外周注射Ghrelin對(duì)非洲雛鴕鳥小腸中胃蛋白酶含量的影響

王 亮，楊 杰，王家鄉(xiāng)

（長(zhǎng)江大學(xué)動(dòng)物科學(xué)學(xué)院，湖北 荊州 432500）

Ghrelin是由日本科學(xué)家 Kojima等［1］于 1999年從大鼠胃組織中提取得到的一種含28個(gè)氨基酸殘基的多肽，能夠促進(jìn)生長(zhǎng)激素（Growth hormone，GH）的釋放。Ghrelin主要來源于胃組織，下丘腦、垂體、腸、卵巢、睪丸、胎盤等多種組織也能產(chǎn)生，在體內(nèi)分布廣泛［2］。Ghrelin具有調(diào)節(jié)胃腸功能、心血管功能、記憶、睡眠、內(nèi)分泌、生殖等多種生物學(xué)作用［2］。Ghrelin自被發(fā)現(xiàn)就引起了廣泛的關(guān)注，成為人們不斷研究的熱點(diǎn)。本課題組前期研究表明，Ghrelin在非洲鴕鳥的胃、腸、胰腺、肝臟、胸腺、肺、睪丸、脾臟、小腦及腎上腺等組織中均有分布［3－9］，且 Ghrelin在消化道的分布與表達(dá)隨著動(dòng)物年齡的變化而變化，提示Ghrelin與鴕鳥胃腸道的發(fā)育有一定的作用和關(guān)系［3］。因此本研究采用放射免疫法檢測(cè)Ghrelin對(duì)非洲雛鴕鳥小腸中胃蛋白酶含量的影響，旨在為非洲雛鴕鳥的生長(zhǎng)發(fā)育提供新的理論依據(jù)。

1 材料與方法

1．1 試驗(yàn)材料

1．1．1 試驗(yàn)動(dòng)物 選取健康的45 d非洲雛鴕鳥為試驗(yàn)材料，平均體重（5．5±0．8） kg，隨機(jī)分為 4 組，每組4羽，雌雄不限，均來自于長(zhǎng)江大學(xué)鴕鳥研究所。

1．1．2 試驗(yàn)基礎(chǔ)日糧 試驗(yàn)過程使用自配育雛料，主要是由青菜配合肉用仔雞前期配合飼料，飼料使用荊州海大飼料有限公司的產(chǎn)品。

1．1．3 試驗(yàn)試劑 非洲鴕鳥 Ghrelin，GSS（Octanoyl）FLSPEYKKIQKQKDPKKPTTKLHC由上海強(qiáng)耀生物科技有限公司合成．

1．2 試驗(yàn)方法

1．2．1 試驗(yàn)設(shè)計(jì) 通過頸部皮下注射不同濃度外源性Ghrelin，其濃度分別為 0（對(duì)照組）、10、50、100 μg／kg，用生理鹽水稀釋，注射劑量為1 μL／羽，注射時(shí)間為每天上午 8：00，連續(xù)注射 6 d，于第 7天上午 8：00取材。

1．2．2 飼養(yǎng)管理 整個(gè)飼養(yǎng)階段在長(zhǎng)江大學(xué)鴕鳥研究所進(jìn)行，為避免影響試驗(yàn)效果，雛鴕鳥采用分欄飼養(yǎng)。 每天定時(shí)給料，具體時(shí)間為 8：00、11：00、14：00、17：00四個(gè)時(shí)間段各飼喂一次，記錄每天總采食量。在試驗(yàn)開始前，對(duì)鴕鳥舍全場(chǎng)進(jìn)行全面徹底噴霧式消毒，在飼喂試驗(yàn)期間，嚴(yán)格按照長(zhǎng)江大學(xué)鴕鳥研究所消毒程序進(jìn)行。

1．2．3 樣品的采集與處理 飼養(yǎng)至第7天的非洲雛鴕鳥稱重。經(jīng)跖靜脈注射10%的烏拉坦（1 g／kg）稀釋液進(jìn)行全身麻醉，打開腹腔迅速取部分小腸組織，用0．85%生理鹽水洗凈食糜，隨后置于液氮中保存?zhèn)溆谩?/p>

1．2．4 胃蛋白酶含量的測(cè)定 準(zhǔn)確稱取組織質(zhì)量，按 1∶9（g／mL）的比例加入勻漿介質(zhì)，冰水浴條件下機(jī)械勻漿，制成10%的組織勻漿，2 500 r／min離心10 min，取上清液進(jìn)行檢測(cè)。采用放射免疫法檢測(cè)其含量（北京北方生物技術(shù)研究所有限公司）。

1．3 統(tǒng)計(jì)分析

獲得的全部數(shù)據(jù)用SAS數(shù)據(jù)處理軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。所得數(shù)據(jù)以平均值±標(biāo)準(zhǔn)差表示，通過t檢驗(yàn)法比較各組間的差異顯著性。P＜0．05為差異顯著。

2 結(jié)果與分析

從表1中可以看出，當(dāng)Ghrelin濃度為10 μg／kg時(shí)，雛鴕鳥所有小腸中胃蛋白酶的含量均有增加，且空腸和回腸中的含量與對(duì)照相比差異顯著 （P＜0．05）；當(dāng) Ghrelin 濃度為 50 μg／kg 時(shí)，十二指腸中胃蛋白酶的含量與對(duì)照相比顯著降低（P＜0．05），而空腸和回腸中胃蛋白酶的含量則顯著增加 （P＜0．05）；當(dāng)Ghrelin濃度為100 μg／kg時(shí)，十二指腸胃蛋白酶的含量顯著降低（P＜0．05），回腸中胃蛋白酶的含量顯著增加（P＜0．05），空腸中變化不明顯。

表1 Ghrelin對(duì)小腸中胃蛋白酶含量的影響

3 小結(jié)與討論

就哺乳動(dòng)物鼠類而言，Ghrelin可通過中樞和外周途徑參與胃腸功能的調(diào)節(jié)，給大鼠腦室或靜脈注射Ghrelin均可以促進(jìn)其胃腸蠕動(dòng)，促進(jìn)胃酸分泌，加快胃排空，并發(fā)現(xiàn)此種作用可被阿托品和迷走神經(jīng)切斷所阻斷，推測(cè)迷走神經(jīng)依賴性的膽堿能途徑參與了Ghrelin對(duì)胃腸運(yùn)動(dòng)的調(diào)節(jié)［2］。此外，Ghrelin還能通過加強(qiáng)大鼠小腸的運(yùn)輸功能來降低其腸梗阻的發(fā)病率［10］。Ghrelin對(duì)禽類胃腸運(yùn)動(dòng)的調(diào)節(jié)與哺乳動(dòng)物相似。Kitazawa 等［11］研究發(fā)現(xiàn)，Ghrelin 可以促進(jìn)雞胃腸道（食道、嗉囊、腺胃、十二指腸、空腸和結(jié)腸）平滑肌收縮，并且隨著雞日齡的增大，Ghrelin對(duì)其腺胃收縮的誘導(dǎo)作用逐漸下降［12］，而Ghrelin對(duì)禽類消化酶有何影響尚未見研究。本研究發(fā)現(xiàn)，一定劑量的Ghrelin（10 μg／kg）能夠促進(jìn)雛鴕鳥小腸中胃蛋白酶的含量增加，從而增強(qiáng)其消化吸收能力，促進(jìn)雛鴕鳥的生長(zhǎng)。

［1］ KOJIMA M，HOSODA H，DATE Y，et al． Ghrelin is a growth hormone －releasing acylated peptide from stomach ［J］．Nature，1999，402：656－660．

［2］鄭 福，張 珍，黎宗強(qiáng)．Ghrelin結(jié)構(gòu)與生理功能的研究進(jìn)展［J］．黑龍江畜牧獸醫(yī)（科技版），2015，10（4）：77－80．

［3］ WANG J X，PENG K M，LIU H Z H， et al．Distribution and developmental changes in ghrelin－immunopositive cells in the gastrointestinaltractofAfrican ostrich chicks ［J］．Regulatory Peptides，2009，154（1）：97－101．

［4］ ZHANG X T，WANG J X，LI P，et al．Distribution and morphology of Ghrelin－immunopositive cells in the lung of the African ostrich［J］．Pakistan J Zool， 2018，50（1）：257－263．

［5］ YE L X，WANG J X，LI P，et al．Distribution and morphology of ghrelin－immunopositive cells in the testes of the African ostrich［J］．Pakistan J Zool， 2018，50（1）：29－34．

［6］ ZHANG H F， WANG J X．Morphology of the proventriculus of African ostrich［J］．Indian J Anim Res．，2018，52（1）：37－40．

［7］ WANG J X，LI P，ZHANG X T， et al．Distribution and developmental changes of ghrelin－immunopositive cells in the pancreas of African ostrich chicks （Struthio camelus） ［J］．Poultry Science，2017，96（9）：3445－3451

［8］ WANG J X，LI P，ZHANG X T，et al．Distribution and morphology of ghrelin－Immunopositive cells in the liver of the African ostrich［J］．Int J Morphol， 2017，35（4）：1285－1290

［9］ YE L X，WANG J X，LI P，et al．Distribution and morphology of ghrelin immunostained cells in the adrenal gland of the African ostrich［J］．Biotechnic ＆ Histochemistry，2017，1372631．

［10］ GUALILLO O，LAGO F，GOMEZ －REINO J，et al．Ghrelin，a widespread hormone：insights into molecular and cellular regulation of its expression and mechanism of action［J］．FEBS Letters，2003，552（2－3）：105－109．

［11］ KITAZAWA T，YOSHIDA A，TAMANO T，et al．Age－dependent reduction of Ghrelin and motilin induced contractile activity in the chicken gastrointestinal tract［J］．Peptides，2013，43：88－95．

［12］ KITAZAWA T，TERAOKA H，KAIYA H．The chicken is an interesting animal for study of the functional role of ghrelin in the gastrointestinal tract［J］．Endocr J，2017，64（Suppl）：S5．