周德榮 陳捷 林潔斌

前列腺癌是臨床常見(jiàn)惡性腫瘤, 屬性激素相關(guān)的癌癥類(lèi)型, 是導(dǎo)致男性患者死亡的重要惡性病變之一。近十幾年來(lái)伴隨時(shí)代的發(fā)展, 前列腺癌發(fā)病率有上升趨勢(shì), 正逐漸演變成為一種公共衛(wèi)生問(wèn)題, 個(gè)別國(guó)家發(fā)病率甚至高達(dá)1%［1］,因此積極預(yù)防及治療前列腺癌成為醫(yī)學(xué)上需要深入研究的重難點(diǎn)問(wèn)題。異黃酮屬于新型食物補(bǔ)充劑, 基本來(lái)源于大豆,既往醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)研究顯示大豆對(duì)性激素依賴(lài)性癌癥有一定保護(hù)效果, 比如常見(jiàn)的前列腺癌、乳腺癌, 本文將再次深入探究異黃酮類(lèi)化合物對(duì)前列腺癌細(xì)胞PC-3增殖的抑制作用, 具體報(bào)告如下。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 細(xì)胞 前列腺癌細(xì)胞PC-3株標(biāo)本由成都典型-培養(yǎng)物中心提供。

1.1.2 試劑 培養(yǎng)基：北美Gibco公司原裝進(jìn)口, 型號(hào)為PRMI1640；小牛血清：北美Gibco公司原裝進(jìn)口, 批準(zhǔn)號(hào) 10270106；大豆苷元、金雀異黃素及大豆黃素均由日本Sigma公司提供；噻唑藍(lán)：日本Sigma公司MTT系；胰蛋白酶：上海斯信生物科技公司提供；順鉑：海南高翔醫(yī)藥有限公司。

1.1.3 儀器 本次實(shí)驗(yàn)室研究使用到的儀器有倒置顯微鏡(出至于重慶光學(xué)儀器廠)、二氧化碳培養(yǎng)箱(日本Sanyo公司)、Elite ESP流式細(xì)胞儀(美國(guó)Coulter公司)、Top Count-NXT微孔板-閃爍發(fā)光檢測(cè)儀(美國(guó), GE公司)和DG3022酶聯(lián)免疫檢測(cè)儀(華東電子管廠)。

1.2 方法

1.2.1 培養(yǎng)細(xì)胞 PRMI1640培養(yǎng)基中培養(yǎng)前列腺癌細(xì)胞,培養(yǎng)基中包含10%濃度的胎牛血清, 形式為開(kāi)放式-單層-貼壁培養(yǎng), 環(huán)境溫度條件控制在37℃, 使其處于飽和濕度狀態(tài), 并包含5%濃度的二氧化碳。

1.2.2 分組 實(shí)驗(yàn)物采用二甲基亞楓［被譽(yù)為萬(wàn)能溶劑,實(shí)驗(yàn)預(yù)處理］物質(zhì)溶解后加入含有5%濃度胎牛血清的PRMI1640培養(yǎng)基中, 最終濃度調(diào)整如下：溶劑對(duì)照組, 體積占量比0.1%。順鉑對(duì)照組：3.0×10-5mol/L；大豆苷元：5.0×10-6mol/L、25.0×10-6mol/L、75.0×10-6mol/L ；金雀異黃素組：5.0×10-6mol/L、25.0×10-6mol/L、75.0×10-6mol/L；大豆黃素組：5.0×10-6mol/L、25.0×10-6mol/L、75.0×10-6mol/L。

1.2.3 處理及檢測(cè) 觀察異黃酮類(lèi)化合物對(duì)前列腺癌細(xì)胞PC-3增殖的抑制作用, 樣本處理先取多生長(zhǎng)期PC-3, 將其接種在96孔培養(yǎng)板, 每孔細(xì)胞濃度為5.0×103個(gè), 持續(xù)培養(yǎng)24 h, 細(xì)胞貼壁, 加入濃度不同的實(shí)驗(yàn)物, 總體積為200 μl/孔, 每一個(gè)劑量組均設(shè)置 4個(gè)復(fù)孔, 待72 h后加入噻唑藍(lán), 20 μl/孔, 濃度為5 mg/ml, 接著繼續(xù)培育4 h, 除培養(yǎng)液,加入100 μl/孔的DMSO, DMSO凋零, 接著使用DG3022酶聯(lián)免疫檢測(cè)儀測(cè)得吸光度(A值, 490 nm波長(zhǎng)), 算出A值平均值、抑制率(抑制率=溶劑對(duì)照組實(shí)驗(yàn)組A值之差/溶劑對(duì)照組A 值 ×100.0%)［2］。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS19.3統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件對(duì)研究數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差( x-±s)表示, 采用t檢驗(yàn)。p＜0.05表示差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

與溶劑對(duì)照組比較, 順鉑對(duì)照組及大豆苷元組、金雀異黃素組、大豆黃素組25.0×10-6、75.0×10-6mol/L濃度PC-3增殖抑制作用均更優(yōu), 差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p＜0.05)；且大豆苷元組、金雀異黃素組、大豆黃素組最高癌細(xì)胞PC-3增殖抑制率分別達(dá)50.19%、51.30%、39.12%。見(jiàn)表1。

表1 MTT檢測(cè)法測(cè)得大豆苷元、金雀異黃素、大豆黃素對(duì)前列腺癌細(xì)胞PC-3 的增殖影響(, %)

表1 MTT檢測(cè)法測(cè)得大豆苷元、金雀異黃素、大豆黃素對(duì)前列腺癌細(xì)胞PC-3 的增殖影響(, %)

注：與溶劑對(duì)照組比較, ap＜0.05

實(shí)驗(yàn)物 濃度( mol/L) A值 抑制率溶劑對(duì)照 - 0.27±0.01 -順鉑對(duì)照 3.0×10-5 0.11±0.01a 61.61金雀異黃素 5.0×10-6 0.26±0.04 3.70 25.0×10-6 0.16±0.02a 42.45 75.0×10-6 0.13±0.02a 51.30大豆苷元 5.0×10-6 0.27±0.02 1.48 25.0×10-6 0.19±0.03a 27.30 75.0×10-6 0.14±0.02a 50.19大豆黃素 5.0×10-6 0.27±0.05 1.85 25.0×10-6 0.22±0.02a 17.35 75.0×10-6 0.17±0.01a 39.12

3 討論

異黃酮在國(guó)外醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)研究里是常見(jiàn)植物雌激素, 其弱雌激素能和受體結(jié)合, 所發(fā)揮出的雌激素樣作用取決于機(jī)體激素水平狀態(tài)。本次研究納入的大豆苷元、金雀異黃素、大豆黃素均屬異黃酮類(lèi), 為生物類(lèi)范疇, 目前已經(jīng)有較多研究證實(shí)了該物質(zhì)的藥用價(jià)值, 專(zhuān)家普遍覺(jué)得異黃酮對(duì)前列腺癌等性激素依賴(lài)性惡性腫瘤有一定保護(hù)功效［3］。目前該物質(zhì)對(duì)前列腺癌某些細(xì)胞因子的增值抑制作用研究還在深入進(jìn)行中。

金雀異黃素化學(xué)結(jié)構(gòu)相似于雌二醇, 因此經(jīng)激素受體結(jié)合, 可發(fā)揮出雌激素樣作用；大豆苷元結(jié)構(gòu)同前者相比第5位碳上多了一個(gè)羥基, 機(jī)體攝入后通過(guò)內(nèi)里能轉(zhuǎn)化成金雀異黃素；大豆黃素為主要異黃酮化合物, 為4’一二羥基異黃酮, 作為先導(dǎo)物也和雌激素受體有一定親和力。流行病學(xué)研究得知, 長(zhǎng)期攝入較多大豆類(lèi)食物, 能明顯降低性激素依賴(lài)性癌癥發(fā)生率, 包括子宮癌、前列腺癌、乳腺癌等, 有動(dòng)物實(shí)驗(yàn)顯示異黃酮類(lèi)化合物具有一定癌癥細(xì)胞抑制增值效果,可預(yù)防這類(lèi)癌癥的發(fā)生［4］。研究發(fā)現(xiàn)異黃酮類(lèi)化合物廣泛存在于幾百種植物中, 其中大豆最高, 因此膳食計(jì)劃中日常可多食大豆制品?，F(xiàn)代醫(yī)學(xué)證實(shí)抑制癌細(xì)胞PC-3增殖, 影響細(xì)胞DNA合成, 可促使其惡性病變細(xì)胞凋亡［5］, 本次研究結(jié)果顯示較高濃度及高濃度大豆苷元、金雀異黃素、大豆黃素均有一定程度前列腺癌細(xì)胞PC-3增殖抑制效果, 結(jié)果和較多經(jīng)典研究相仿［3-5］, 為進(jìn)一步充分利用異黃酮藥效, 探尋該物質(zhì)對(duì)性激素依賴(lài)型癌癥以及其他病變的作用, 目前醫(yī)學(xué)關(guān)于其生物學(xué)效應(yīng)的研究還在持續(xù)進(jìn)行中。

綜上所述, 大豆苷元、金雀異黃素、大豆黃素歸屬異黃酮類(lèi)化合物, 生物體長(zhǎng)期較多攝入能起到一定前列腺癌細(xì)胞PC-3增殖的抑制作用, 日常飲食科學(xué)調(diào)整, 可達(dá)到預(yù)防性激素依賴(lài)型惡性腫瘤的效果。