栽培及野生粗莖秦艽質(zhì)量研究
——兼論秦艽質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)

陶愛恩，張曉燦，李 楊，羅丹丹，段寶忠

（大理大學(xué)藥學(xué)與化學(xué)學(xué)院，云南大理 671000）

粗莖秦艽（Gentiana crassicaulis Duthie ex Burk.）是傳統(tǒng)大宗商品藥材，需求量大，為2015年版藥典秦艽收載的基原物種之一，被列入《國(guó)家重點(diǎn)保護(hù)野生藥材物種名錄》，具有祛風(fēng)濕、清濕熱、止痹痛、退虛熱之功效〔1〕。粗莖秦艽在云南已有超過(guò)60年的種植歷史〔2〕，近年來(lái)，對(duì)云南栽培粗莖秦艽的質(zhì)量研究已有報(bào)道〔3-7〕，這些研究資料表明，其有效成分與秦艽（G.macrophylla Pall.）相近，抗炎、鎮(zhèn)痛效果優(yōu)于藥典收載的另外3種秦艽〔8-9〕，且產(chǎn)量有明顯優(yōu)勢(shì)〔3，5，8，10〕。因此，大力發(fā)展粗莖秦艽栽培是推進(jìn)秦艽產(chǎn)業(yè)可持續(xù)發(fā)展的必然途徑。在研究過(guò)程中發(fā)現(xiàn)，粗莖秦艽栽培品性狀與中國(guó)藥典秦艽性狀描述有差異，一定程度上阻礙了粗莖秦艽藥材的市場(chǎng)流通。鑒于此，對(duì)粗莖秦艽栽培品及野生品的質(zhì)量進(jìn)行比較研究，以期為秦艽質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的修訂提供參考。

1 儀器、試劑與材料

1.1 儀器與試劑 1200 HPLC高效液相色譜儀（美國(guó)安捷倫公司）、Agilent Zorbax SB C18色譜柱（4.6 mm×250 mm，5 μm）；KQ-5200DB 型超聲波清洗儀（昆山市超聲儀器有限公司）；GH-252型電子分析天平（A&D，深圳市盛美儀器有限公司）；Nikon E-400顯微鏡（日本尼康公司）；TS-12D生物組織自動(dòng)脫水機(jī)（上海隆拓儀器設(shè)備有限公司）；BM-Ⅶ生物組織包埋機(jī)（北京佳源興業(yè)科技有限公司）；QS-Ⅳ生物組織切片機(jī)（武漢宏強(qiáng)醫(yī)療器械有限公司）；CS-Ⅵ生物組織攤片烤片機(jī)（孝感市電子儀器廠）；SmartV250D數(shù)字?jǐn)z像機(jī)；OLYMPUSBX-41生物顯微鏡；Canon EOS 70D數(shù)碼單反相機(jī)。甲醇、乙腈為色譜純（Fish?er Scientific，F(xiàn)airlawn New Jersey），水為超純水，其他試劑為分析純。

1.2 材料 粗莖秦艽樣品采集或購(gòu)于云南、西藏及四川等地，經(jīng)大理大學(xué)段寶忠副教授鑒定為粗莖秦艽（Gentiana crassicaulis Duthie ex Burk．），憑證標(biāo)本保存于大理大學(xué)中藥標(biāo)本館，樣品信息見表1；對(duì)照品購(gòu)于成都曼斯特有限公司。

2 方法

2.1 性狀及顯微鑒別 取栽培和野生粗莖秦艽藥材，觀測(cè)藥材的形狀、大小、顏色、質(zhì)地、斷面、氣味等性狀特征。采用常規(guī)石蠟制片法制作石蠟切片〔11〕，觀察橫切面組織結(jié)構(gòu)，藥材粉碎后觀察顯微粉末特征。

表1 粗莖秦艽樣品表

2.2 浸出物測(cè)定 用乙醇作為提取溶劑，參照醇溶性浸出物測(cè)定法（《中華人民共和國(guó)藥典》2015年版通則2201）項(xiàng)下的熱浸法測(cè)定〔1〕。

2.3 含量測(cè)定及指紋圖譜數(shù)據(jù)分析 色譜條件、供試品溶液制備等參照文獻(xiàn)〔6〕進(jìn)行，采用《中藥色譜指紋圖譜相似度評(píng)價(jià)系統(tǒng)》2004 A版軟件分析指紋圖譜數(shù)據(jù)。

3 結(jié)果

3.1 藥材性狀

3.1.1 野生品 呈類圓柱形，上粗下細(xì)，扭曲不直，長(zhǎng)10～30 cm，直徑1～3 cm。表面黃棕色或灰黃色，有縱向或扭曲的縱皺紋，頂端有殘存莖基及纖維狀葉鞘。質(zhì)硬而脆，易折斷，斷面略顯油性，皮部黃色或棕黃色，木部黃色。氣特異，味苦、微澀。

3.1.2 栽培品 與野生品比較，栽培品較長(zhǎng)，支根多。表面顏色較淺，栓皮膜質(zhì)，易脫落；斷面皮部和木部顏色較淺，質(zhì)地較野生柔韌。野生品及栽培品藥材性狀見圖1。

圖1 野生及栽培粗莖秦艽藥材性狀圖

圖2 野生品及栽培品根橫切顯微特征

3.2.2 粉末特征 二者粉末顏色有微小差異，野生品粉末呈暗棕黃色，栽培品粉末呈白色。從顯微特征來(lái)看，二者無(wú)明顯差異，見圖3。其特征為：栓化細(xì)胞較多，淡黃色，表面觀呈類多角型、類長(zhǎng)方形或不規(guī)則形，直徑20～180 μm，壁薄，略彎曲，平周壁有橫向細(xì)紋理，胞腔內(nèi)含油滴狀物。內(nèi)皮層細(xì)胞大，長(zhǎng)可達(dá)500 μm，多破碎，表面觀呈類長(zhǎng)方形，側(cè)壁細(xì)波狀彎曲，平周壁可見纖細(xì)的橫向線狀紋理。導(dǎo)管較多，直徑10～50 μm。草酸鈣晶體散存于薄壁細(xì)胞中。

3.2 顯微結(jié)構(gòu)特征

3.2.1 橫切面特征 與栽培品相比，野生品外周皮以外的組織多脫落，其他結(jié)構(gòu)特征無(wú)明顯差異，見圖2?？梢钥闯觯簝烧吒鶛M切面結(jié)構(gòu)從外到內(nèi)分別為表皮、內(nèi)皮層、韌皮部及木質(zhì)部，中心無(wú)髓，射線不明顯。根外周皮木栓細(xì)胞縱向略延長(zhǎng)，內(nèi)皮層細(xì)胞表面觀呈類方形，壁近平直；韌皮部寬闊，細(xì)胞多呈類圓形，外側(cè)的較大，細(xì)胞間隙明顯，內(nèi)側(cè)細(xì)胞排列整齊和緊密；形成層明顯，由3～4列切向延長(zhǎng)的扁平薄壁細(xì)胞組成，排列緊密整齊；木質(zhì)部由不木化木薄壁細(xì)胞和木化的導(dǎo)管組成，導(dǎo)管散在或數(shù)個(gè)成群。

圖3 野生及栽培品粉末顯微特征圖

3.3 化學(xué)指紋圖譜與相似度 將12批野生品色譜圖（樣品號(hào)CY-1～CY-12）導(dǎo)入中藥指紋圖譜軟件，生成野生品指紋圖譜，見圖4A。以CY-8號(hào)藥材圖譜作為參照譜進(jìn)行匹配，生成野生品共有模式指紋圖譜，見圖4B。將12批野生品及10批栽培品與共有模式指紋圖譜比較計(jì)算相似度，結(jié)果顯示，12批野生品和10批栽培品的相似度均大于0.942，見圖5，表明二者化學(xué)指紋相似度較高。

圖4 野生品色譜指紋及共有模式圖

圖5 栽培及野生品與共有模式圖譜比較相似度結(jié)果圖

3.4 浸出物及含量 研究結(jié)果顯示，12批野生品及10批栽培品的浸出物含量在27.41%～40.46%之間，平均值33.25%，其中30%以上有20批，占90.90%，全部符合《中華人民共和國(guó)藥典》2015年版秦艽“浸出物”規(guī)定（≥20%）。見表2。

含量測(cè)定結(jié)果顯示，12批野生品及10批栽培品中馬錢甘酸和龍膽苦苷總含量在4.15%～16.80%之間，所有樣品均符合《中華人民共和國(guó)藥典》2015年版秦艽“含量要求”（≥2.5%）。10批栽培品的含量在7.42%～13.92%之間，可見栽培品的含量范圍較野生品小，表明栽培粗莖秦艽的質(zhì)量更趨于穩(wěn)定。

表2 22批樣品浸出物及含量測(cè)定結(jié)果

4 討論

本研究對(duì)粗莖秦艽野生品及栽培品的性狀、顯微特征、化學(xué)指紋、浸出物和含量進(jìn)行了比較，結(jié)果顯示二者在顯微結(jié)構(gòu)、化學(xué)指紋、浸出物和有效成分含量等方面均無(wú)明顯差異，僅在性狀方面有微小差異。生長(zhǎng)環(huán)境、采挖年限等可能是形成栽培品與野生品性狀差異的原因。對(duì)照《中華人民共和國(guó)藥典》2015年版秦艽質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，栽培品除性狀特征不符合標(biāo)準(zhǔn)外，其他項(xiàng)目均符合要求，且有效成分含量為藥典標(biāo)注的2倍之多。栽培品指紋圖譜與野生品共有模式比較，相似度均大于0.942，表明栽培品質(zhì)量均一。大量的研究已表明無(wú)論是栽培還是野生撫育的粗莖秦艽，其藥材質(zhì)量均較好〔3-4〕。粗莖秦艽藥材根粗大、較長(zhǎng)，色黃，品質(zhì)較西北出產(chǎn)者為佳〔2〕，產(chǎn)量也具有明顯優(yōu)勢(shì)。鑒于此，建議秦艽質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)修訂時(shí)，對(duì)性狀進(jìn)行補(bǔ)充和完善，這將對(duì)推進(jìn)秦艽藥材質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的應(yīng)用具有重要意義。

〔1〕國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典：一部〔M〕.北京：中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，2015：270-271.

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