• 
    

    
    

      99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看

      ?

      復(fù)方多糖的葡聚糖凝膠分離及純度鑒定

      2018-08-22 01:23:56鄭亞玲新疆水產(chǎn)科學(xué)研究所新疆維吾爾自治區(qū)水產(chǎn)品質(zhì)量檢測(cè)中心
      食品安全導(dǎo)刊 2018年22期
      關(guān)鍵詞:層析濾紙葡聚糖

      □ 鄭亞玲 新疆水產(chǎn)科學(xué)研究所(新疆維吾爾自治區(qū)水產(chǎn)品質(zhì)量檢測(cè)中心)

      多糖廣泛存在于動(dòng)物細(xì)胞膜、植物和微生物細(xì)胞壁中,是一類(lèi)天然高分子化合物,其在抗腫瘤、抗病毒、抗輻射、抗?jié)?、降血糖及免疫調(diào)節(jié)等方面有良好的應(yīng)用前景[1]。

      凝膠色譜[2]又稱(chēng)分子篩色譜,凝膠柱色譜法常用的凝膠有葡聚糖凝膠和瓊脂糖凝膠,以不同濃度的鹽溶液和緩沖溶液作為洗脫劑,可使不同大小的多糖分子得到分離純化,但不適宜粘多糖的分離[3]。多糖是極性大分子化合物,具有分子量、組成、聚合度、分子形狀不均一的特點(diǎn)[4]。測(cè)定多糖純度的方法有功能團(tuán)分析、比旋光度、水解后糖組分分析、紙色譜、紫外-可見(jiàn)吸收光譜法和高效液相色譜、超離心和高壓電泳、超離心分析法等[2]。

      1 檢測(cè)方法

      1.1 紙色譜法

      紙色譜法[5]是以濾紙作為載體,讓樣品溶液在濾紙上展開(kāi)。紙色譜的溶劑由有機(jī)溶劑和水組成,當(dāng)有機(jī)溶劑和水部分溶解時(shí)則有兩種可能——一相是以水飽和的有機(jī)溶劑相,一相是以有機(jī)溶劑飽和的水相。紙色譜中的流動(dòng)相是指層析液在毛細(xì)拉力作用下能不斷由下向上流動(dòng),固定相是指被吸附在濾紙纖維之間的水分。由于纖維素上的羥基具有親水性,故使這部分水束縛在纖維素周?chē)?,不易擴(kuò)散而成為固定相。在層析過(guò)程中,當(dāng)層析液在毛細(xì)拉力作用下上升,流經(jīng)色素濾液細(xì)線時(shí),濾液細(xì)線上的色素就相繼溶入層析液,隨著層析液上升發(fā)生再分配,即有一部分色素從層析液分配溶解到固定相中,直到平衡。由于分配系數(shù)不同,那些分配系數(shù)大的色素分子隨層析液向上移動(dòng)得快,形成的色素帶集中在濾紙上部;而分配系數(shù)小的色素分子,隨層析向上移動(dòng)得慢,形成的色素帶集中在濾紙下面。

      1.2 紫外-可見(jiàn)吸收光譜法

      一種純物質(zhì)在一定條件、一定波長(zhǎng)范圍內(nèi),它的吸收光譜是一定的。根據(jù)物質(zhì)吸收光譜最大吸收峰波長(zhǎng)的位置或吸收峰形狀和數(shù)量,可以判斷該物質(zhì)的純度。對(duì)于某些生物大分子(如核酸和蛋白質(zhì)),可以根據(jù)他們?cè)谧贤夤鈪^(qū)的特征吸收峰波長(zhǎng)(如核酸260nm,蛋白質(zhì)280nm)處測(cè)得吸光值,可通過(guò)求二者吸光值的比值來(lái)判斷純度。

      1.3 凝膠色譜法

      凝膠色譜也可用于多糖的純度鑒定——若經(jīng)凝膠色譜得到單一對(duì)稱(chēng)峰,說(shuō)明該多糖為均一組分。

      2 實(shí)驗(yàn)儀器和材料

      儀器:電子天平、紫外-可見(jiàn)分光光度計(jì)、超聲波清洗器、電熱真空干燥箱、層析柱(3cm×100cm)、層析缸(7cm×25cm)。

      試劑:葡聚糖凝膠、磷酸、正丁醇、丙酮、醋酸、氯化鈉、濃硫酸、苯酚、苯胺、鋅粉等(均為分析純?cè)噭?/p>

      原料:復(fù)方多糖樣品(已經(jīng)過(guò)離子交換樹(shù)脂初步分離)。

      3 實(shí)驗(yàn)方法

      3.1 多糖的分離純化

      3.1.1 裝柱、平衡

      稱(chēng)取葡聚糖干粉20.0g,在90℃蒸餾水中溶脹5h。溶脹平衡后,在凝膠顆粒面上加較多的水,用攪棒將凝膠攪勻,放置數(shù)分鐘,將沉降很慢的細(xì)顆粒隨上層水到掉,如此反復(fù)至上層沒(méi)有細(xì)顆粒為止。向洗好的凝膠中加入2倍凝膠體積的NaCl溶液,放置于80℃水中加熱30~40min以排除凝膠溶液中的氣泡,同時(shí),另取200mL同濃度的NaCl溶液在80℃水中加熱以排除溶液中的氣泡,以備裝柱時(shí)用。

      除完氣泡后,選長(zhǎng)為100.0cm、外徑為3.0cm的層析柱開(kāi)始裝柱。將除好氣泡的200mL NaCl溶液倒入柱中,再將已做好的薄棉花片鋪于柱底,把凝膠溶液攪勻倒進(jìn)柱中,待柱底面上積起約1~2cm的凝膠床后,打開(kāi)柱的出口,隨著下面水的流出上面不斷加入凝膠,并不斷輕敲四周柱壁,使形成的凝膠床面上有均勻連續(xù)的凝膠降下,得到均勻的凝膠柱。裝好凝膠柱后,量算出有效柱體積,用3~5倍柱體積的NaCl溶液平衡凝膠柱。

      3.1.2 上樣、洗脫

      取0.1g樣品溶于0.1mol?L-1的NaCl溶液中,使其體積為柱體積的0.5%,將凝膠柱層面上的洗脫液放出至距床面小于0.5mm時(shí),用移液管將配制好的樣品溶液逐滴加在床面上,使樣品溶液均勻平鋪在凝膠床面上,待樣品溶液完全進(jìn)入凝膠柱后,向床面上緩緩加上10cm高的洗脫液,再逐滴加入洗脫液進(jìn)行洗脫,使加入洗脫液的速度與凝膠柱流速相等。

      計(jì)算凝膠柱流速及每分鐘流出的體積,每流出3mL收集一次,至流出液呈無(wú)色為止,停止收集。再分別用0.2mol?L-1、0.3mol?L-1、0.4mol?L-1、0.5mol?L-1NaCl溶液重復(fù)進(jìn)行上述實(shí)驗(yàn)步驟。

      3.1.3 洗脫劑濃度的選擇

      分別取收集的各瓶樣品溶液0.1mL,再依次加入1.0mL 5%苯酚、0.9mL蒸餾水和5.0mL濃硫酸,放置20min顯色后,在490nm下測(cè)其吸光度,并繪制吸收曲線,根據(jù)吸收曲線選擇最佳的洗脫劑濃度(實(shí)驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)圖表1~5)。

      3.2 純度鑒定

      3.2.1 紫外光譜法

      用電光天平稱(chēng)取葡聚糖凝膠分離后的多糖0.0201g,配制成100mL溶液。取配制好的多糖溶液3.5mL、蒸餾水3.5mL,用紫外-可見(jiàn)分光光度計(jì)在200~400nm范圍內(nèi)每10nm測(cè)一次吸光度(實(shí)驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表6)。

      3.2.2 凝膠色譜法

      取葡聚糖凝膠分離后的多糖0.1g溶于7mL 0.2mol?L-1NaCl溶 液 中, 上SephadexG-200層 析 柱(3.0×60cm),用0.2mol?L-1NaCl溶液洗脫,流速為54s/滴,分步收集,每30min收集一次,至流出液呈無(wú)色為止,停止收集,用苯酚-硫酸法檢測(cè)(實(shí)驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表7、圖6)。

      3.2.3 紙層析法

      稱(chēng)取葡聚糖凝膠分離后的多糖0.0502g,加入10mL蒸餾水配成0.5%多糖溶液,濾紙尺寸為(4cm×23cm),以正丁醇:乙醇:水=4:1:5為展開(kāi)劑,室溫展開(kāi)6h,苯胺磷酸鹽為顯色劑,100℃,顯色10min。

      4. 實(shí)驗(yàn)結(jié)果與討論

      4.1 洗脫效果與討論

      表1 0.1mol?L-1NaCl溶液洗脫相關(guān)數(shù)據(jù)表

      圖1 0.1mol?L-1NaCl溶液洗脫曲線

      表2 0.2mol?L-1NaCl溶液洗脫相關(guān)數(shù)據(jù)表

      圖2 0.2mol?L-1NaCl溶液洗脫曲線

      表3 0.3mol?L-1NaCl溶液洗脫相關(guān)數(shù)據(jù)表

      圖3 0.3mol?L-1NaCl溶液洗脫曲線

      表4 0.4mol?L-1NaCl溶液洗脫相關(guān)數(shù)據(jù)表

      圖4 0.4mol?L-1NaCl溶液洗脫曲線

      表5 0.5mol?L-1NaCl溶液洗脫相關(guān)數(shù)據(jù)表

      圖5 0.5mol?L-1NaCl溶液洗脫曲線

      由圖1、圖2、圖3、圖4、圖5可以看出,以0.2mol?L-1NaCl溶液為洗脫劑所得的曲線峰形及對(duì)稱(chēng)性較好,因此可確定用葡聚糖凝膠分離復(fù)方免疫增強(qiáng)劑中多糖的最佳洗脫劑為0.2mol?L-1的NaCl溶液。

      4.2 純度鑒定結(jié)果與討論

      表6 紫外光譜實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)

      圖6 凝膠色譜法純度鑒定洗脫曲線

      4.2.1 紫外光譜法

      由以上數(shù)據(jù)可以看出,在260nm和280nm處樣品無(wú)吸收峰,說(shuō)明此多糖樣品中不含蛋白質(zhì)和核酸。

      表7 凝膠色譜法純度鑒定實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)

      4.2.2 凝膠色譜法

      由以上數(shù)據(jù)和圖形可以看出,得到的曲線是單一對(duì)稱(chēng)峰,說(shuō)明此多糖樣品為均一組分。

      4.2.3 紙層析

      經(jīng)顯色烘干后可見(jiàn)濾紙上只有一個(gè)斑點(diǎn),可說(shuō)明此多糖樣品為均一組分。

      5 結(jié)論

      以0.2mol?L-1的NaCl溶液為洗脫劑,使用Sephadex G-200可有效分離純化復(fù)方免疫增強(qiáng)劑中多糖,達(dá)到最佳分離效果。

      經(jīng)紫外光譜法、凝膠色譜法、紙層析法、旋光度法鑒定,由Sephadex G-200分離純化出的復(fù)方多糖為均一組分。

      猜你喜歡
      層析濾紙葡聚糖
      犬細(xì)小病毒量子點(diǎn)免疫層析試紙條的研制
      淺析濾紙的勻度對(duì)濾芯過(guò)濾性能的影響
      葡聚糖類(lèi)抗病誘導(dǎo)劑在水稻上的試驗(yàn)初報(bào)
      A族鏈球菌膠體金免疫層析試紙條的制備及應(yīng)用
      新型B族鏈球菌膠體金免疫層析試紙條的臨床應(yīng)用評(píng)價(jià)
      高抗水水性丙烯酸酯乳液的合成、表征及其在工業(yè)濾紙中的應(yīng)用
      小麥麩皮中β-葡聚糖的分離純化及組成研究
      淺析濾紙透氣度與初始?jí)翰畹年P(guān)系
      一種用于曲霉病快速診斷的免疫層析側(cè)流裝置(LFD)
      (1,3)-β-D葡聚糖檢測(cè)對(duì)侵襲性真菌感染早期診斷的意義
      盐山县| 辽源市| 吉木乃县| 河西区| 永丰县| 察隅县| 奉化市| 长寿区| 城步| 莱州市| 南溪县| 隆林| 高清| 定州市| 灵石县| 句容市| 淅川县| 宜宾市| 凤翔县| 阿克苏市| 合作市| 伊宁县| 特克斯县| 金川县| 江津市| 淮北市| 永康市| 闵行区| 榆社县| 江川县| 淮滨县| 瑞昌市| 林口县| 中西区| 石渠县| 阳曲县| 德令哈市| 开江县| 海阳市| 平利县| 云霄县|