犬貓弓形蟲病的流行病學(xué)調(diào)查與防控

許鳳娟 楊 榮 張海云 唐艷榮

（北京市朝陽區(qū)動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心，北京 100018）

弓形蟲病是由剛地弓形蟲引起的一種人畜共患病，宿主種類十分廣泛，人和動(dòng)物感染率都很高。犬貓弓形蟲病真球蟲目，弓形蟲科，弓形蟲屬的龔地弓形蟲引起的一種原蟲病，多數(shù)為隱性感染，但也有出現(xiàn)臨床癥狀甚至死亡的。

1 病原體

龔地弓形蟲，根據(jù)不同發(fā)育階段，其形態(tài)各異，滋養(yǎng)體和包囊出現(xiàn)在中間宿主體內(nèi)，例如犬；裂殖體、配子體和卵囊只出現(xiàn)在終末宿主體內(nèi)，例如貓。

1.1 滋養(yǎng)體（又稱速殖子）

呈弓形、月牙形或香蕉型，一端偏尖，一端偏頓圓，平均大小為長4～7μm，寬2～4μm，經(jīng)姬姆薩氏液染色或瑞氏染色后，主要見于急性病例的腹水中，?？梢姷接坞x的（細(xì)胞外的）單個(gè)蟲體在有核細(xì)胞（單核細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞、淋巴細(xì)胞等）內(nèi)可見到正在進(jìn)行內(nèi)雙芽增殖的蟲體；有時(shí)在宿主細(xì)胞的細(xì)胞漿里，許多滋養(yǎng)體簇集在一個(gè)囊內(nèi)形成“假囊”。

1.2 包囊（又稱組織囊）

見于慢性病例的腦、骨骼肌、心肌和視網(wǎng)膜等處。包囊呈卵圓形，有較厚的囊膜，囊中的蟲體稱為慢殖子，數(shù)目可由數(shù)十個(gè)至數(shù)千個(gè)；包囊的直徑為50～60μm，可在患者體內(nèi)長期存在，并隨蟲體的繁殖而逐漸增大，可大至100μm，慢殖子的形態(tài)與速殖子形態(tài)相似，僅是前者的細(xì)胞核的位置稍偏后。

卵囊見于貓糞內(nèi)，呈圓形或橢圓形，卵壁兩層，無色，無微孔。大小為長8～10μm，寬1～14μm，平均為10μm ×12μm。

2 生活史

弓形蟲的整個(gè)發(fā)育過程需要兩個(gè)宿主；在終末宿主（貓科中的貓屬和山貓屬）腸內(nèi)進(jìn)行球蟲型發(fā)育，在中間宿主（哺乳類、鳥類）體內(nèi)進(jìn)行腸外期發(fā)育。

貓吞食了弓形蟲的包囊或卵囊，子孢子或速殖子和慢殖子侵入小腸的上皮細(xì)胞，進(jìn)行類似球蟲發(fā)育的裂殖生殖和配子生殖，最后產(chǎn)生蟲卵，隨糞便排出體外，在外界適宜條件下，經(jīng)2～4d，孢子發(fā)育完成，形成感染性卵囊（內(nèi)含兩個(gè)孢子囊，每個(gè)孢子囊內(nèi)有4個(gè)子孢子）。弓形蟲也可在貓?bào)w內(nèi)進(jìn)行弓形蟲相發(fā)育，即被貓吞食的子孢子、慢殖子偶速殖子有一些可以進(jìn)入淋巴、血液循環(huán)，被帶到全身各臟器和組織中，侵入有核細(xì)胞，以內(nèi)出芽增殖進(jìn)行無性繁殖，最后生成包囊（內(nèi)含許多滋養(yǎng)體，也稱之為假包囊），包囊破裂釋放出滋養(yǎng)體。每個(gè)滋養(yǎng)體又能侵入新的細(xì)胞內(nèi)重新進(jìn)行內(nèi)出芽增殖。弓形蟲不僅可以在細(xì)胞漿內(nèi)繁殖，有時(shí)也能侵入細(xì)胞核內(nèi)繁殖。經(jīng)一段時(shí)間的繁殖之后，由于宿主產(chǎn)生免疫力，或者其他因素，使其繁殖變慢，一部分滋養(yǎng)體被消滅，一部分滋養(yǎng)體在宿主的腦和骨骼肌等處形成包囊，內(nèi)含慢殖子，包囊有較強(qiáng)的抵抗力，在宿主體內(nèi)可存活數(shù)年之久。

在外界成熟的孢子化卵囊污染食物和水源而被中間宿主（包括人和多種動(dòng)物）食入或飲入后釋放出的子孢子，和通過口、鼻、咽、呼吸道黏膜、眼結(jié)膜和皮膚侵入中間宿主體內(nèi)的滋養(yǎng)體，均將通過淋巴血液循環(huán)侵入有核細(xì)胞在胞漿中以內(nèi)出芽的方式進(jìn)行繁殖。如果感染的蟲株毒力很強(qiáng)，而且宿主又未能產(chǎn)生足夠的免疫力，或者還由于其他因素的作用，即可引起弓形蟲病的急性發(fā)作；反之，如果蟲株的毒力弱，宿主又能很快產(chǎn)生免疫力，則弓形蟲的繁殖受阻，疾病發(fā)作得較緩慢，或者成為無癥狀的隱性感染，這樣，存留的蟲體就會(huì)在宿主的一些臟器組織（尤其是腦組織）中形成包囊型蟲體。

犬吞食了弓形蟲感染性卵囊或包囊后，子孢子或慢殖子在其體內(nèi)進(jìn)行弓形蟲相發(fā)育，最后形成包囊，存留在犬的一些臟器和組織中。

3 癥狀

犬和貓患弓形蟲病的癥狀，大都與中樞神經(jīng)系統(tǒng)、視覺、呼吸、胃腸系統(tǒng)有關(guān)。據(jù)觀察，犬的癥狀類似犬瘟熱，包括發(fā)熱，厭食，精神委頓，呼吸困難，咳嗽，貧血，下痢，妊娠早產(chǎn)或流產(chǎn)，運(yùn)動(dòng)共濟(jì)失調(diào)等。

貓的癥狀包括發(fā)熱黃疸，呼吸急促，咳嗽，貧血，運(yùn)動(dòng)失調(diào)，后肢麻痹，腸梗阻等。也有出現(xiàn)腦炎癥狀和早產(chǎn)或流產(chǎn)的病例。

4 流行病學(xué)調(diào)查

弓形蟲病的臨床表現(xiàn)、病理變化和流行病學(xué)雖有一定的特點(diǎn)，但仍不足以作為診斷的依據(jù)，而必須在實(shí)驗(yàn)室診斷中查出病原體或特異性抗原抗體，方可做出結(jié)論。目前筆者在臨床對于弓形蟲的診斷有以下四個(gè)方面進(jìn)行綜合判斷：

4.1 間接血凝試驗(yàn)材料與方法

4.1.1 試劑及儀器：弓形蟲抗體的間接血凝檢測試劑：IHA凍干抗原（試劑批號：20111108），稀釋液（試劑批號：20111108），陽性對照血清（試劑批號：20110421），陰性對照血清（試劑批號：20110911），均購自中科院蘭州獸醫(yī)研究所。96（12×8）孔血凝反應(yīng)板，振蕩器，離心機(jī)等。

4.1.2 間接血凝試驗(yàn)方法：按照蘭州獸醫(yī)研究所提供的弓形蟲抗體正向間接血凝試驗(yàn)操作說明進(jìn)行。a.血清檢測法反應(yīng)在96 孔V型微量有機(jī)玻璃板上進(jìn)行，每塊血凝板設(shè)陰性血清、陽性血清、空白和稀釋液對照孔。b.加稀釋液：每孔加75μl。c.加樣品：陽性、陰性對照血清 第1孔加相應(yīng)血清25μl。d.稀釋：陰、陽性對照血清稀釋至第7孔，樣品稀釋至第3孔。陰、陽性對照血清的第8孔和樣品的第4孔為稀釋液對照。e.加抗原：凍干抗原，按說明書要求稀釋，1500 r/ min～2 000 r/ min 離心5～10 min，棄去上清液，加等量稀釋液搖勻，置4℃冰箱24 h 后使用，每孔加25μl，加完后將反應(yīng)板置于微量振蕩器上振蕩1～2 min，蓋上一塊與反應(yīng)板大小相等的玻璃板以防灰塵落入和水分蒸發(fā)，置37℃下作用3 h 后，判定結(jié)果。f.結(jié)果判定方法：結(jié)果判定：在陽性對照血清滴度不低于1：1 024（第5 孔）；陰性對照血清除第1 孔允許存在前滯現(xiàn)象“+”外，其余各孔均為“－”；稀釋液對照為“－”的前提下，對被檢血清進(jìn)行判定。血清抗體效價(jià)達(dá)到或超過1：64者判為陽性，“++”為陽性終點(diǎn)。效價(jià)低于1：64 者判為陰性。

2011年對北京市朝陽區(qū)動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心對朝陽區(qū)范圍內(nèi)50家寵物醫(yī)院（診所）弓形蟲病檢測結(jié)果見表1、表2

表1 不同季節(jié)貓血清弓形蟲lgG陽性率

表2 不同季節(jié)犬血清弓形蟲lgG陽性率

4.2 膠體金快速檢測技術(shù)

4.2.1 檢測設(shè)備：弓形蟲（TOX-IgG）金標(biāo)檢測卡；弓形蟲（TOX-IgM）金標(biāo)檢測卡

4.2.2 實(shí)驗(yàn)過程：加入150μl血清樣品于加樣孔中；15min內(nèi)于光線明亮處觀察結(jié)果。血清樣品應(yīng)注意以下方面：遇熱失活的樣品可導(dǎo)致溶血和蛋白變性，因此應(yīng)該避免；渾濁的血清應(yīng)在大約1000ref的離心機(jī)上離心15min；樣品如需儲(chǔ)存，需去掉紅細(xì)胞，在2℃～8℃儲(chǔ)存72h，如實(shí)驗(yàn)前將檢測板和樣品平衡至室溫。

4.2.3 結(jié)果觀察：

有效：在對照區(qū)（C）出現(xiàn)一條色線，表明實(shí)驗(yàn)有效，且操作正常。

無效：對照區(qū)（C）沒有線條出現(xiàn)，無論試驗(yàn)區(qū)（T）線是否顯示紅色色帶，此檢測均無效，需要重新做一遍。

陽性：對照區(qū)（C），在對照區(qū)出現(xiàn)一條色線，在試驗(yàn)區(qū)（T），出現(xiàn)一條色線表明試驗(yàn)呈陽性。

陰性：對照區(qū)（C），在對照區(qū)出現(xiàn)一條色線，在試驗(yàn)區(qū)（T），沒有出現(xiàn)色線表明試驗(yàn)呈陰性。

表4 抗體檢測結(jié)果科學(xué)判讀

IgM IgG 說明陰性 陽性 過去的感染陰性 陰性 沒有感染或剛剛被感染陽性 陰性 早期感染或者先天性感染陽性 陽性 目前正在感染，慢性感染，再次感染，或感染后數(shù)月可能IgM陽性

4.3 V8實(shí)時(shí)快速熒光PCR檢測體系

V8實(shí)時(shí)熒光PCR檢測體系”是由北京世紀(jì)元亨公司研制，可用于多種人畜共患病的快速檢測，如犬貓流感、犬棘球蚴病、布魯氏菌病、弓形體病、鉤端螺旋體病等。

該技術(shù)根據(jù)寵物臨床檢測“病例零散、臨時(shí)加樣、檢測項(xiàng)目交叉繁雜，結(jié)果及時(shí)”等特點(diǎn)，具有先進(jìn)的個(gè)體設(shè)計(jì)1拖8專利設(shè)計(jì)，可同時(shí)分別控制8個(gè)檢測孔，每個(gè)檢測孔自帶獨(dú)立微電腦運(yùn)行模塊，隨時(shí)添加樣品，檢測不同疾病。同時(shí)，檢測試劑單份裝配、操作簡便、靈敏度高、特異性強(qiáng)、抗PCR污染能力強(qiáng)、另一方面，該專利技術(shù)著眼于提高反應(yīng)的升溫降溫速度，提高儀器對樣品的識別能力。檢測時(shí)間短（僅30min，而普通熒光PCR檢測需要60～90min），更加符合寵物臨床診斷的時(shí)限要求，便于基層診療機(jī)構(gòu)及實(shí)驗(yàn)室操作及使用，使該技術(shù)有更廣的應(yīng)用范圍

4.4 直接檢查法

對其中狀態(tài)較差的23只流浪貓實(shí)施安樂死，采集直腸內(nèi)糞便及心、肝、脾、肺、腎、腦、舌等用于蟲體分離，飽和蔗糖漂浮法檢測糞便中弓形蟲的卵囊。胃蛋白酶消化法消化貓的心、腦、舌，并將消化的組織腹腔注射給小鼠，采取頜下淋巴結(jié)、肺臟、肝臟做涂片檢查。自然干燥后，甲醇固定。姬姆薩氏染色，置顯微鏡1000倍油鏡下鏡檢，可發(fā)現(xiàn)弓形蟲蟲體。

表5 以上四種檢測方法優(yōu)缺點(diǎn)對比

5 治療

在臨床治療方面，抗弓形蟲滋養(yǎng)體藥物的療效尚滿意，但在獲得性弓形蟲病的治療中，經(jīng)常出現(xiàn)復(fù)發(fā)。

5.1 對癥治療

根據(jù)臨床癥狀來采取的相應(yīng)治療措施，例如患病動(dòng)物出現(xiàn)發(fā)熱時(shí)，應(yīng)作退熱處理，必要時(shí)給予退熱藥；不食者，可給予靜脈補(bǔ)液，以保體液平衡；顱內(nèi)壓增高者，可給予20%甘露醇，進(jìn)行脫水治療；對于呼吸困難者可給予吸氧或者呼吸中樞興奮劑來處理等等。

5.2 抗弓形蟲治療

目前公認(rèn)有效的抗弓形蟲病藥物有乙胺嘧啶、磺胺嘧啶（或黃安吡嗪、磺胺二甲氧嘧啶）和螺旋霉素、氯林可霉素等。弓形蟲病不管是先天性、獲得性的、急性、亞急性和慢性急性發(fā)作的均需治療，應(yīng)注意在發(fā)病初期及時(shí)用藥，如用藥較晚，雖可使臨床癥狀消失，但不能抑制蟲體進(jìn)入組織形成包囊，結(jié)果使病畜成為帶蟲者。

6 公共衛(wèi)生

6.1 加大宣傳力度，普及動(dòng)物疫病的防控知識

通過各種媒介大力宣傳動(dòng)物疫病相關(guān)的防控方法及正確的飼養(yǎng)管理技術(shù)，提高動(dòng)物飼養(yǎng)者的防疫意識，普及動(dòng)物傳染病的預(yù)防知識，動(dòng)物的健康狀況與主人的飼養(yǎng)方法有直接關(guān)系，如是否定期進(jìn)行體檢、環(huán)境消毒、是否飼喂健康食品，由于動(dòng)物主人并不知道應(yīng)如何合理地飼養(yǎng)寵物，導(dǎo)致寵物經(jīng)?；疾。ㄟ^宣傳推廣正確的飼養(yǎng)方法，倡導(dǎo)以預(yù)防為主，控制動(dòng)物疫病的發(fā)生。

6.2 盡快研制和推廣貓用預(yù)防弓形蟲病的疫苗

弓形蟲病在世界各地發(fā)病率都比較高，大多在10%～70%之間，防控形勢嚴(yán)峻，但從太平洋島嶼調(diào)查來看，在無貓島上，人和動(dòng)物均沒有發(fā)現(xiàn)弓形蟲，這足以證明貓?jiān)趥鞑ケ静〉淖饔谩Ｒ虼素埦统蔀榉乐构蜗x病工作中的重要管制對象。

目前在國際上有弓形蟲疫苗，但未被批準(zhǔn)進(jìn)入中國境內(nèi)銷售，此疫苗給貓注射之后，只能阻止貓?bào)w內(nèi)的弓形蟲孢子化，并不能保護(hù)貓不感染弓形蟲。

我國并沒有預(yù)防貓弓形蟲病符合標(biāo)準(zhǔn)的疫苗，使貓弓形蟲病的預(yù)防及治療遇到了一定的困難，生物制品科研單位與獸藥審核單位配合應(yīng)盡早研制出符合標(biāo)準(zhǔn)的高效的預(yù)防貓弓形蟲病疫苗，以滿足廣大動(dòng)物診療單位的需求及更好地控制貓弓形蟲病的發(fā)生。

6.3 養(yǎng)成良好的飲食習(xí)慣

弓形蟲病的最主要傳染源首先是人吃了未煮熟的肉，特別是豬、羊肉等。幾乎所有哺乳動(dòng)物和鳥類，如鼠類、豬、羊、牛、家兔、狗和雞、鴨、鵝等都可以傳染弓形蟲，而且感染率很高。人的傳染來源主要來自于這些動(dòng)物的肉類，如火鍋溫度不夠或涮7成熟，煎牛排保留一半生等，肉中的弓形蟲包囊沒有被殺死（加熱到71℃包囊即可死亡），就有傳染給人的危險(xiǎn)，家中生肉或切肉案板的污染同樣可以傳染給人，污染的羊和牛奶也可以傳染。我國人口的弓形蟲感染率較低，可能與中國人喜歡熟食肉類的飲食習(xí)慣有關(guān)。

另外，狗狗也可以傳染弓形蟲，但是它們的糞便和排泄物都沒有傳染性，如果不吃狗肉就不會(huì)傳染，所以養(yǎng)狗的寵主們不用擔(dān)心會(huì)感染。

6.4 提高自我防護(hù)意識，不與寵物有過分親密的接觸

與犬貓保持一定距離，不過分親熱，接觸犬、貓咪后和飯前勤洗手，與犬貓玩耍時(shí)避免被其抓傷、咬傷。孕婦應(yīng)遠(yuǎn)離犬貓，有資料顯示，異常妊娠的孕婦、畸形兒、弱智兒等的弓形蟲感染率顯著高于正常妊娠的孕婦及正常兒，不孕癥婦女中弓形蟲感染率有逐年上升趨勢。最近幾年，家庭飼養(yǎng)寵物越來越多，使育齡婦女感染弓形蟲的機(jī)會(huì)增加，必須定期對孕婦作弓形蟲常規(guī)檢查。

6.5 養(yǎng)成良好的生活方式，減少弓形蟲傳播

6.5.1 貓糞傳染：感染的貓糞里有弓形蟲的囊合子，人接觸這種貓糞可以傳染。貓主要通過感染的貓、食用被感染的而且未經(jīng)加工的生肉、捕食老鼠和鳥類獲得弓形蟲感染。在室內(nèi)圈養(yǎng)，不吃活物的貓不會(huì)被傳染。貓感染包囊后經(jīng)過2～7d開始由糞便排出囊合子，喂入卵囊后，經(jīng)21～41d排出囊合子，食入滋養(yǎng)體后，經(jīng)7～10d排出囊合子，糞便排出囊合子的時(shí)間不長，只有10～20d，高峰期是5～8d，1g糞便中有數(shù)百萬到數(shù)千萬個(gè)卵囊。囊合子需要在外界發(fā)育1～2d或更長時(shí)間，才可以形成孢子化卵囊，才具有傳染性，所以要每天清除貓砂或貓糞，貓咬傷不會(huì)傳染弓形蟲病。孢子化卵囊對外界環(huán)境有很強(qiáng)的抵抗力，在常溫下，可保持感染力1～1.5年，實(shí)驗(yàn)中要注意避免污染和自身感染。加熱50℃、30min；55℃、15min；70℃、2min或者80℃、1min均可殺死卵囊的孢子。

6.5.2 土壤污染和昆蟲機(jī)械傳染：囊合子抵抗力強(qiáng)，在外界環(huán)境——土壤、水和草地的生存時(shí)間很長，在潮濕的土壤里可活數(shù)月乃至數(shù)年。蒼蠅和蟑螂可沾染囊合子，機(jī)械攜帶。這些都可以造成傳染。因此盡量不要讓貓外出，遛狗時(shí)，需要牽犬鏈，避免其在草地亂聞亂舔而感染。

6.5.3 做好孕前檢查：先天性感染：最后也是最重要的一種，孕婦在懷孕期間發(fā)生感染，可以通過胎盤傳染給胎兒，如果在懷孕前已經(jīng)感染過，就不再有傳染胎兒的危險(xiǎn)。因此，在備孕期間，做好弓形蟲檢測，懷孕期間將上述問題排除后，可以避免感染弓形蟲。