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      復(fù)方薰衣草油膏的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究

      2018-07-12 22:18:52張群蔡曉翠康雨彤毛艷
      中國(guó)藥房 2018年6期
      關(guān)鍵詞:薄荷腦薄層色譜法氣相色譜法

      張群 蔡曉翠 康雨彤 毛艷

      摘 要 目的:建立復(fù)方薰衣草油膏的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。方法:采用薄層色譜法(TLC)對(duì)制劑中黃芩提取物、薰衣草油進(jìn)行定性鑒別;采用氣相色譜法(GC)對(duì)制劑中薄荷素油進(jìn)行定性鑒別;采用 GC法測(cè)定制劑中薄荷腦的含量,色譜柱為Agilent DB-WAX毛細(xì)管柱,程序升溫,進(jìn)樣口溫度為250 ℃,檢測(cè)器溫度為250 ℃,進(jìn)樣量為1 μL,分流比為5 ∶ 1,分流進(jìn)樣。結(jié)果:黃芩苷提取物、薰衣草油的TLC斑點(diǎn)清晰、分離度好、陰性對(duì)照無(wú)干擾。薄荷素油供試品色譜圖中與對(duì)照品色譜峰保留時(shí)間位置處有相同的色譜峰。薄荷腦檢測(cè)進(jìn)樣量線性范圍為0.113 4~1.133 5 μg(r=0.999 4);精密度、穩(wěn)定性、重復(fù)性試驗(yàn)的RSD≤2.0%;加樣回收率為95.40%~99.82%(RSD=1.61%,n=6)。結(jié)論:所建質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)可用于復(fù)方薰衣草油膏的質(zhì)量控制。

      關(guān)鍵詞 復(fù)方薰衣草油膏;黃芩提取物;薰衣草油;薄荷素油;薄荷腦;薄層色譜法;氣相色譜法

      ABSTRACT OBJECTIVE: To establish the quality standard for Compound Lavandula angustifolia ointment. METHODS: TLC was used for the qualitative identification of ethanol extract from Scutellaria baicalensis and volatile oil of L. angustifolia. GC method was used for qualitative identification of dementholized peppermint oil. GC method was used to determine the content of menthol. The determination was performed on Agilent DB-WAX capillary column,with temperature programming. The injector temperature was 250 ℃, and the temperature of detector was 250 ℃. The injection volume was 1 μL and the split ratio was 5 ∶ 1 by split sampling. RESULTS: TLC spots of ethanol extract of S. baicalensis and volatile oil of L. angustifolia were clear and well-repeated without interference from negative control. The chromatographic peaks in TLC of test samples of dementholized peppermint oil had same retention time as that of substance control. The linear range of menthol injection amount was 0.113 4-1.133 5 μg(r=0.999 4). RSDs of precision, intra-day precision,stability and reproducibility tests were not higher than 2.0%. The recoveries were 95.40%-99.82%(RSD=1.61%,n=6). CONCLUSIONS: Established quality standard can be used for the quality control of Compound L. angustifolia ointment.

      KEYWORDS Compound Lavandula angustifolia ointment; Scutellaria baicalensis extract; Lavender angustifolia oil; Dementholized peppermint oil; Menthol; TLC; GC

      復(fù)方薰衣草油膏是新疆伊犁州友誼醫(yī)院自制的治療燒燙傷的臨床經(jīng)驗(yàn)方,由黃芩提取物、薰衣草油、薄荷素油組合而成。該油膏是在現(xiàn)代中醫(yī)藥理論及維吾爾醫(yī)理論指導(dǎo)下制成的中藥復(fù)方制劑,具有清熱解毒、止痛、生肌的功效,可用于各種燒、燙、灼傷的治療,對(duì)燙傷皮膚創(chuàng)面有促愈合、抗炎的作用,臨床療效良好。本試驗(yàn)采用薄層色譜法(TLC)對(duì)制劑中黃芩提取物、薰衣草油進(jìn)行了定性鑒別,采用氣相色譜法(GC)對(duì)制劑中薄荷素油進(jìn)行了定性鑒別,采用GC法對(duì)制劑中薄荷腦進(jìn)行了含量測(cè)定[1],旨在為其臨床安全用藥與質(zhì)量控制提供參考。

      1 材料

      1.1 儀器

      7890A GC型GC儀,包括氫火焰離子化檢測(cè)器(美國(guó)Agilent Technologies公司);BP211D型十萬(wàn)分之一電子分析天平、CPA225D型十萬(wàn)分之一電子分析天平(德國(guó)Sartorius公司); SK3300H型超聲清洗器(上??茖?dǎo)超聲儀器有限公司);UPT-11-10T型實(shí)驗(yàn)超純水機(jī)(成都超純科技有限公司);DT-500A型電子計(jì)數(shù)天平(常熟金羊砝碼儀器有限公司金羊天平儀器廠);YOKO-ZS型紫外線分析攝影儀(武漢藥科新技術(shù)開(kāi)發(fā)有限公司)。

      1.2 藥品與試劑

      復(fù)方薰衣草油膏(新疆伊犁州友誼醫(yī)院制劑室自制,批號(hào):20150824、20150826、20150828,規(guī)格:20 g/管);黃芩苷對(duì)照品(批號(hào):110715-201117,純度:93.3%)、芳樟醇對(duì)照品(批號(hào):111503-201302,純度:98.5%)、薄荷素油對(duì)照品(批號(hào):111551-200702,純度:98.0%)、桉油精對(duì)照品(批號(hào):110788-201105,純度:98.4%)、(-)-薄荷酮對(duì)照品(批號(hào):111705-200602,純度:99.8%)均購(gòu)自中國(guó)食品藥品檢定研究院;萘對(duì)照品(批號(hào):111673-200803,純度:100%)、薄荷腦對(duì)照品(批號(hào):110728-200506,純度:100%)均購(gòu)自深圳健竹生物科技有限公司;聚乙酰胺板(浙江省臺(tái)州市路橋四甲生化塑料廠);硅膠G薄層板(青島海洋化工廠);甲醇為色譜純,其余試劑均為分析純,水為純化水。

      2 方法與結(jié)果

      2.1 黃芩提取物和薰衣草油的鑒別

      2.1.1 黃芩提取物 取樣品20 mg,加甲醇1 mL,超聲(功率:250 W,頻率:40 kHz,下同)處理15 min,放冷,以半徑為5 cm、2 000 r/min離心10 min,取上清液,濾過(guò),取續(xù)濾液作為供試品溶液。取黃芩苷對(duì)照品,加甲醇制成質(zhì)量濃度為1 mg/mL的對(duì)照品溶液。按復(fù)方薰衣草油膏處方和工藝制備缺黃芩提取物的陰性樣品,并按供試品溶液制備方法制成陰性對(duì)照溶液。按2015年版《中國(guó)藥典》(四部)TLC法[2]試驗(yàn),吸取上述3種溶液各2 μL,分別點(diǎn)于同一聚乙酰胺板上,以醋酸為展開(kāi)劑,展開(kāi),取出,晾干,置紫外光燈(365 nm)下檢視。結(jié)果,供試品色譜中,在與對(duì)照品色譜相應(yīng)位置上顯相同顏色的斑點(diǎn),陰性對(duì)照無(wú)干擾,詳見(jiàn)圖1。

      2.1.2 薰衣草油 取樣品5 g,置于燒瓶中,連接揮發(fā)油測(cè)定器,自測(cè)定器上端加水至刻度并溢流入燒瓶時(shí)為止,加熱至沸,并保持微沸3 h,放冷,收集所得揮發(fā)油,加無(wú)水乙醇5 mL,混勻,作為供試品溶液。取芳樟醇對(duì)照品,加無(wú)水乙醇制成質(zhì)量濃度為5 mg/mL的對(duì)照品溶液。按復(fù)方薰衣草油膏處方和工藝制備缺薰衣草油的陰性樣品,并按供試品溶液制備方法制成陰性對(duì)照溶液。按2015年版《中國(guó)藥典》(四部)TLC法[2]試驗(yàn),吸取上述3種溶液各2 μL,分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上,以石油醚(60~90 ℃)-乙酸乙酯(9 ∶ 1,V/V)為展開(kāi)劑,展開(kāi),取出,晾干,噴以含5%香草醛的25%硫酸乙醇溶液,加熱至斑點(diǎn)顯色清晰,置紫外光燈(365 nm)下檢視。結(jié)果,供試品色譜中,在與對(duì)照品色譜相應(yīng)位置上顯相同顏色的斑點(diǎn),陰性對(duì)照無(wú)干擾,詳見(jiàn)圖2。

      2.2 薄荷素油的鑒別

      2.2.1 色譜條件 色譜柱:改性聚乙二醇為固定相的Agilent DB-WAX毛細(xì)管柱(30 m×0.32 mm,0.25 μm);程序升溫:初始溫度60 ℃,保持4 min,以2 ℃/min的速度升溫至100 ℃,再以10 ℃/min的速度升溫至230 ℃,保持1 min;進(jìn)樣口溫度:250 ℃;檢測(cè)口溫度:250 ℃;進(jìn)樣量:1 μL;分流比:5 ∶ 1,分流進(jìn)樣。

      2.2.2 對(duì)照品溶液的制備 取薄荷素油對(duì)照品適量,精密稱定,加無(wú)水乙醇制成質(zhì)量濃度均為0.2 mg/mL的對(duì)照品溶液。

      2.2.3 供試品溶液的制備 取樣品0.1 g,精密稱定,置于具塞錐形瓶中,精密加入無(wú)水乙醇25 mL,超聲處理20 min,放冷,搖勻,濾過(guò),取續(xù)濾液,即得。

      2.2.4 陰性對(duì)照溶液的制備 按復(fù)方薰衣草油膏處方和工藝制備缺薄荷素油的陰性樣品,并按“2.2.3”項(xiàng)下方法制成陰性對(duì)照溶液。

      2.2.5 系統(tǒng)適用性試驗(yàn)與專屬性試驗(yàn) 取上述對(duì)照品溶液、供試品溶液、陰性對(duì)照溶液各適量,按“2.2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定。結(jié)果,理論板數(shù)以薄荷素油峰計(jì)不低于10 000,各成分基線分離良好,分離度均大于1.5;供試品溶液色譜圖中,在與對(duì)照品色譜峰保留時(shí)間位置處有相同的色譜峰,且陰性對(duì)照無(wú)干擾,詳見(jiàn)圖3。

      2.2.6 耐用性試驗(yàn) 取上述對(duì)照品溶液、供試品溶液、陰性對(duì)照溶液各適量,按“2.2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定,分別考察不同色譜柱(DB-WAX、INETCAP-WAX)、進(jìn)樣口溫度(240、250、260 ℃)和檢測(cè)器溫度(240、250、260 ℃)對(duì)色譜峰的影響。結(jié)果表明,采用不同色譜柱、不同進(jìn)樣口溫度和不同檢測(cè)器溫度時(shí),對(duì)照品和供試品中主峰的分離度均大于1.5,且陰性對(duì)照無(wú)干擾,表明本方法耐用性良好。

      2.3 薄荷腦的含量測(cè)定

      2.3.1 色譜條件 色譜柱: Agilent DB-WAX毛細(xì)管柱(30 m×0.32 mm,0.25 μm);程序升溫:初始溫度60 ℃,保持4 min,以2 ℃/min的速度升溫至100 ℃,再以10 ℃/min的速度升溫至230 ℃,保持1 min;進(jìn)樣口溫度:250 ℃;檢測(cè)器溫度:250 ℃;進(jìn)樣量:1 μL;分流比:5 ∶ 1,分流進(jìn)樣。

      2.3.2 對(duì)照品溶液的制備 精密稱取薄荷腦對(duì)照品22.67 mg,置于10 mL量瓶中,加無(wú)水乙醇溶解并定容,搖勻,制成質(zhì)量濃度為2.267 mg/mL的對(duì)照品溶液。

      2.3.3 內(nèi)標(biāo)溶液的制備 精密稱取萘對(duì)照品46.05 mg,置于25 mL量瓶中,加無(wú)水乙醇溶解并定容,搖勻,制成質(zhì)量濃度為1.842 mg/mL的內(nèi)標(biāo)溶液。

      2.3.4 對(duì)照溶液的制備 分別精密吸取上述內(nèi)標(biāo)溶液0.2 mL、對(duì)照品溶液0.2 mL,置于同一5 mL量瓶中,加無(wú)水乙醇定容,搖勻,即得。

      2.3.5 供試品溶液的制備 取樣品約0.1 g,精密稱定,置于具塞錐形瓶中,精密加入無(wú)水乙醇溶液25 mL,稱定質(zhì)量,超聲處理30 min,再次稱定質(zhì)量,用無(wú)水乙醇補(bǔ)足減失的質(zhì)量,搖勻,濾過(guò),取續(xù)濾液0.2 mL,精密吸取上述內(nèi)標(biāo)溶液0.2 mL,加無(wú)水乙醇定容至5 mL,即得。

      2.3.6 陰性對(duì)照溶液的制備 按復(fù)方薰衣草油膏處方和工藝制備缺薄荷素油的陰性樣品,并按“2.3.5”項(xiàng)下方法制成陰性對(duì)照溶液(不加內(nèi)標(biāo))。

      2.3.7 系統(tǒng)適用性試驗(yàn) 取上述對(duì)照溶液、供試品溶液、陰性對(duì)照溶液各適量,按“2.3.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定。結(jié)果,理論板數(shù)以萘峰計(jì)不低于20 000,分離度大于1.5,各成分基線分離良好;供試品溶液色譜圖中,在與對(duì)照品色譜相應(yīng)位置上有相同的色譜峰,且陰性對(duì)照無(wú)干擾,詳見(jiàn)圖4。

      2.3.8 線性關(guān)系考察 分別精密量取“2.3.2”項(xiàng)下對(duì)照品溶液0.05、0.1、0.15、0.2、0.5 mL,分別置于5 mL量瓶中,加上述內(nèi)標(biāo)溶液0.2 mL,加無(wú)水乙醇定容,制成系列對(duì)照溶液。精密量取上述系列對(duì)照溶液各1 μL,按“2.3.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定,記錄峰面積。以薄荷腦進(jìn)樣量(x,μg)為橫坐標(biāo)、薄荷腦和萘的峰面積比(y)為縱坐標(biāo)進(jìn)行線性回歸,得回歸方程y=2.164 5x-0.030 9(r=0.999 4)。結(jié)果表明,薄荷腦檢測(cè)進(jìn)樣量線性范圍為0.113 4~1.133 5 μg。

      2.3.9 精密度試驗(yàn) 精密量取“2.3.4” 項(xiàng)下對(duì)照溶液0.2 mL,置于5 mL量瓶中,加無(wú)水乙醇定容,得試驗(yàn)用溶液。精密量取上述試驗(yàn)用溶液適量,按“2.3.1”項(xiàng)下色譜條件連續(xù)進(jìn)樣測(cè)定6次,記錄峰面積。結(jié)果,薄荷腦峰面積的RSD為1.01%(n=6),表明儀器精密度良好。

      2.3.10 日間精密度試驗(yàn) 精密稱取供試品(批號(hào):20150828)適量,在不同時(shí)間點(diǎn)由不同分析人員按“2.3.5”項(xiàng)下方法制備供試品溶液,共8份,再按“2.3.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定,記錄峰面積并計(jì)算樣品含量。結(jié)果,薄荷腦含量平均值為16.75 mg/g ,RSD為1.43%(n=8),表明日間精密度良好。

      2.3.11 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取“2.3.5”項(xiàng)下供試品溶液(批號(hào):20150828)適量,分別于室溫下放置0、2、4、8、12、24 h時(shí)按“2.3.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定,記錄峰面積。結(jié)果,薄荷腦峰面積的RSD為1.37%(n=6),表明供試品溶液室溫放置24 h內(nèi)基本穩(wěn)定。

      2.3.12 重復(fù)性試驗(yàn) 精密稱取樣品(批號(hào):20150828)適量,按“2.3.5”項(xiàng)下方法制備供試品溶液,共6份,再按“2.3.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定,記錄峰面積,計(jì)算樣品含量。結(jié)果,薄荷腦含量平均值為17.15 mg/g,RSD為1.74%(n=6),表明本方法重復(fù)性良好。

      2.3.13 加樣回收率試驗(yàn) 取已知含量樣品(批號(hào):20150828)適量,共6份,分別加入一定量的薄荷腦對(duì)照品溶液,按“2.3.5”項(xiàng)下方法制備供試品溶液,再按“2.3.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定,記錄峰面積并計(jì)算加樣回收率,結(jié)果見(jiàn)表1。

      2.3.14 樣品含量測(cè)定 取3批樣品各適量,分別按“2.3.5”項(xiàng)下方法制備供試品溶液,再按“2.3.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定,每批樣品平行測(cè)定3次,記錄峰面積并計(jì)算樣品含量,結(jié)果見(jiàn)表2。

      3 討論

      在黃芩苷提取物TLC鑒別預(yù)試驗(yàn)中,筆者分別考察了醋酸、乙酸乙酯-甲醇-甲酸(3 ∶ 1 ∶ 2,V/V/V)、乙酸乙酯-丁酮-甲酸-水(5 ∶ 3 ∶ 1 ∶ 1,V/V/V/V)作為展開(kāi)劑時(shí)對(duì)結(jié)果的影響[2-3]。結(jié)果顯示,采用醋酸為展開(kāi)劑時(shí)TLC能達(dá)到良好分離、斑點(diǎn)清晰、重復(fù)性好、陰性對(duì)照無(wú)干擾。同時(shí),筆者考察了硅膠G板和聚乙酰胺板對(duì)展開(kāi)結(jié)果的影響。結(jié)果顯示,采用聚乙酰胺板操作簡(jiǎn)便、展開(kāi)速度較快、節(jié)約時(shí)間和試劑。此外,筆者還分別考察了不同溫度(8、22、35 ℃)、不同相對(duì)濕度(40%、72%、95%)對(duì)展開(kāi)結(jié)果的影響[4-5]。結(jié)果顯示,不同溫度和不同相對(duì)濕度條件下,黃芩苷提取物的TLC均能達(dá)到良好分離、斑點(diǎn)清晰。

      在薰衣草油TLC鑒別預(yù)試驗(yàn)中,筆者分別考察了甲苯-乙酸乙酯(4 ∶ 1,V/V)、甲苯-乙酸乙酯(9 ∶ 1,V/V)、石油醚-乙酸乙酯(9 ∶ 1,V/V)作為展開(kāi)劑時(shí)對(duì)結(jié)果的影響[6-7]。結(jié)果顯示,采用甲苯-乙酸乙酯(9 ∶ 1,V/V)、石油醚-乙酸乙酯(9 ∶ 1,V/V)為展開(kāi)劑時(shí)TLC均能達(dá)到良好分離、斑點(diǎn)清晰、重復(fù)性好、陰性對(duì)照無(wú)干擾。考慮甲苯的毒性較大,故選擇石油醚-乙酸乙酯(9 ∶ 1,V/V)為展開(kāi)劑。同時(shí),筆者還分別考察了不同溫度(8、22、35 ℃)、不同相對(duì)濕度(40%、72%、95%)對(duì)展開(kāi)結(jié)果的影響[8-9]。結(jié)果顯示,不同溫度和不同相對(duì)濕度條件下,薰衣草油的TLC均能達(dá)到良好分離、斑點(diǎn)清晰。

      在薄荷素油GC鑒別預(yù)試驗(yàn)中,筆者參照了2015年版《中國(guó)藥典》(一部)的指紋圖譜法[1],分別考察了桉油精、(-)-薄荷酮、薄荷腦、薄荷素油對(duì)照品的色譜峰。結(jié)果顯示,薄荷素油峰中包含了桉油精、(-)-薄荷酮、薄荷腦峰,故該鑒別的參照溶液最終選擇薄荷素油對(duì)照品溶液。

      在薄荷腦含量測(cè)定預(yù)試驗(yàn)中,萘為易揮發(fā)物質(zhì),在相應(yīng)色譜條件下,其保留時(shí)間與薄荷腦較接近,而供試品中不含有該化合物,因此選擇其作為內(nèi)標(biāo)物。筆者分別考察了不同廠家色譜柱(DB-WAX、INETCAP- WAX)、進(jìn)樣口溫度(240、250、260 ℃)、檢測(cè)器溫度(240、250、260 ℃)、載氣流速(25、30、35 mL/min)等不同條件下的方法耐用性。結(jié)果顯示,不同條件下測(cè)得的薄荷腦含量的RSD均小于2.0%,表明本方法耐用性良好。筆者采用不分流模式時(shí),溶劑在色譜柱中過(guò)載、拖尾嚴(yán)重,影響被測(cè)組分的分離;而選擇分流比為5 ∶ 1進(jìn)樣時(shí),制劑中各成分分離度佳、溶劑峰小、薄荷腦峰對(duì)稱性佳。

      綜上所述,本研究所建標(biāo)準(zhǔn)可用于復(fù)方薰衣草油膏的質(zhì)量控制。

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      (收稿日期:2017-06-02 修回日期:2017-07-03)

      (編輯:張 靜)

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