陳德文，陳梅蘭，王正林，龔越飛，王國棟，龔旭東

（1.國家日用小商品質量監(jiān)督檢驗中心，浙江 義烏 322000；2.浙江樹人大學 生物與環(huán)境工程學院，浙江 杭州 310015）

亞硝胺是一類具有廣譜而強烈致癌性的物質，可以誘發(fā)不同種屬動物器官的腫瘤[1-3]。1993年，歐洲經濟共同體頒布93/11/EEC的委員會指示，規(guī)定了嬰兒奶嘴及撫慰品中亞硝胺的遷移量不超過10 μg·kg-1，亞硝基化物質的可遷移量不超過100 μg·kg-1。1999年，歐盟頒布了嬰兒乳膠奶嘴及撫慰品中亞硝胺及可亞硝基化物質遷移量的標準檢測方法[4]。

目前，制品中的亞硝胺類物質測定方法有氣相色譜法、液相色譜法、固相萃取-氣相色譜法、高效液相色譜法、液相色譜-質譜法和氣相色譜-正化學電離質譜法等[5-8]，但關于奶嘴中亞硝胺類物質的研究較少。

亞硝胺類物質檢測樣品前處理方法多為固相萃取和加速溶劑萃取。而固相萃取方法比較費時，裝置價格較昂貴，萃取頭使用壽命短，多次使用存在交叉污染的問題；加速溶劑萃取需要在高溫和加壓的條件下進行，而萃取溫度過高可能使亞硝胺分解使回收率降低。

本工作建立液液萃取奶嘴中亞硝胺類物質的氣質聯用儀檢測方法，并對中國市場上不同品牌的硅橡膠、乳膠奶嘴中亞硝胺物質的遷移量進行檢測分析。

1 實驗

1.1 試劑

二氯甲烷（色譜純）和甲醇（色譜純），美國TEDIA有限公司產品；12種亞硝胺混和標準溶液，質量濃度為50 mg·L-1，德國BEPURE公司產品；碳酸氫鈉、氯化鈉、碳酸鉀、亞硝酸鈉、氫氧化鈉和鹽酸，分析純，市售品。

1.2 測試儀器

6890N Network型氣相色譜-質譜（GC-MS）聯用儀，美國安捷倫公司產品；KQ-300GVD型三頻恒溫數控超聲波清洗器，昆山市超聲儀器有限公司產品；BS-224S型電子分析天平，賽多利斯科學儀器有限公司產品。

1.3 試驗方法

1.3.1 人工唾液鹽溶液的配制

稱取4.2 g碳酸氫鈉、0.5 g氯化鈉、0.2 g碳酸鉀和30 mg亞硝酸鈉溶于l L水中，用濃度為0.1 mol·L-1的鹽酸或氫氧化鈉溶液調節(jié)pH值為9。

1.3.2 浸提

準確稱取5 g（質量精確至0.1 mg）剪碎的樣品，置于50 mL錐形瓶中，用移液管加入40 mL人工唾液鹽溶液。用玻璃塞塞住錐形瓶，小心搖動使人工唾液浸沒樣品，在40 ℃恒溫水浴中放置（24±0.5） h。

1.3.3 浸提液的處理

先將4 mL浸提液倒入50 mL具塞容量瓶進行浸潤，再將其余浸提液全部轉移至容量瓶中，用人工唾液定容，混勻。然后取8 mL浸提液于具塞比色管中，加入0.2 mL氫氧化鈉溶液，再加入4 mL二氯甲烷，用渦漩混合器振蕩至少1 min。靜置5 min，待完全分層后，用潔凈的膠頭滴管吸取上層清液（膠頭滴管需經過超聲儀超聲30 min后，晾干）。重復此操作3次。待溶液萃取完全后，用約0.4 mL的二氯甲烷洗滌容器內壁，合并試液，用氮吹儀將試液濃縮至約1 mL，備用。

1.4 GC-MS條件

DB-35MS色 譜 柱（30 m×0.25 mm×0.25 μm），進樣口溫度 250 ℃；起始溫度為60 ℃，保持5 min，以2 ℃·min-1速率升溫至120 ℃，保持3 min，再以15 ℃·min-1速率升溫至200 ℃，保持10 min，最后以30 ℃·min-1速率升溫至270 ℃，保持2 min；進樣方式 不分流進樣；進樣量 1 μL；載氣 氦氣（純度大于99.999%），流速 1.0 mL·min-1；傳輸線溫度 280 ℃；電子轟擊電離源（EI），電子能量 70 eV；采集模式 SCAN/SIM 同時采集；質譜掃描范圍（質核比） 35～300；溶劑延遲時間 3.0 min。

2 結果與討論

2.1 GC-MS條件的優(yōu)化

2.1.1 色譜柱

分別考察了不同極性的色譜柱對12種待測N-亞硝胺類物質的分離效果。結果表明：選用非極性柱時，部分N-亞硝胺類物質的色譜峰與溶劑峰分不開，且峰形不好；選用強極性柱時，各待測物質色譜響應值低，峰形不好；而選用弱極性柱時，能獲得較好的峰形和分離效果。因此，選擇DB-35MS柱作為色譜分離柱。

2.1.2 程序升溫條件

考察了起始升溫速率對出峰時間接近的3種物質（N-亞硝基-N-乙基苯胺、N-亞硝基二乙丁胺、N-亞硝基嗎啉）的分離效果，當起始升溫速率為10 ℃·min-1時，3種物質的色譜峰無法分離；當起始升溫速率降至2 ℃·min-1時，12種待測物質均有較好的分離效果。因此，確定程序升溫條件如下：起始溫度60 ℃，保持5 min，以2 ℃·min-1速率升溫至120 ℃，保持3 min，再以15 ℃·min-1速率升溫至200 ℃，保持10 min，最后以30 ℃·min-1速率升溫至270 ℃，保持2 min。按上述優(yōu)化條件，對質量濃度為2 mg·L-1的12種N-亞硝胺進行分析，目標物質的具體信息見表1，總離子流圖見圖1。

圖1 12種N-亞硝胺混合標準溶液總離子流圖

表1 12種N-亞硝胺混合標準溶液的GC-MS信息

2.2 標準曲線和檢出限

用甲醇將12種亞硝胺類物質的標準混合溶液稀釋至質量濃度為0.2，0.5，1.0，2.0和5.0 mg·L-1的系列標準工作溶液，從濃度由低到高依次進行測定（每個樣品測定7次），以目標物的峰面積（y）對其質量濃度（x）進行回歸分析，并以10倍的信噪比為方法的檢出限，得到各組分的線性回歸方程、相關因數和方法的檢出限，結果見表2。

表2 12種N-亞硝胺的線性回歸方程、相關因數和檢出限

2.3 方法的回收率和精密度

用本方法對3號樣品進行測試分析，未檢出N-亞硝胺目標物質。以該樣品為本底，添加質量濃度為2 mg·L-1的混合標準溶液，按照優(yōu)化的試驗件平行測定7次。結果表明，12種N-亞硝胺的回收率為87%～120%，相對標準偏差為4.25%～8.31%，滿足定量分析的要求，具體結果見表3。

表3 方法的回收率和精密度（n=7）

2.4 實際樣品的測定

對國內外21個品牌的奶嘴樣品按上述方法處理后進行測定，有16個品牌的奶嘴樣品含有N-亞硝胺類物質。除二乙基亞硝胺、N-亞硝基二乙丁胺、N-亞硝基嗎啉、N-亞硝基哌啶和硝基-N-乙基苯胺5種物質未檢出外，其他7種物質均有檢出，遷移出的總亞硝胺含量集中在0.04～0.68 μg·kg-1，其中檢出最多的物質是N-亞硝基-N-甲基苯胺，在15個樣品中均含有。

3 結論

以人工唾液鹽浸提奶嘴中的N-亞硝胺類物質，二氯甲烷為萃取溶劑，濃縮后用氣相色譜-質譜聯用儀測定，建立了嬰幼兒奶嘴中12種N-亞硝胺遷移量的分析方法。該方法測定12種N-亞硝胺的回收率為87%～120%，相對標準偏差為4.25%～8.31%，符合定量分析的要求。