治療肝纖維化藥物遞送系統(tǒng)研究進(jìn)展

范倩倩，邢 磊，喬建斌，張程璐，姜虎林

(中國藥科大學(xué)藥學(xué)院藥劑系，南京 210009)

肝臟承擔(dān)著許多重要的功能，主要包括糖、蛋白質(zhì)及脂質(zhì)的代謝、毒物及病原體的清除、體內(nèi)免疫反應(yīng)的調(diào)控等。這些繁重的功能使得肝臟容易受到各種內(nèi)源性及外源性的損傷，例如寄生蟲及微生物的感染(如瘧原蟲及肝炎病毒感染)；藥物及有毒物質(zhì)的刺激；自身免疫刺激及膽汁分泌過多刺激。當(dāng)肝臟受到持續(xù)性損傷時，將會導(dǎo)致肝臟產(chǎn)生慢性疾病最終發(fā)展形成肝纖維化，肝纖維化進(jìn)一步惡化為肝硬化。近年來，大量臨床數(shù)據(jù)及動物研究結(jié)果均表明，疾病在肝纖維化階段是可逆的，并且可以通過藥物手段進(jìn)行治療；而發(fā)展到肝硬化階段則通常需要經(jīng)過肝臟移植的方法進(jìn)行手術(shù)治療，且治療成功率低。數(shù)據(jù)結(jié)果表明，在全球范圍內(nèi)，肝硬化每年導(dǎo)致的死亡人數(shù)1980年約為67.6萬人，而在2010年已經(jīng)超過100萬人，肝硬化的致死率逐年增高[1]，因此，在肝纖維化階段進(jìn)行有效的藥物治療，對遏制病程向肝硬化階段發(fā)展顯得尤為重要。

研究發(fā)現(xiàn)，許多藥物在體外實(shí)驗中均呈現(xiàn)出很好的抗纖維化功能，而在體內(nèi)實(shí)驗中治療效果較差。其原因是大多數(shù)治療藥物(化學(xué)藥物、多肽及基因藥物)并不具有很好的肝臟蓄積及肝臟特定細(xì)胞靶向性，因此，不能達(dá)到有效的治療濃度，且被非靶器官細(xì)胞吸收后易產(chǎn)生不良反應(yīng)。納米藥物遞送系統(tǒng)是目前新興的一種藥物制劑，通過合理的設(shè)計，納米載體能夠準(zhǔn)確地將藥物遞送到靶部位及靶細(xì)胞，提高治療效果，減少不良反應(yīng)。利用納米技術(shù)精準(zhǔn)地遞送抗纖維化藥物，為肝纖維化治療提供了新方法及新思路。

1 肝纖維化的病理機(jī)制及治療策略

1.1 肝纖維化的主要病理機(jī)制[2]

肝星狀細(xì)胞(hepatic stellate cells,HSCs)是肝臟中的一種非實(shí)質(zhì)細(xì)胞，位于內(nèi)皮間隙，占肝細(xì)胞數(shù)的5%～15%。其主要功能包括：參與維生素A的代謝；通過分泌膠原及基質(zhì)金屬蛋白酶調(diào)節(jié)細(xì)胞外基質(zhì)的平衡；通過自身收縮調(diào)節(jié)內(nèi)皮間隙的壓力及血流；參與部分藥物的代謝；保護(hù)肝細(xì)胞團(tuán)。正常情況下，HSCs處于靜息狀態(tài)。當(dāng)肝臟受到損傷時，各種內(nèi)源性及外源性的損傷首先會損傷肝臟中的肝細(xì)胞，引起肝細(xì)胞的氧化應(yīng)激、凋亡或壞死，從而招募巨噬細(xì)胞及單核細(xì)胞引發(fā)肝臟炎癥。其中損傷誘導(dǎo)產(chǎn)生的活性氧、凋亡或壞死細(xì)胞所釋放的內(nèi)容物、炎癥反應(yīng)中釋放的炎癥因子都刺激著靜息的HSCs，使HSCs活化?；罨腍SCs增殖能力變強(qiáng)且基因表型發(fā)生改變，其纖維化膠原(Ⅰ、Ⅲ、Ⅴ型膠原)表達(dá)量上調(diào)，基質(zhì)金屬蛋白酶表達(dá)量下調(diào)，基質(zhì)金屬蛋白酶抑制劑表達(dá)量上調(diào)，結(jié)果使得大量纖維化膠原在細(xì)胞外基質(zhì)中累積。如果這些損傷是急性的，肝臟會啟動自我保護(hù)機(jī)制對損傷進(jìn)行修復(fù),并維持細(xì)胞外基質(zhì)的代謝平衡；如果這些損傷是持續(xù)性的，肝臟的自我修復(fù)機(jī)制則不可控，過多的纖維化膠原累積于細(xì)胞外基質(zhì)，形成瘢痕組織，嚴(yán)重阻礙肝臟與血液的物質(zhì)交換，進(jìn)一步對肝細(xì)胞造成損傷，導(dǎo)致肝功能下降，形成肝纖維化。肝纖維化的發(fā)生過程實(shí)質(zhì)是肝細(xì)胞不斷壞死且被纖維化膠原所取代的過程。

1.2 肝纖維化的治療策略

肝纖維化的治療，首先應(yīng)該清除肝損傷的因素，然后對肝纖維化進(jìn)行藥物治療。目前研究用于治療肝纖維化的化學(xué)藥物分類詳見表1。

表1用于肝纖維化治療的化學(xué)藥物分類

藥物分類藥物名稱草本植物提取物黃酮類:水飛薊賓、甘草酸、胡黃連苷、黃芩素其他類:姜黃素、阿魏酸鈉、氧化苦參堿、槲皮黃酮、岑酮、漢防己甲素、丹參酮IIV、秋水仙素過氧化物酶體增殖化受體γ激動劑羅格列酮(RSG)、匹格列酮、GW570酪氨酸激酶抑制劑尼洛替尼、金雀異黃酮、甲磺酸伊馬替尼、達(dá)沙替尼、索拉非尼Hedgehog信號抑制劑維莫德吉(Vismodegib,GDC-0449)膽酸類熊去氧膽酸類、奧貝膽酸其他類吡非尼酮(廣譜抗纖維化藥物)、BRD4抑制劑JQ1、氯沙坦、多不飽和磷脂酰膽堿

這些化學(xué)藥物在體外實(shí)驗中均呈現(xiàn)較好的抗纖維化功能，而在體內(nèi)應(yīng)用時治療效果較差，其主要原因如下：①多數(shù)抗纖維化藥物為難溶性藥物，如水飛薊賓、姜黃素、漢防己甲素等，存在口服吸收效果差、生物利用度低的問題；②部分抗纖維化藥物非特異性吸收會導(dǎo)致不良反應(yīng)的產(chǎn)生，例如：索拉非尼在正常組織的非特異吸收可能引發(fā)手足綜合征、腹瀉、以及血壓升高等不良反應(yīng)[3]，吡非尼酮易引發(fā)惡心、腹部不適、消化不良及疲勞等不良反應(yīng)[4]。此外，多肽及基因類抗纖維化藥物存在體內(nèi)半衰期短的問題，例如：γ-干擾素會快速腎清除，且體內(nèi)大多數(shù)細(xì)胞表面均具有γ-干擾素受體，易引發(fā)治療不良反應(yīng)[5]；基因藥物在無載體保護(hù)的情況下，會迅速被血液中的核酸酶降解失效。

近年來，研究者們設(shè)計了不同的藥物遞送系統(tǒng)以解決肝纖維化治療中化學(xué)藥物、多肽和基因藥物存在的上述問題。其主要策略是：①通過納米載體包載難溶性的抗纖維化藥物，提高藥物溶解度及穩(wěn)定性，提高生物利用度；②通過在納米載體的表面接枝特異性的配體，實(shí)現(xiàn)藥物遞送系統(tǒng)對肝臟特定細(xì)胞的主動靶向，增加藥物在靶細(xì)胞的濃度，提高治療效果，降低非特異性吸收、減少治療中的不良反應(yīng)；③共載不同機(jī)制的抗纖維化藥物(化學(xué)藥物、多肽及基因藥物)，通過協(xié)同增效的作用提高治療療效。本文將主要針對近年來應(yīng)用于肝纖維化治療的藥物遞送系統(tǒng)及其主動靶向策略進(jìn)行闡述與展望。

2 抗肝纖維化藥物的遞送系統(tǒng)

2.1 聚合物膠束及聚合物納米粒

利用生物相容性的聚合物膠束或聚合物納米粒遞送難溶性化學(xué)藥物是近年來研究的熱點(diǎn)。在肝纖維化治療方面，目前也有許多生物相容性的新型聚合物被合成，用于遞送難溶性的抗纖維化藥物。例如，Lin等[6]將聚乳酸-羥基乙酸共聚物-聚乙二醇(PLGA-PEG)和聚乳酸-羥基乙酸共聚物(PLAG)不同比例混合，制備了包載索拉非尼的納米粒。通過PLGA的包載提高索拉非尼的溶解度并實(shí)現(xiàn)藥物的緩慢釋放，通過PEG實(shí)現(xiàn)納米粒在體內(nèi)的長循環(huán)，從而提高納米粒在肝臟的蓄積。該制劑在動物實(shí)驗中表現(xiàn)出良好的抗纖維化效果。此外，Bisht等[7]利用聚合物N-異丙基丙烯酰胺(NIPAAM)、乙烯基吡咯烷酮(VP)及丙烯酸(AA)包載姜黃素，制備了聚合物納米制劑NanoCurcTM，能夠很好地持續(xù)維持肝臟中姜黃素的水平。

同時，許多陽離子聚合物載體也被合成用于抗纖維化基因的遞送。利用聚合物載體遞送基因藥物，可避免藥物在循環(huán)過程中被酶降解，加強(qiáng)藥物攝取，從而提高基因轉(zhuǎn)染效率。由于肝纖維化疾病涉及多種分子信號通道，利用多種藥物進(jìn)行聯(lián)合治療，通過藥物之間的協(xié)同或者互補(bǔ)作用，可以顯著增強(qiáng)肝纖維化治療療效。因此，設(shè)計新型的聚合物載體對基因藥物及化學(xué)藥物進(jìn)行聯(lián)合遞送，也是目前的研究熱點(diǎn)。目前，Kumar等[8]設(shè)計并合成了新型聚合物單甲氧基聚乙二醇-b-聚(2-甲基-2-羧基碳酸丙烯酯)-g-十二烷醇-g-四乙烯戊胺(mPEG-b-PCC-g-DC-g-TEPA)負(fù)載小分子hedgehog抑制劑——維莫德吉及miR-29b1，對肝纖維化進(jìn)行化學(xué)藥物與基因藥物的結(jié)合治療。與單一療法相比，聯(lián)合治療組具有更強(qiáng)的肝保護(hù)能力，能夠顯著降低肝損傷相關(guān)血清酶和膠原蛋白水平。此外，該研究者設(shè)計并合成了聚合物單甲氧基聚乙二醇-b-聚(碳酸酯-co-丙交酯)mPEG-b-p(CB-co-LA)，利用其包載了hedgehog抑制劑——維莫德吉及PPAR-γ受體激動劑——羅格列酮，進(jìn)行多種化學(xué)藥物的聯(lián)合治療，通過協(xié)同作用提高了肝纖維化治療療效[9]。

由于這些優(yōu)良的性質(zhì)，聚合物載體在抗肝纖維化藥物遞送中備受親睞。但是，載藥量低是目前利用聚合物載體對難溶性抗纖維化藥物遞送過程中所碰到的難題。尤其是對于草本植物提取物類藥物，其有效治療濃度一般相對較高。載藥量較低時，要達(dá)到有效治療濃度，所用的聚合物載體量相應(yīng)增加，這對聚合物載體的生物相容性要求進(jìn)一步提升。因此，設(shè)計能夠?qū)崿F(xiàn)高載藥量的聚合物載體或探討高載藥量的聚合物納米制劑制備方法，對難溶性的抗纖維化藥物進(jìn)行遞送具有重要的意義。

2.2 脂質(zhì)體及固體脂質(zhì)納米粒

肝臟是脂質(zhì)的重要代謝器官，能夠通過特異性的受體識別及攝取脂質(zhì)。此外，內(nèi)源性的脂質(zhì)具有很好的生物相容性及安全性，在體內(nèi)不會觸發(fā)內(nèi)皮網(wǎng)狀系統(tǒng)，引發(fā)免疫反應(yīng)。因此，脂質(zhì)體及固體脂質(zhì)納米顆粒具有很好的被動肝臟蓄積效果，利用其對抗纖維化藥物進(jìn)行遞送具有天然的優(yōu)勢。此外，在脂質(zhì)納米粒中加入陽離子脂質(zhì)材料可以實(shí)現(xiàn)抗纖維化基因藥物的高效遞送，例如：Kong等[10]利用膽固醇油酸酯、三油酰甘油酯、膽固醇、二油酰磷脂酰乙醇胺(DOPE)、二硬脂酰磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇(DSPE-PEG)、氨基甲?；懝檀?DC-Chol)等脂類物質(zhì)，合成了陽離子固體脂質(zhì)納米顆粒(CSLNs)，負(fù)載結(jié)締組織生長因子(CTGF)的特異性小干擾RNA治療肝纖維化，在纖維化模型小鼠上取得了很好的治療效果；Calvente等[11]利用膽固醇、聚乙二醇-十四烷基甘油酯(mPEG2000-C14glyceride)及98N12-5(1)制備了脂質(zhì)納米粒，負(fù)載對抗原骨膠原Ⅰ的小干擾RNA對肝纖維化進(jìn)行治療。利用該脂質(zhì)納米粒對中期和晚期肝纖維化小鼠進(jìn)行治療，可以抑制90%的原骨膠原Ⅰ表達(dá)并使膠原量降低40%～60%。

2.3 牛血清白蛋白納米粒

牛血清白蛋白(BSA)是一種無毒、可生物降解、生物相容性好且低成本的蛋白質(zhì)。除此之外，BSA在體內(nèi)具有較長的半衰期，且具有親疏水結(jié)構(gòu)域，既可以負(fù)載親水藥物又可以負(fù)載疏水藥物，經(jīng)交聯(lián)后形成納米顆?？捎糜谒幬镞f送且具有很好的肝臟蓄積效果。Li等[12]利用白蛋白納米粒負(fù)載水溶性藥物阿魏酸鈉(SF)對肝纖維化進(jìn)行治療。經(jīng)小鼠尾靜脈分別注射SF溶液及SF-BSA納米粒后，SF-BSA納米粒注射組小鼠，肝臟中的藥物濃度增高，其他組織中藥物濃度下降。此外，有研究者利用葡萄糖交聯(lián)白蛋白，并負(fù)載黃連素(BBR)對肝纖維化治療；與游離BBR相比，BBR/BSA納米粒能夠更強(qiáng)的抑制LX-2細(xì)胞的增殖，激活半胱氨酸蛋白酶3；在較低劑量時，BBR/BSA納米粒更大程度緩解CCl4誘導(dǎo)造成的肝損傷[13]。

2.4 無機(jī)納米粒

介孔硅納米粒具有較大的比表面積及間隙體積，可調(diào)節(jié)的介孔結(jié)構(gòu)及穩(wěn)定的物理化學(xué)性質(zhì)。除此之外，其表面還具有可修飾性。介孔硅納米粒的這些優(yōu)良性能使其在藥物遞送方面具有很強(qiáng)的優(yōu)勢。He等[14]利用介孔硅納米粒表面嫁接正電性的熒光染料羅丹明B，然后負(fù)載水溶性的ROS清除劑丹參酚酸B(SAB)對肝纖維化進(jìn)行治療。但是，許多研究表明硅類納米粒具有一定的肝毒性。Nishimori等[15]利用直徑70、300和1 000 nm(SP70、SP300和SP1000)的二氧化硅顆粒作為模型材料，研究了顆粒大小與毒性之間的關(guān)系。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，單次注射時，SP70劑量為30 mg/kg能夠引起肝損傷，而SP300或SP1000給藥劑量即使在100 mg/kg也不會引起肝損傷；注射SP70會劑量依賴性地引起血清轉(zhuǎn)氨酶及血清炎性細(xì)胞因子增高。在長期毒性考察中，每周重復(fù)兩次注射SP70，持續(xù)4周，在較低劑量(10 mg/kg)，也會引起肝纖維化。對于損傷的機(jī)制，相關(guān)研究報道，SiO2納米粒可激活枯否細(xì)胞(KCs)，促使其釋放生物活性物質(zhì)介導(dǎo)肝損傷[16]；Liu等[17]的研究也證明靜脈注射SiO2納米粒引發(fā)的肝損傷與枯否細(xì)胞密切相關(guān)，與矽肺的發(fā)生具有一定相似性。此外，Isoda等[18]證明改變納米硅表面的電性可以改變其肝毒性大小。

除硅納米粒外，也有研究者利用金納米粒遞送抗纖維化藥物。Kabir等[19]將水飛薊賓共價接枝在金納米粒表面，通過靜脈注射的方法對CCl4引發(fā)的肝損傷及肝硬化進(jìn)行治療；與注射單純的水飛薊賓相比，水飛薊賓包被的金納米?？梢燥@著降低血清中ALT、AST、ALP的水平及肝纖維化面積，并且該納米粒具有很好的安全性，在該治療過程中未產(chǎn)生不良反應(yīng)。但研究表明，金納米粒能夠劑量依賴性的引發(fā)肝損傷及肺損傷。Bartneck等[20]在金納棒表面修飾了生物相容性好的聚合物材料PEG和靶向性多肽RGD，對其肝損傷進(jìn)行了考察。在健康小鼠中，金納米棒即使在很高劑量也不會引發(fā)肝損傷；在慢性肝損傷模型中，經(jīng)肽修飾的金納米棒不會加重肝纖維化；而在免疫介導(dǎo)性肝炎中，金納米棒誘導(dǎo)的枯否細(xì)胞活化會顯著加重肝損傷。Choi等[21]研究表明對金納米進(jìn)行修飾時，金納米粒上的不同蛋白質(zhì)電暈，會改變金納米棒的物理化學(xué)性質(zhì)，從而具有不同的肝毒性。

與有機(jī)載體相比，無機(jī)載體在較低劑量時更易引發(fā)肝損傷。因此，利用無機(jī)納米載體對肝纖維化進(jìn)行藥物遞送時，應(yīng)充分考察載體的急性毒性及長期毒性，避免治療載體引發(fā)二次肝損傷。

2.5 病毒基因載體

利用腺病毒基因載體遞送抗纖維化基因?qū)Ω卫w維化進(jìn)行治療，也一直備受研究者關(guān)注。近年來，基質(zhì)金屬蛋白酶-1[22]、轉(zhuǎn)化生長因子-β1反義mRNA[23]、孤兒核受體NR4A2[24]、骨形態(tài)生成蛋白7[25]及恥骨松弛激素[26]等抗纖維化基因被腺病毒基因載體遞送，用于治療肝纖維化的研究。除此之外，腺病毒基因載體也被應(yīng)用于肝纖維化生物治療方面。Rezvani等[27]及Song等[28]利用負(fù)載肝轉(zhuǎn)錄因子的腺病毒，成功地在體內(nèi)將肌成纖維細(xì)胞轉(zhuǎn)化為肝細(xì)胞，使得肝功能有所恢復(fù)，在肝纖維化治療方面取得了很好的效果。

3 靶向肝星狀細(xì)胞的藥物遞送系統(tǒng)

由于肝星狀細(xì)胞在肝纖維化形成中發(fā)揮的重要作用，肝星狀細(xì)胞成為近些年來肝纖維化治療中常見的靶細(xì)胞。大量研究者通過在聚合物載體、脂質(zhì)體、固體脂質(zhì)納米顆粒及BSA/HSA載體表面修飾相關(guān)肝星狀細(xì)胞表面受體的特異性配體，將藥物選擇性地遞送至肝星狀細(xì)胞中，減輕對肝實(shí)質(zhì)細(xì)胞具有損傷的藥物的不良反應(yīng)，進(jìn)一步加強(qiáng)藥物的治療效果。

3.1 以維生素A作為靶頭的遞送系統(tǒng)

肝臟是維生素A儲存與代謝的重要器官，靜息的肝星狀細(xì)胞吸收和儲存人體大約80%的視黃醇。肝星狀細(xì)胞表面高表達(dá)視黃醇結(jié)合蛋白受體(RBPR)、細(xì)胞視黃醇結(jié)合蛋白(CRBP)和細(xì)胞視黃酸結(jié)合蛋白(CRABP)[29]。維生素A與視黃醇結(jié)合蛋白結(jié)合，然后通過與肝星狀細(xì)胞表面的視黃醇結(jié)合蛋白受體結(jié)合吸收入肝星狀細(xì)胞儲存[30]。

Sato等[31]將維生素A與陽離子脂質(zhì)體共孵育，維生素A具有脂溶性，能夠進(jìn)入陽離子脂質(zhì)體中。該研究通過細(xì)胞實(shí)驗及免疫組織切片結(jié)果證明維生素A的脂質(zhì)體可以結(jié)合視黃醇結(jié)合蛋白，進(jìn)而結(jié)合肝星狀細(xì)胞上的視黃醇結(jié)合蛋白受體，促進(jìn)脂質(zhì)體在肝星狀細(xì)胞上的攝取。肝臟組織中，含有維生素A的脂質(zhì)體在肝星狀細(xì)胞、枯否細(xì)胞及肝細(xì)胞上的攝取率分別為32.96%、1.65%、0.21%；無維生素A的脂質(zhì)體在肝星狀細(xì)胞、枯否細(xì)胞及肝細(xì)胞上的攝取率分別為1.34%、2.95%、0.15%。具有維生素A的脂質(zhì)體在肝臟具有更好的聚集，且集中蓄積于肝星狀細(xì)胞中。Zhang等[32]將維生素A共價接枝在低分子的陽離子聚合物聚乙烯亞胺(PEI)上，與基因結(jié)合后形成復(fù)合納米粒。該復(fù)合納米粒在血液循環(huán)中吸附血漿蛋白形成蛋白冕，經(jīng)分析鑒定該蛋白冕的主要成分是視黃醇結(jié)合蛋白；該復(fù)合納米粒在體內(nèi)能夠很好地蓄積在肝星狀細(xì)胞中，結(jié)合反義寡核酸ASO后對CCl4誘導(dǎo)及膽管結(jié)扎誘導(dǎo)產(chǎn)生的肝纖維化進(jìn)行治療，可以顯著降低Ⅰ型膠原的表達(dá)，減輕肝纖維化。此外，Duong等[33]在包載NO受體的聚合物納米粒上修飾維生素A，證明修飾維生素A的聚合物納米粒在體內(nèi)外均能夠特異性地將NO受體遞送至肝星狀細(xì)胞。

3.2 以環(huán)狀RGD肽作為靶頭的遞送系統(tǒng)

細(xì)胞與細(xì)胞外基質(zhì)之間的相互作用主要是通過細(xì)胞膜上的跨膜蛋白(特別是異二聚體整聯(lián)蛋白)介導(dǎo)。研究表明，血液和細(xì)胞外基質(zhì)中常見的黏附蛋白(如Ⅵ型膠原蛋白、纖連蛋白等)，其細(xì)胞識別位點(diǎn)均含有精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸多肽序列(RGD肽)。Marcellino等[34]發(fā)現(xiàn)環(huán)狀RGD肽[C*GRGDSPC*(其中C*表示環(huán)化半胱氨酸殘基)]能夠特異性地抑制Ⅵ型膠原與肝星狀細(xì)胞的結(jié)合，而線型的RGD肽并不能產(chǎn)生抑制效果，說明該環(huán)狀多肽能夠特異性地識別肝星狀細(xì)胞上的Ⅵ型膠原受體，干擾Ⅵ型膠原與肝星狀細(xì)胞的黏附。Ⅵ型膠原是細(xì)胞外基質(zhì)中黏接細(xì)胞及其他蛋白(Ⅰ型和Ⅲ型膠原蛋白，核心蛋白聚糖和透明質(zhì)酸)的重要膠原。肝纖維化時，肝星狀細(xì)胞伴隨著大量Ⅵ型膠原的產(chǎn)生，同時肝星狀細(xì)胞膜上的Ⅵ型膠原受體增加[2]。因此，利用環(huán)狀RGD肽修飾的各類納米載體均具有特異性靶向肝星狀細(xì)胞的潛力，這在大量研究中也得到了證明。Beljaars等[35]在血清白蛋白(HSA)上修飾10個環(huán)狀肽RGD肽，形成納米載體pCVI-HSA。體外研究表明pCVI-HSA能夠與大鼠HSCs特異性結(jié)合(尤其是活化的HSCs)。體內(nèi)免疫組化分析同時也證明，pCVI-HSA主要是與纖維化肝臟中的HSCs結(jié)合(73±14)%。Yang等[36]將氧化苦參堿(OM)包載于高分子聚乙二醇-聚(ε-己內(nèi)酯)(PEG-b-PCL)的聚合物囊泡中，然后在其表面修飾環(huán)狀RGD肽，形成具有靶向功能的含藥納米粒RGD-PM-OM。RGD-PM-OM對HSCs的增殖有較好的抑制作用，并顯著降低HSCs中α-SMA和Ⅰ型膠原基因的表達(dá)。在膽管結(jié)扎誘導(dǎo)的肝纖維化模型中，與PM-OM和OM相比，RGD-PM-OM通過降低血清和結(jié)締組織沉積中的PC-III和IV-C水平，表現(xiàn)出優(yōu)異的抗纖維化活性。除此之外，Li等[37]利用環(huán)狀RGD肽修飾的脂質(zhì)體包載肝細(xì)胞生長因子。實(shí)驗數(shù)據(jù)表明，包封HGF的靶向脂質(zhì)體能夠更好地促進(jìn)膠原纖維降解，抑制膠原蛋白生成，促進(jìn)肝硬化大鼠中α-SMA陽性細(xì)胞凋亡，緩解肝硬化。

3.3 以6-磷酸甘露糖作為靶頭的遞送系統(tǒng)

靜息的肝星狀細(xì)胞會表達(dá)甘露糖6-磷酸/胰島素樣生長因子II(M6P/IGF II)受體，在溶酶體酶靶向及調(diào)節(jié)細(xì)胞生長的過程中發(fā)揮著重要的作用[38]。在肝纖維化時，肝星狀細(xì)胞激活，M6P/IGF II受體的表達(dá)進(jìn)一步上調(diào)[38]。在體內(nèi)，M6P/IGF II受體的特異性配基是IGF-II及含有6-磷酸甘露糖基團(tuán)的蛋白物質(zhì)：潛在的轉(zhuǎn)化生長因子β(L-TGF-β)、增殖蛋白及溶酶體酶。

Beljaars等[39]將不同比例的M6P修飾在白蛋白上(M6Px-HSA，x為M6P與HAS的物質(zhì)的量比)。結(jié)果表明，隨著M6P修飾量的增加，M6Px-HSA在肝臟組織的蓄積程度增加。當(dāng)x=2～10時，M6P-HSA在肝臟的蓄積量占單劑量靜脈注射總量的(9±0.5)%；而當(dāng)x=28時，M6P-HSA在肝臟組織中的蓄積量高達(dá)(59±9)%。此外，Beljaars等[38]通過雙染色技術(shù)測定了M6Px-HSA在肝臟各類型細(xì)胞中的分布，結(jié)果表明隨著M6P修飾量的增加，M6Px-HSA在肝星狀細(xì)胞中的蓄積程度增加，其中(70±11)%的M6P28-HSA蓄積于肝星狀細(xì)胞內(nèi)。Beljaars等[39]還發(fā)現(xiàn)溶酶體通路抑制劑莫能菌素能夠特異性的抑制M6P28-HSA在肝星狀細(xì)胞上的攝取，進(jìn)一步確定擬糖蛋白M6P28-HSA是通過與M6P/IGF II受體結(jié)合內(nèi)吞入肝星狀細(xì)胞。通過M6P-HSA將抗纖維化藥物遞送至肝星狀細(xì)胞中進(jìn)行抗纖維化治療具有較大的潛力。Luk等[40]利用M6P26-HSA包載抗纖維化藥物18β-甘草次酸對膽管結(jié)扎誘導(dǎo)的肝纖維化進(jìn)行治療，取得了較好的效果。除化學(xué)藥物外，M6P-HSA載體也可以對寡核苷酸進(jìn)行遞送。Ye等[41]利用33P對寡核苷酸(TFO)進(jìn)行標(biāo)記，并通過二硫鍵將其接枝在M6P20-BSA上；尾靜脈注射33P-TFO-M6P-BSA 30 min后，其66%蓄積于肝臟組織中，遠(yuǎn)高于游離的33P-TFO；通過密度梯度離心的方法分離肝臟各類細(xì)胞，發(fā)現(xiàn)33P-TFO-M6P-BSA絕大部分均在肝星狀細(xì)胞中。值得注意的是，目前仍沒有研究證明將6-磷酸甘露糖修飾在聚合物納米粒、脂質(zhì)體或無機(jī)納米粒等其他納米載體上，具有肝星狀細(xì)胞靶向的作用。M6P-HSA能夠結(jié)合M6P/IGF II受體內(nèi)吞入肝星狀細(xì)胞，不僅與其修飾M6P配基相關(guān)，M6P-HSA作為擬糖蛋白能夠在空間上滿足M6P/IGF II受體配體識別域在其中發(fā)揮著重要的作用。

3.4 以雙環(huán)的血小板衍生生長因子β受體結(jié)合肽作為靶頭的遞送系統(tǒng)

肝纖維化時，損傷的肝細(xì)胞、炎癥細(xì)胞及非實(shí)質(zhì)細(xì)胞會分泌大量的促生長因子及促纖維化因子，如血小板衍生生長因子(PDGF)及轉(zhuǎn)化生長因子-β(TGF-β)，促使靜息肝星狀細(xì)胞表型轉(zhuǎn)變；與此同時，活化的HSCs上血小板衍生生長因子β受體(PDGFβR)表達(dá)上調(diào)，能夠特異性結(jié)合這些受體的多肽有望用于肝纖維化的靶向治療[42]。BiPPB是能夠特異性地靶向PDGFβR的一段結(jié)合肽:*Cys-Ser-Arg-Asn-Leu-Ile-Asp-Cys*Gly-Gly-Gly-Asp-Gly-Gly*Cys-Ser-Arg-Asn-Leu-Ile-Asp-Cys*(其中C*表示環(huán)化半胱氨酸殘基)。Bansal等利用此多肽在向肝星狀細(xì)胞靶向遞送γ-干擾素(IFNγ)方面做了相關(guān)研究。首先，Bansal等[43]將BiPPB接枝在HSA上(PPB-HSA)，然后通過雙官能團(tuán)的PEG(Mal-PEG-SCM)與IFNγ-SATA反應(yīng)，將IFNγ接枝與載體上，形成治療載體PPB-HSA-PEG-IFNγ。PPB-HSA-PEG-IFNγ中IFNγ與未修飾的IFNγ類似，有著完整的生物學(xué)活性；在體外實(shí)驗中，PPB-HSA-PEG-IFNγ能夠特異性地結(jié)合人肝星狀細(xì)胞及大鼠原代肝星狀細(xì)胞；在體內(nèi)實(shí)驗中，PPB-HSA-PEG-IFNγ蓄積于高表達(dá)PDGFβR的肝星狀細(xì)胞中，激活I(lǐng)FNγ介導(dǎo)的信號通路，更好的治療CCl4誘導(dǎo)形成的肝纖維化。隨后，為進(jìn)一步提高IFNγ的靶向遞送，Bansal等[44]還合成了去除IFNγ受體結(jié)合段的IFNγ模擬肽mimIFNγ，通過雙官能團(tuán)的PEG直接將mimIFNγ與BiPPB相連接，形成了mimIFNγ-PEG-BiPPB；在實(shí)驗中mimIFNγ-PEG-BiPPB也表現(xiàn)出很好的特異性及治療效果。

4 治療肝纖維化的其他靶向遞送系統(tǒng)

4.1 靶向肝細(xì)胞的藥物遞送系統(tǒng)

肝細(xì)胞占整個肝臟細(xì)胞比例60%，占肝體積80%，并承擔(dān)著糖、蛋白質(zhì)及脂質(zhì)代謝，肝臟解毒等重要功能。肝細(xì)胞受到損傷是引發(fā)肝纖維化的基本原因，而肝纖維化后，肝星狀細(xì)胞活化產(chǎn)生的大量纖維化膠原累積于細(xì)胞外基質(zhì)，嚴(yán)重阻礙肝細(xì)胞與血液中的物質(zhì)交換，進(jìn)一步加劇肝細(xì)胞的損傷，導(dǎo)致肝功能下降[2]。在肝纖維化治療中，將藥物選擇性遞送至肝細(xì)胞，保護(hù)肝細(xì)胞、維持肝細(xì)胞的功能尤為重要。

脫唾液酸糖蛋白受體在肝細(xì)胞上高表達(dá)，并且具有高親和力和快速內(nèi)化率。半乳糖基(GAL)化大分子可以特異性地靶向肝細(xì)胞表面的脫唾液酸糖蛋白，大量研究表明半乳糖化的載體可以選擇性地將藥物遞送至肝細(xì)胞。例如，Craparo等[45]合成了末端接枝半乳糖的高分子PHEA-EDA-PLA-GAL，利用此聚合物形成的膠束包載疏水性的前藥三唑核苷(RBV)，在體外證明了該膠束靶向HepG2細(xì)胞的能力。Morille等[46]將DNA與陽離子脂質(zhì)DOTAP/DOPE結(jié)合，制備陽離子脂質(zhì)納米粒。在脂質(zhì)納米粒中加入DSPE-mPEG2000-GAL或F108-GAL，與加入未修飾GAL的DSPE-mPEG2000或F108相比，能夠顯著提高陽離子脂質(zhì)體在各類肝細(xì)胞上的轉(zhuǎn)染效率。在肝纖維化治療方面，Mandal等[47]利用半乳糖修飾的脂質(zhì)體包載槲皮黃酮，通過保護(hù)肝細(xì)胞的治療方法，對抗亞砷酸鹽誘導(dǎo)形成的肝纖維化。在NaAsO2注射前，用包載槲皮黃酮的半乳糖化脂質(zhì)體處理大鼠，該制劑能夠保護(hù)肝細(xì)胞，避免肝細(xì)胞發(fā)生脂肪變性、壞死。

除此之外，小鼠肝細(xì)胞膜表面存在甘草酸(GL)的特殊受體，Mao等[48]將甘草酸修飾于白蛋白納米粒上，通過實(shí)驗證實(shí)了甘草酸修飾的白蛋白能夠與鼠原代肝細(xì)胞結(jié)合，增強(qiáng)納米粒的攝取。除此之外，甘草酸還具有肝保護(hù)能力，具有抗纖維化的功效[49]。因此，利用甘草酸修飾的載體對肝細(xì)胞進(jìn)行保肝藥物遞送具有應(yīng)用潛力。

4.2 靶向枯否細(xì)胞的藥物遞送系統(tǒng)

枯否細(xì)胞是肝臟組織特有的巨噬細(xì)胞，位于肝血竇中，占全身巨噬細(xì)胞的80%～90%，是先天性免疫的第一道屏障，具有清除內(nèi)部凋亡細(xì)胞及外來異物，維持內(nèi)環(huán)境穩(wěn)態(tài)的重要作用。除此之外，枯否細(xì)胞在維持肝臟組織內(nèi)穩(wěn)態(tài)中也發(fā)揮著重要的作用。在肝損傷時，枯否細(xì)胞識別肝損傷，處于氧化應(yīng)激狀態(tài)，激活的枯否細(xì)胞釋放大量炎癥因子(如轉(zhuǎn)化生長因子-β1和血小板衍生生長因子)，活化肝星狀細(xì)胞，誘導(dǎo)纖維化發(fā)生。同時，在損傷修復(fù)時，枯否細(xì)胞表型轉(zhuǎn)變，釋放大量抗炎癥因子及基質(zhì)金屬蛋白酶，起到抗炎及降解纖維化的作用[50]。因此，枯否細(xì)胞也是肝纖維化治療潛在的靶細(xì)胞之一，將活性氧清除劑、抗炎藥物、促枯否細(xì)胞表型轉(zhuǎn)化藥物及針對炎癥因子表達(dá)的小干擾RNA靶向遞送至枯否細(xì)胞進(jìn)行抗纖維化治療具有巨大的潛力。

磷脂酰絲氨酸(PS)是細(xì)胞膜中的陰離子磷脂成分，并且通常存在于細(xì)胞膜磷脂雙層的內(nèi)層。當(dāng)細(xì)胞發(fā)生凋亡時，大量的PS轉(zhuǎn)移到細(xì)胞膜外部，暴露的PS是巨噬細(xì)胞吞噬凋亡細(xì)胞的特異性識別信號[51]。含有PS的納米材料可模擬凋亡細(xì)胞，被巨噬細(xì)胞特異性識別，同時具有一定的免疫調(diào)節(jié)作用[52]。Wang等[53]將磷脂酰絲氨酸(PS)混入包載姜黃素(Cur)的納米脂質(zhì)載體(NLCs)，制備了納米制劑Cur-mNLC，并考察了其在大鼠肝纖維化模型中的治療效果。與未修飾的NLCs相比，PS修飾的NLCs在纖維化的肝臟中蓄積程度最高，PS修飾增強(qiáng)了納米粒靶向病變肝臟的能力；與所有對照相比，Cur-mNLC在降低肝損傷和纖維化方面更有效。除此之外，納米粒作為一種外來物，易被枯否細(xì)胞通過食腐受體識別吞噬，納米粒的粒徑及表面電荷在其中起到了決定性的作用。通常來說，表面強(qiáng)正電的納米粒，經(jīng)靜脈注射后在血液循環(huán)中易吸附血漿蛋白，被枯否細(xì)胞特異性識別吞噬；粒徑大于400 nm的納米粒易被枯否細(xì)胞識別吞噬[54]。表面具有PEG修飾的納米載體，由于PEG的親水性及電中性，可以減少納米載體與血漿蛋白接觸，減少枯否細(xì)胞對納米粒的攝取。與此相反，未經(jīng)特殊修飾的納米粒絕大部分都會被枯否細(xì)胞識別吞噬，可以被動地實(shí)現(xiàn)對枯否細(xì)胞進(jìn)行藥物遞送，但存在血液循環(huán)周期短的問題。如Bonepally等[55]通過乳化溶劑蒸發(fā)法將活性氧清除劑水飛薊賓包載在聚-ε-己內(nèi)酯中，該納米粒通過被枯否細(xì)胞識別被動吸收富集于肝臟以達(dá)到治療肝纖維化的目的。在CCl4誘導(dǎo)的模型中，該納米顆粒能夠使血清肝酶水平逆轉(zhuǎn)95%，而相同量的藥物溶液僅能夠逆轉(zhuǎn)50%。

5 結(jié)語與展望

肝纖維化是嚴(yán)重威脅人類健康的重大疾病，其分子機(jī)制復(fù)雜，但隨著近些年分子機(jī)制的研究不斷深入，許多的抗纖維化藥物也不斷地被發(fā)現(xiàn)，并在體外表現(xiàn)出強(qiáng)的抗纖維化效果[56]；但大多數(shù)藥物溶解度低、無特異性、在肝臟蓄積效果差，大大限制了其體內(nèi)的抗纖維化效果，所以目前臨床上尚無治療肝纖維化的強(qiáng)效藥物。除此之外，肝纖維化的發(fā)生是肝臟中各類型細(xì)胞共同作用的結(jié)果，需要精準(zhǔn)針對性治療。目前，肝纖維化治療中針對各類型細(xì)胞治療策略基本分為：①保護(hù)肝細(xì)胞，避免肝細(xì)胞損傷，增強(qiáng)肝細(xì)胞的增殖能力；②抑制肝星狀細(xì)胞增殖，促進(jìn)肝星狀細(xì)胞凋亡或使其向靜息狀態(tài)轉(zhuǎn)變，抑制肝星狀細(xì)胞分泌纖維化膠原或促進(jìn)其表達(dá)基質(zhì)金屬蛋白酶；③抑制枯否細(xì)胞分泌促炎癥因子及促纖維化因子，促進(jìn)枯否細(xì)胞向降解纖維化表型轉(zhuǎn)變；④阻止肝竇內(nèi)皮細(xì)胞血管化等等。

在藥物載體上修飾不同的特異性配體，是實(shí)現(xiàn)肝纖維化藥物靶向遞送的重要環(huán)節(jié)。但是，除此之外，在肝纖維化病程中存在的許多客觀因素也會對肝纖維化藥物遞送系統(tǒng)產(chǎn)生阻礙。例如：正常情況下，肝血竇內(nèi)皮細(xì)胞層有豐富的窗孔，大多聚集形成篩板狀，可阻擋直徑大小200～500 nm的乳糜微粒，直徑較小的乳糜微粒降解物則可通過。而肝纖維化病變中，肝血竇內(nèi)皮細(xì)胞層在結(jié)構(gòu)上出現(xiàn)血管化現(xiàn)象(窗孔減少甚至消失)。此外，在正常的肝臟組織中，肝間隙的低密度膜樣基質(zhì)主要是由膠原Ⅳ和Ⅵ組成，肝纖維化后主要由Ⅰ膠原、Ⅲ膠原及纖維蛋白組成，且膠原沉積量約為正常情況下的3～10倍[2,57]。上述這些因素嚴(yán)重阻礙了肝臟的物質(zhì)交換，勢必對納米載體靶向肝細(xì)胞及肝星狀細(xì)胞造成影響。設(shè)計合理的納米載體，從藥物制劑方面著手，成功克服這些藥物遞送中的障礙，仍是肝纖維化藥物遞送研究者需要解決的關(guān)鍵問題。

雖然，納米制劑在臨床上的應(yīng)用仍然有許多關(guān)鍵問題有待考察。隨著研究的深入，安全、高效、特異的抗纖維化藥物遞送在肝纖維化治療中發(fā)揮著不可替代的重要作用，有望在不久的將來應(yīng)用于臨床肝纖維化的治療。

參 考 文 獻(xiàn)

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