在該環(huán)境生長(zhǎng)，本身就會(huì)發(fā)生部分裂解而導(dǎo)致電導(dǎo)率上升；也有可能是細(xì)菌在正常的生長(zhǎng)代謝期間，選擇性透過H+、K+、Na+、Ca2+等離子[20]，培養(yǎng)液積累了這些小分子物質(zhì)使得電導(dǎo)率明顯增加。試驗(yàn)組在0～1 h時(shí)，電導(dǎo)率顯著增加，MBC組和MIC組的電導(dǎo)率增速分別為1.885，1.305 μS/(cm·h)；在1～8 h時(shí)，電導(dǎo)率雖增加顯著，但增速放緩，分別為0.15，0.17 μS/(cm·h)，可能是復(fù)合保鮮劑對(duì)細(xì)胞膜的破壞作用在培養(yǎng)前期已發(fā)揮較大作用，導(dǎo)致大量菌體細(xì)胞膜破裂。260 nm吸光值與電導(dǎo)率測(cè)定結(jié)果較一致，根據(jù)以上結(jié)果推測(cè)，復(fù)合保鮮劑使菌體細(xì)胞膜受到破壞或滲透性增加，導(dǎo)致胞內(nèi)電解質(zhì)大量泄露至培養(yǎng)液中，影響其正常代謝，最終導(dǎo)致死亡。

2.6 復(fù)合保鮮劑對(duì)細(xì)菌細(xì)胞形態(tài)的影響

對(duì)照組和MBC組中腐生葡萄球的電鏡掃描結(jié)果見圖6。從圖6中可看出，對(duì)照組的菌體細(xì)胞較完整、胞體呈立體球狀且飽滿，細(xì)胞表面完整、光滑；經(jīng)MBC濃度處理12 h后，菌體表面出現(xiàn)不平整，部分細(xì)胞表面出現(xiàn)凹陷、干癟，一部分菌體出現(xiàn)成團(tuán)的破裂，使內(nèi)容物逐漸滲出至胞外。由此可見，復(fù)合保鮮劑對(duì)菌體有損傷作用，使菌體細(xì)胞表面破損。

圖6 處理12 h的腐生葡萄球菌的掃描電鏡圖

Figure 6 Scanning electron microscopy ofStaphylococcussaprophyticustreated for 12 h

3 結(jié)論

以配比濃度為山梨酸鉀1.0 g/L、雙乙酸鈉0.5 g/L與異抗壞血酸鈉2.0 g/L的混合液為復(fù)合保鮮劑，作用于腐生葡萄球菌具有較好的抑菌效果。研究表明，復(fù)合保鮮劑的MIC為109 μg/mL，MBC為219 μg/mL。復(fù)合保鮮劑對(duì)腐生葡萄球菌有較好的抑菌活力，并且能明顯抑制菌體繁殖。胞外堿性磷酸酶含量、核酸含量和電導(dǎo)率的測(cè)定結(jié)果較一致，表明復(fù)合保鮮劑對(duì)腐生葡萄球菌的細(xì)胞壁和細(xì)胞膜均有影響，破壞了細(xì)胞的完整性。經(jīng)復(fù)合保鮮劑處理的腐生葡萄球菌菌體細(xì)胞發(fā)生了表面凹陷、干癟和破裂現(xiàn)象。腐生葡萄球菌是蝦皮貯藏過程中的主要優(yōu)勢(shì)腐敗菌，本研究為蝦皮貯藏和流通中的保鮮應(yīng)用提供了一定參考。

[1] 沈月新. 水產(chǎn)食品學(xué)[M]. 北京: 中國(guó)農(nóng)業(yè)出版社, 2001: 23-24.

[2] 朱亞珠, 翁佩芳, 劉娜, 等. 中國(guó)毛蝦貯藏過程細(xì)菌群落多樣性分析[J]. 核農(nóng)學(xué)報(bào), 2017, 31(9): 1 759-1 766.

[3] ZAREI M, MAKTABI S, GHORBANPOUR M. Prevalence of Listeria monocytogenes, Vibrio parahaemolyticus, Staphylococ-cus aureus, and Salmonella spp. in seafood products using multiplex polymerase chain reaction[J]. Foodborne Pathogens & Disease, 2011, 9(2): 108-112.

[4] 王芳, 曹錦軒, 潘道東, 等. 肉桂精油對(duì)成團(tuán)泛菌和腐生葡萄球菌的抑菌活性及其機(jī)理[J]. 食品工業(yè)科技, 2016, 37(19): 75-80.

[5] 汪玲玲, 郝淑賢, 呂彥均. 食用防腐劑對(duì)金黃色葡萄球菌生長(zhǎng)參數(shù)的影響[J]. 食品科學(xué), 2013, 34(15): 62-65.

[6] 藍(lán)蔚青, 謝晶, 毛峰, 等. 復(fù)合生物保鮮劑對(duì)金黃色葡萄球菌的抑菌作用研究[J]. 食品與生物技術(shù)學(xué)報(bào), 2014, 33(8): 814-820.

[7] 王瓊, 唐俊妮, 湯承, 等. 6種食品防腐劑對(duì)金黃色葡萄球菌抑菌效果及腸毒素基因表達(dá)的影響[J]. 食品科學(xué), 2016, 37(21): 151-156.

[8] 任劍豪, 吳衛(wèi)國(guó). 山梨酸及其鉀鹽防腐效果的研究進(jìn)展[J]. 南方農(nóng)業(yè), 2017, 11(17): 77-78.

[9] 謝麗斯, 張文艷, 許佳晶, 等. 食品添加劑對(duì)食源性金黃色葡萄球菌生物被膜的影響[J]. 食品科學(xué), 2012, 33(17): 154-157.

[10] 施建兵, 謝晶. 復(fù)合保鮮方法對(duì)鯧魚保鮮效果及抑菌機(jī)理的研究[D]. 上海: 上海海洋大學(xué), 2014.

[11] 劉淑敏, 邵興鋒. 復(fù)合生物保鮮劑在水產(chǎn)品保鮮中的應(yīng)用[J]. 生物技術(shù)進(jìn)展, 2013, 3(6): 408-411, 438.

[12] 李馥君, 翁佩芳, 朱亞珠, 等. 中國(guó)毛蝦(Acetes chinensis)蝦皮復(fù)合保鮮劑篩選及保鮮效果的研究[J]. 食品工業(yè)科技, 2017, 38(6): 333-338.

[13] 韋何雯. 月桂酸單甘油酯在低溫肉制品中的應(yīng)用研究[D]. 杭州: 浙江大學(xué), 2008: 42-54.

[14] HARA S, YAMAKAWA M. Moricin, a novel type of antibacterial peptide isolated from the silkworm, bombyx mori[J]. Journal of Biological Chemistry, 1995, 270(50): 29 923-29 927.

[15] 翁佩芳, 江華珍, 馮鳳琴, 等. 酶標(biāo)比濁法評(píng)價(jià)月桂酸單甘油酯對(duì)肉葡萄球菌的抑菌活性[J]. 中國(guó)食品學(xué)報(bào), 2012, 12(5): 188-194.

[16] 沈?yàn)t, 孫曉紅, 趙勇謝, 等. 藍(lán)莓提取物對(duì)及黃色葡萄球菌的抑制作用研究[J]. 天然產(chǎn)物研究與開發(fā), 2012, 24(11): 1 622-1 625.

[17] 劉曉雯, 劉克武, 楊守忠, 等. 大涼疣螈堿性磷酸酶的分離純化及部分性質(zhì)[J]. 中國(guó)生物化學(xué)與分子生物學(xué)報(bào), 2001, 17(1): 135-138.

[18] CHEN C Z, COOPER S L. Interactions between dendrimer biocides and bacterial membranes[J]. Biomaterials, 2002, 23(16): 3 359-3 368.

[19] 藍(lán)蔚青, 謝晶, 侯偉峰, 等. 復(fù)合生物保鮮劑對(duì)腐敗希瓦氏菌的抑菌機(jī)理[J]. 江蘇農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào), 2012, 28(1): 186-192.

[20] DIAO Wen-rui, HU Qing-ping, ZHANG Hong, et al. Chemical composition, antibacterial activity and mechanism of action of essential oil from seeds of fennel (Foeniculum vulgare Mill)[J]. Food Control, 2014, 35(1): 109-116.