黃旭華 湯慶坤 羅梅蘭 黃深惠 蔣師東 夏青 黃景灘 李安華 魯成 陳小青 毛洪斌 潘志新

摘要：【目的】全面掌握廣西昆蟲(chóng)微孢子蟲(chóng)資源及其分布情況，并進(jìn)行感染性和分類研究，為經(jīng)濟(jì)昆蟲(chóng)微孢子蟲(chóng)病的防控提供參考依據(jù)?！痉椒ā客ㄟ^(guò)人工捕捉或誘蟲(chóng)燈引誘方式在廣西蠶區(qū)的桑園、菜地及周圍收集野外昆蟲(chóng)，顯微鏡檢驗(yàn)各種野外昆蟲(chóng)微孢子蟲(chóng)的自然感染率；通過(guò)生物試驗(yàn)鑒定部分野外昆蟲(chóng)微孢子蟲(chóng)對(duì)家蠶的食下感染性，并分別檢測(cè)桑尺蠖微孢子蟲(chóng)和菜粉蝶微孢子蟲(chóng)對(duì)原始寄主的胚種傳染性；基于SSU rRNA序列構(gòu)建昆蟲(chóng)微孢子蟲(chóng)系統(tǒng)發(fā)育進(jìn)化樹(shù)，明確昆蟲(chóng)微孢子蟲(chóng)的分類特征?！窘Y(jié)果】廣西昆蟲(chóng)微孢子蟲(chóng)資源分布廣泛，大部分昆蟲(chóng)已感染微孢子蟲(chóng)，其中菜粉蝶、稻縱卷葉螟、桑螟、桑尺蠖、斜紋夜蛾和紅腹燈蛾的微孢子蟲(chóng)自然感染率分別為54.95%、4.38%、0.08%、0.28%、0.64%和1.14%，其他鱗翅目昆蟲(chóng)的總體微孢子蟲(chóng)感染率為0.75%。部分昆蟲(chóng)微孢子蟲(chóng)可食下感染家蠶，交叉感染率達(dá)40.00%；部分昆蟲(chóng)微孢子蟲(chóng)還具有很強(qiáng)的胚種傳染力，其中桑尺蠖微孢子蟲(chóng)和菜粉蝶微孢子蟲(chóng)對(duì)原始寄主的胚種傳染率分別為77.48%和66.15%。從桑尺蠖分離獲得的3株微孢子蟲(chóng)雖然為不同的微孢子蟲(chóng)，但均屬于Nosema屬，與家蠶微孢子蟲(chóng)同屬異種?！窘Y(jié)論】在廣西各地區(qū)存在豐富的昆蟲(chóng)微孢子蟲(chóng)資源，種類多樣，且大部分昆蟲(chóng)微孢子蟲(chóng)屬于Nosema屬，與家蠶微孢子蟲(chóng)親緣關(guān)系密切；部分野外昆蟲(chóng)微孢子蟲(chóng)還對(duì)家蠶形成交叉?zhèn)魅疚：Φ娘L(fēng)險(xiǎn)，因此杜絕昆蟲(chóng)微孢子蟲(chóng)污染桑葉交叉感染家蠶是控制家蠶微粒子病發(fā)生的重要措施。

關(guān)鍵詞： 昆蟲(chóng)微孢子蟲(chóng)；資源分布；感染性；分類特征

中圖分類號(hào)： S884.21 文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A 文章編號(hào)：2095-1191（2018）08-1541-07

0 引言

【研究意義】昆蟲(chóng)是自然界中種類、數(shù)量最多的生物，約占地球上所有生物物種的50%以上（張茂林和王戎疆，2011），而微孢子蟲(chóng)（Microsporidian）是一種嗜昆蟲(chóng)的病原微生物，幾乎整個(gè)昆蟲(chóng)綱的昆蟲(chóng)均能被微孢子蟲(chóng)寄生，尤其以鱗翅目和雙翅目昆蟲(chóng)最常見(jiàn)，且大多數(shù)昆蟲(chóng)種類中至少可寄生一種以上微孢子蟲(chóng)（劉吉平和曾玲，2006）。微孢子蟲(chóng)病一方面影響野外昆蟲(chóng)種群的自然平衡，另一方面對(duì)家蠶、柞蠶等經(jīng)濟(jì)和資源昆蟲(chóng)造成嚴(yán)重危害（梁喜麗等，2018）。因此，開(kāi)展野外昆蟲(chóng)微孢子蟲(chóng)資源調(diào)查，對(duì)控制經(jīng)濟(jì)昆蟲(chóng)微粒子病發(fā)生和了解自然界昆蟲(chóng)害蟲(chóng)種群自我調(diào)節(jié)規(guī)律具有重要意義，也有利于篩選出優(yōu)質(zhì)昆蟲(chóng)微孢子蟲(chóng)作為農(nóng)業(yè)生物防治素材以促進(jìn)生物防治新方法的推廣應(yīng)用?！厩叭搜芯窟M(jìn)展】昆蟲(chóng)微孢子蟲(chóng)是一類重要的病原微生物，至今發(fā)現(xiàn)的微孢子蟲(chóng)已超過(guò)200屬1300～1500種，可侵染雙翅目和鱗翅目昆蟲(chóng)的在400種以上（梁喜麗等，2018）。長(zhǎng)期以來(lái)，為了充分了解野外昆蟲(chóng)微孢子蟲(chóng)對(duì)家蠶的交叉?zhèn)魅拘裕?967～1979年日本學(xué)者廣瀨安春等曾在日本蠶區(qū)桑園收集102種昆蟲(chóng)（約25000頭），經(jīng)檢驗(yàn)發(fā)現(xiàn)65種昆蟲(chóng)存在微孢子蟲(chóng)感染，其中從12種昆蟲(chóng)體內(nèi)分離獲得的微孢子蟲(chóng)對(duì)家蠶具有感染力（周澤揚(yáng)等，2014）；國(guó)內(nèi)學(xué)者鄭祥明等（2003）也于1995～1998年在廣東蠶區(qū)桑園、菜地及蠶房附近收集野外昆蟲(chóng)共389種（約20000頭），檢驗(yàn)發(fā)現(xiàn)在51種昆蟲(chóng)中存在54種微孢子蟲(chóng)，其中18種可經(jīng)口感染家蠶；黃旭華等（2010）于2007～2009年在廣西蠶區(qū)收集野外昆蟲(chóng)約9000頭，初步查找出一些能感染微孢子蟲(chóng)的野外昆蟲(chóng)種類。此外，為充分了解微孢子蟲(chóng)對(duì)昆蟲(chóng)的危害性，已有學(xué)者對(duì)某些種類昆蟲(chóng)進(jìn)行微孢子蟲(chóng)感染率調(diào)查。王容燕等（2008）于1998～2003年在河北省調(diào)查棉鈴蟲(chóng)微孢子蟲(chóng)病的發(fā)生情況，發(fā)現(xiàn)田間棉鈴蟲(chóng)微孢子蟲(chóng)病呈流行趨勢(shì)，第4代幼蟲(chóng)微孢子蟲(chóng)感染率達(dá)49.0%，且微孢子蟲(chóng)對(duì)棉鈴蟲(chóng)致病力極強(qiáng)；Fürst等（2014）在英格蘭馬恩島設(shè)點(diǎn)調(diào)查家養(yǎng)蜜蜂與野外熊蜂的微孢子蟲(chóng)和病毒發(fā)生率，發(fā)現(xiàn)存在家養(yǎng)蜜蜂傳染微孢子蟲(chóng)和變形翼病毒給野生熊蜂的風(fēng)險(xiǎn)，進(jìn)而危害作物授粉蜂群密度，造成全球作物授粉效率降低，最終影響全球食物產(chǎn)量?！颈狙芯壳腥朦c(diǎn)】近年利用昆蟲(chóng)微孢子蟲(chóng)作為生物農(nóng)藥防治農(nóng)業(yè)和林業(yè)害蟲(chóng)已成為研究熱點(diǎn)。據(jù)報(bào)道，在我國(guó)新疆、內(nèi)蒙古、青海、甘肅等地使用過(guò)蝗蟲(chóng)微孢子蟲(chóng)的草場(chǎng)，近十年均未再度暴發(fā)大面積的蝗災(zāi)（石旺鵬和季榮，2017）。廣西地處亞熱帶地區(qū)，氣候高溫多濕，有利于植物生長(zhǎng)的同時(shí)有利于眾多昆蟲(chóng)種類繁殖，且廣西是我國(guó)蠶業(yè)生產(chǎn)規(guī)模第一大?。▍^(qū)），桑樹(shù)種植面積逐年擴(kuò)大，害蟲(chóng)繁多，但目前尚無(wú)針對(duì)廣西昆蟲(chóng)微孢子蟲(chóng)資源的系統(tǒng)報(bào)道?！緮M解決的關(guān)鍵問(wèn)題】在廣西蠶區(qū)的桑園、菜地及其周圍收集野外昆蟲(chóng)進(jìn)行檢驗(yàn)，旨在全面掌握廣西昆蟲(chóng)微孢子蟲(chóng)資源及其分布情況，并進(jìn)行感染性和分類研究，為經(jīng)濟(jì)昆蟲(chóng)微孢子蟲(chóng)病的防控提供參考依據(jù)。

1 材料與方法

1. 1 試驗(yàn)材料

供試家蠶品種為932×芙蓉。野外昆蟲(chóng)分別收集于廣西南寧市石埠鎮(zhèn)、武鳴區(qū)和廣西蠶業(yè)技術(shù)推廣站、柳州市柳江縣、河池市宜州區(qū)和南丹縣、百色市德?？h、貴港市港北區(qū)及崇左市扶綏縣。

1. 2 昆蟲(chóng)微孢子蟲(chóng)自然感染率調(diào)查

2014～2017年在各調(diào)查點(diǎn)的桑園及其周圍通過(guò)人工捕捉或誘蟲(chóng)燈引誘方式捕捉各種野外昆蟲(chóng)，對(duì)收集的昆蟲(chóng)進(jìn)行分類鑒定后逐只研磨鏡檢或集團(tuán)研磨鏡檢，判定是否感染微孢子蟲(chóng)，然后統(tǒng)計(jì)各種野外昆蟲(chóng)微孢子蟲(chóng)的自然感染率。

1. 3 昆蟲(chóng)微孢子蟲(chóng)感染力調(diào)查

1. 3. 1 部分昆蟲(chóng)微孢子蟲(chóng)對(duì)家蠶的病原性 收集部分昆蟲(chóng)微孢子蟲(chóng)，參照黃少康和魯興萌（2004）的方法進(jìn)行分離純化。將各純化昆蟲(chóng)微孢子蟲(chóng)配制成1.0×106個(gè)/mL的孢子懸液，再分別取各種孢子懸液0.2 mL，涂抹于2張面積8 cm2的桑葉上，飼喂30頭2齡起蠶。待蠶兒吃盡帶毒桑葉后，以經(jīng)漂白粉精溶液（含0.5%有效氯）浸泡消毒10 min的潔凈桑葉飼養(yǎng)至5齡第2 d，對(duì)所有蠶兒逐頭研磨鏡檢，調(diào)查各昆蟲(chóng)微孢子蟲(chóng)對(duì)家蠶的感染情況（羅梅蘭等，2012）。

1. 3. 2 部分昆蟲(chóng)微孢子蟲(chóng)的胚種傳染率調(diào)查 將桑尺蠖微孢子蟲(chóng)（Microsporidan isolated from Phtho-nandria atrilineata Butler，PaBM1）配制成1.0×106個(gè)/mL的孢子懸液，再將潔凈桑葉片浸泡于孢子懸液中，取出稍微晾干，飼喂桑尺蠖3齡幼蟲(chóng)，連續(xù)攻毒12 h后改用經(jīng)漂白粉精溶液（含0.5%有效氯）浸泡消毒10 min的潔凈桑葉飼養(yǎng)至化蛹，經(jīng)化蛾、交配和產(chǎn)卵后，檢驗(yàn)桑尺蠖成蟲(chóng)是否有微粒子孢子，收集3個(gè)卵塊，分別孵化出桑尺蠖幼蟲(chóng)；分區(qū)利用葉面消毒桑葉飼喂桑尺蠖幼蟲(chóng)3 d，再逐只檢驗(yàn)，調(diào)查桑尺蠖微孢子蟲(chóng)對(duì)桑尺蠖的胚種傳染率。同時(shí)，在菜地調(diào)查菜粉蝶幼蟲(chóng)（菜青蟲(chóng)）的危害情況，收集3窩未散開(kāi)的菜青蟲(chóng)，逐只研磨鏡檢攜帶微孢子蟲(chóng)情況，調(diào)查菜粉蝶微孢子蟲(chóng)的胚種傳染率。

1. 4 部分昆蟲(chóng)微孢子蟲(chóng)分子系統(tǒng)發(fā)育進(jìn)化分析

1. 4. 1 基因組DNA提取 參照劉吉平等（2004）、羅梅蘭等（2012）的方法，采用CTAB法抽提微孢子蟲(chóng)基因組DNA。

1. 4. 2 SSU rRNA序列PCR擴(kuò)增及測(cè)序分析 參照Huang等（2014）的方法選取引物18f（5'-CACCAGGTTGATTCTGCC-3'）和1537r（5'-TTATGATCCTCCTAATGGTTC-3'），再依據(jù)黃旭華等（2012）的方法PCR擴(kuò)增微孢子蟲(chóng)SSU rRNA序列，回收目的條帶DNA后分別進(jìn)行克隆。將各種微孢子蟲(chóng)SSU rRNA序列的克隆產(chǎn)物送至上海立菲生物技術(shù)有限公司進(jìn)行測(cè)序。

1. 4. 3 系統(tǒng)發(fā)育進(jìn)化樹(shù)構(gòu)建 參照董世楠等（2009）的方法，將測(cè)序得到的微孢子蟲(chóng)SSU rRNA序列與GenBank中的10種不同種屬微孢子蟲(chóng)進(jìn)行同源性比對(duì)分析，并構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)育進(jìn)化樹(shù)；同時(shí)對(duì)各種微孢子蟲(chóng)SSU rRNA序列進(jìn)行相似度和遺傳距離（分化度）分析。

2 結(jié)果與分析

2. 1 廣西昆蟲(chóng)微孢子蟲(chóng)資源分布情況

2014～2017年，先后從桂南（南寧市、崇左市）、桂中（柳州市）、桂東（貴港市）、桂西（百色市）和桂北（河池市）等蠶區(qū)的桑園、菜地及其周圍收集野外昆蟲(chóng)，主要是鱗翅目昆蟲(chóng)及少量鞘翅目昆蟲(chóng)，其種類有桑園內(nèi)的桑螟、桑尺蠖、斜紋夜蛾、桑毛蟲(chóng)、紅腹燈蛾、桑天牛和桑蘭葉甲及桑園周圍的菜粉蝶、稻縱卷葉螟和草螟等。4年期間共收集野外昆蟲(chóng)5萬(wàn)多頭，檢驗(yàn)發(fā)現(xiàn)攜帶微孢子蟲(chóng)孢子的昆蟲(chóng)有368頭，總感染率為0.70%，其中2014、2015、2016和2017年分別收集昆蟲(chóng)6361、5501、22933和17569頭，對(duì)應(yīng)的微孢子蟲(chóng)自然感染率為1.13%、1.62%、0.34%和0.73%。大部分野外昆蟲(chóng)種類均存在一定的微孢子蟲(chóng)感染情況，且差異明顯（表1）。在所有收集的昆蟲(chóng)中，以菜粉蝶微孢子蟲(chóng)感染率最高，達(dá)54.95%，其次是稻縱卷葉螟（4.38%），桑園外其他鱗翅目昆蟲(chóng)微孢子蟲(chóng)感染率為0.75%；桑園內(nèi)主要昆蟲(chóng)桑螟、桑尺蠖、斜紋夜蛾和紅腹燈蛾的微孢子蟲(chóng)自然感染率分別為0.08%、0.28%、0.64%和1.14%，桑毛蟲(chóng)、桑天牛、桑蘭葉甲和草螟等未檢出微孢子蟲(chóng)，可能是收集調(diào)查的昆蟲(chóng)數(shù)量較少。從區(qū)域分布來(lái)看，桂南、桂中、桂東、桂西和桂北的野外昆蟲(chóng)微孢子蟲(chóng)自然感染率分別為0.75%、0.50%、0.53%、0.38%和0.51%（表2），其中桂南地區(qū)的昆蟲(chóng)微孢子蟲(chóng)感染率較其他地區(qū)偏高，是由于該地區(qū)的菜粉蝶和稻縱卷葉螟微孢子蟲(chóng)自然感染率較高所致?？梢?jiàn)，廣西昆蟲(chóng)微孢子蟲(chóng)資源分布范圍廣，大部分昆蟲(chóng)均已感染微孢子蟲(chóng)，且呈現(xiàn)出桑園外昆蟲(chóng)微孢子蟲(chóng)自然感染率比桑園內(nèi)昆蟲(chóng)高的現(xiàn)象。

2. 2 野外昆蟲(chóng)微孢子蟲(chóng)對(duì)家蠶的感染性

共測(cè)定65株昆蟲(chóng)微孢子蟲(chóng)對(duì)家蠶的食下感染性，結(jié)果發(fā)現(xiàn)有26株昆蟲(chóng)微孢子蟲(chóng)可食下感染家蠶（表3），對(duì)家蠶的交叉感染率達(dá)40.00%，進(jìn)一步證實(shí)野外昆蟲(chóng)微孢子蟲(chóng)對(duì)家蠶具有交叉?zhèn)魅拘?，而野外昆蟲(chóng)是家蠶微粒子病發(fā)生的重要傳染源。

2. 3 野外昆蟲(chóng)微孢子蟲(chóng)的胚種傳染性

微孢子蟲(chóng)胚種傳染是危害寄主的重要方式。由表4可看出，桑尺蠖微孢子蟲(chóng)對(duì)桑尺蠖寄主的平均胚種傳染率達(dá)77.48%，說(shuō)明具有很強(qiáng)的胚種傳染力。田間調(diào)查發(fā)現(xiàn)，菜粉蝶微孢子蟲(chóng)對(duì)菜青蟲(chóng)（菜粉蝶）的平均胚種傳染率達(dá)66.15%（表4），說(shuō)明也具有很強(qiáng)的胚種傳染力。

2. 4 桑尺蠖微孢子蟲(chóng)SSU rRNA序列分析結(jié)果

經(jīng)PCR擴(kuò)增和測(cè)序分析，獲得3株桑尺蠖微孢子蟲(chóng)（PaBM3、PaBM5和PaBM6）的SSU rRNA序列，長(zhǎng)度為1100～1300 bp，與預(yù)期結(jié)果相符。將測(cè)序獲得的微孢子蟲(chóng)SSU rRNA序列與GenBank中的10種不同種屬微孢子蟲(chóng)進(jìn)行同源性比對(duì)分析，結(jié)果發(fā)現(xiàn)3株桑尺蠖微孢子蟲(chóng)間的相似度為98.9%～99.9%、分化度為0.1～0.3（圖1），與已知微孢子蟲(chóng)間的相似度（37.3%～99.9%）和分化度（0.1～54.5）存在明顯差異，初步推測(cè)這3株桑尺蠖微孢子蟲(chóng)為不同的微孢子蟲(chóng)?；谖㈡咦酉x(chóng)SSU rRNA序列構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)育進(jìn)化樹(shù)，發(fā)現(xiàn)獲得的3株桑尺蠖微孢子蟲(chóng)均位于Nosema屬類群中（圖2），即3株桑尺蠖微孢子蟲(chóng)雖然為不同的微孢子蟲(chóng)，但均屬于Nosema屬。

3 討論

微孢子蟲(chóng)是一類專營(yíng)細(xì)胞內(nèi)寄生的原生動(dòng)物，能感染從原生生物到人類的幾乎所有動(dòng)物（Winters and Faisai，2014），是許多昆蟲(chóng)、魚(yú)類、兔類、皮毛動(dòng)物、嚙齒類及靈長(zhǎng)類動(dòng)物的重要病原，是引發(fā)人畜腹瀉的主要病原（邱璐瑤等，2017；李東方等，2018），也是蝦、蟹等水產(chǎn)動(dòng)物的致死病原微生物（趙彥華等，2017）。為充分了解自然界昆蟲(chóng)中的微孢子蟲(chóng)流行規(guī)律，本研究調(diào)查了廣西昆蟲(chóng)微孢子蟲(chóng)資源分布情況，并分析昆蟲(chóng)微孢子蟲(chóng)的感染性和分類特性，結(jié)果表明，廣西昆蟲(chóng)微孢子蟲(chóng)資源分布廣泛，大部分鱗翅目昆蟲(chóng)存在微孢子蟲(chóng)感染情況，且部分昆蟲(chóng)微孢子蟲(chóng)對(duì)寄主具有很強(qiáng)的胚種傳染性（桑尺蠖微孢子蟲(chóng)和菜粉蝶微孢子蟲(chóng)），說(shuō)明可能存在微孢子蟲(chóng)與昆蟲(chóng)宿主共生或控制昆蟲(chóng)自然種群密度的現(xiàn)象。此外，各種野外昆蟲(chóng)的微孢子蟲(chóng)自然感染率存在明顯差異，如菜粉蝶的微孢子蟲(chóng)感染率達(dá)54.94%，而桑螟的微孢子蟲(chóng)感染率僅0.08%，二者相差600多倍，說(shuō)明自然界中存在易感微孢子蟲(chóng)的特定昆蟲(chóng)寄主，今后可從這些易感昆蟲(chóng)收集微孢子蟲(chóng)資源。

已有研究證實(shí)，昆蟲(chóng)微孢子蟲(chóng)可來(lái)源于Nosema sp.、Vairimorpha sp.、Thelophania sp.、Pleistophora sp.或Endoreticulatus sp.等不同屬。時(shí)連根等（1999）從桑尺蠖分離出1株Thelophania屬微孢子蟲(chóng)，方定堅(jiān)等（2002）從桑蘭葉甲分離出1株Vairimorpha屬微孢子蟲(chóng)，萬(wàn)永繼等（2005）從龍眼裳卷蛾分離出1株Vairimorpha屬微孢子蟲(chóng)，楊瓊等（2007）從甜菜夜蛾分離出1株Nosema屬微孢子蟲(chóng)；本課題組前期調(diào)查也發(fā)現(xiàn)，從7種昆蟲(chóng)分離獲得的微孢子蟲(chóng)均屬于Nosema屬（黃旭華等，2012，2013）。本研究結(jié)果表明，從桑尺蠖分離獲得的3株微孢子蟲(chóng)雖然為不同的微孢子蟲(chóng)，但均屬于Nosema屬，與家蠶微孢子蟲(chóng)同屬異種。此外，本研究通過(guò)生物試驗(yàn)鑒定昆蟲(chóng)微孢子蟲(chóng)對(duì)家蠶的感染力，發(fā)現(xiàn)有26株昆蟲(chóng)微孢子蟲(chóng)可食下感染家蠶，對(duì)家蠶的交叉感染率達(dá)40.00%。Kawarabata（2003）也曾報(bào)道昆蟲(chóng)微孢子蟲(chóng)可通過(guò)鱗毛、蛾液、病蟲(chóng)尸體等載體在自然界擴(kuò)散傳播并感染新寄主。可見(jiàn)，廣西蠶區(qū)已存在野外昆蟲(chóng)微孢子蟲(chóng)交叉?zhèn)魅炯倚Q的現(xiàn)象，尤其是菜粉蝶、稻縱卷葉螟、桑螟等昆蟲(chóng)具有與家蠶交叉感染微孢子蟲(chóng)的風(fēng)險(xiǎn)，即杜絕昆蟲(chóng)微孢子蟲(chóng)污染桑葉交叉感染家蠶是控制家蠶微粒子病發(fā)生的重要措施。

4 結(jié)論

在廣西各地區(qū)存在豐富的昆蟲(chóng)微孢子蟲(chóng)資源，種類多樣，且大部分昆蟲(chóng)微孢子蟲(chóng)屬于Nosema屬，與家蠶微孢子蟲(chóng)親緣關(guān)系密切；部分野外昆蟲(chóng)微孢子蟲(chóng)還對(duì)家蠶形成交叉?zhèn)魅疚：Φ娘L(fēng)險(xiǎn)，因此杜絕昆蟲(chóng)微孢子蟲(chóng)污染桑葉交叉感染家蠶是控制家蠶微粒子病發(fā)生的重要措施。

參考文獻(xiàn)：

董世楠，朱峰，徐莉，沈中元. 2009. 七種微孢子蟲(chóng)核糖體小亞基基因（SSU rRNA）的克隆及其系統(tǒng)發(fā)育分析[C]//中國(guó)蠶學(xué)會(huì). 中國(guó)蠶學(xué)會(huì)第六屆青年學(xué)術(shù)研討會(huì)論文集：1-23. [Dong S N，Zhu F，Xu L，Shen Z Y. 2009. Sequence and phylogenetic analysis of SSU rRNA gene of seven microsporidia[C]//Chinese Society of Sericultural Science. Proceedings of Sixth Youth Academic Symposium：1-23.]

方定堅(jiān)，楊瓊，鄒宇曉，鄭祥明，黃炳輝. 2002. 自桑蘭葉甲分離出的一種微孢子蟲(chóng)（Mic-I）的研究[J]. 昆蟲(chóng)學(xué)報(bào)，45（2）：182-187. [Fang D J，Yang Q，Zou Y X，Zheng X M，Huang B H. 2002. A microsporidium（Mic-I） isolated from Mimastra cyanura Hope[J]. Acta Entomologica Sinica，45（2）：182-187.]

黃少康，魯興萌. 2004. 家蠶微粒子蟲(chóng)（Nosema bombycis）與其形態(tài)變異株的侵染性及孢子表面蛋白的比較研究[J]. 中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)，37（11）：1682-1687. [Huang S K，Lu X M. 2004. Comparative study on the infectivity and spore surface protein of Nosema bombycis and its morphological variant strain[J]. Scienfia Agricultura Sinica，37（11）：1682-1687.]

黃旭華，潘志新，朱方容，韋廷秀，陳小青，石美寧，羅梅蘭，莫云霞. 2010. 廣西野外昆蟲(chóng)微孢子蟲(chóng)對(duì)家蠶交叉感染情況調(diào)查[J]. 廣西蠶業(yè)，47（4）：15-20. [Huang X H，Pan Z X，Zhu F R，Wei T X，Chen X Q，Shi M N，Luo M L，Mo Y X. 2010. Investigation on the cross infection from wild insect microsporidian to Bombyx mori in Guangxi[J]. Guangxi Sericulture，47（4）：15-20.]

黃旭華，祁廣軍，湯慶坤，潘志新，朱方容，黃元姣，林強(qiáng)，羅梅蘭，石美寧，吳勇滸，黃深惠. 2012. 從野外昆蟲(chóng)體內(nèi)分離的5株微孢子蟲(chóng)的生物學(xué)特性與分子系統(tǒng)發(fā)育研究[J]. 蠶業(yè)科學(xué)，38（5）：864-872. [Huang X H，Qi G J，Tang Q K，Pan Z X，Zhu F R，Huang Y J，Lin Q，Luo M L，Shi M N，Wu Y H，Huang S H. 2012. Biological characters and molecular phylogenesis of five microsporidia isolated from field insects[J]. Science of Sericulture，38（5）：864-872.]

黃旭華，祁廣軍，湯慶坤，潘志新，朱方容，劉玉生，于先哲，羅梅蘭，蔣滿貴，石美寧，唐亮，虞崇江. 2013. 從稻縱卷葉螟分離的一株微孢子蟲(chóng)的生物學(xué)特性與分子系統(tǒng)發(fā)育分析[J]. 蠶業(yè)科學(xué)，39（3）：543-550. [Huang X H，Qi G J，Tang Q K，Pan Z X，Zhu F R，Liu Y S，Yu X Z，Luo M L，Jiang M G，Shi M N，Tang L，Yu C J. 2013. Biolo-gical characters and molecular phylogenetic analysis of a microsporidium strain isolated from Cnaphalocrocis medinalis[J]. Science of Sericulture，39（3）：543-550.]

李東方，王璐陽(yáng)，鄭雙健，王璐，陳遠(yuǎn)才，毋亞運(yùn)，常艷凱，張素梅，張龍現(xiàn)，趙金鳳. 2018. 西藏部分地區(qū)馬屬動(dòng)物腸道寄生蟲(chóng)的流行病學(xué)調(diào)查及畢氏腸微孢子蟲(chóng)的基因型鑒定[J]. 中國(guó)獸醫(yī)科學(xué)，48（7）：865-871. [Li D F，Wang L Y，Zheng S J，Wang L，Chen Y C，Wu Y Y，Chang Y K，Zhang S M，Zhang L X，Zhao J F. 2018. Epidemiological investigation of intestinal parasites infection and genoty-pic identification of Enterocytozoon bieneusi in the Equus genus in Tibet[J]. Chinese Veterinary Science，48（7）：865-871.]

梁喜麗，魯興萌，邵勇奇. 2018. 鱗翅目昆蟲(chóng)病原微孢子蟲(chóng)研究進(jìn)展[J]. 微生物學(xué)報(bào)，58（6）：1064-1076. [Liang X L，Lu X M，Zhao Y Q. 2018. Advances in studies on Lepidoptera microsporidium pathogen[J]. Acta Microbiologica Sinica，58（6）：1064-1076.]

劉吉平，曹陽(yáng)，Smith J E，徐興耀. 2004. 模擬感染家蠶微粒子病的PCR分子診斷技術(shù)研究[J]. 中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)，37（12）：1925-1931. [Liu J P，Cao Y，Smith J E，Xu X Y. 2004. Studies on the application of PCR molecular diagnosis to silkworms with simulated pebrine disease[J]. Scientia A-gricultura Sinica，37（12）：1925-1931.]

劉吉平，曾玲. 2006. 微孢子蟲(chóng)生物多樣性研究的述評(píng)[J]. 昆蟲(chóng)知識(shí)，43（2）：153-158. [Liu J P，Zeng L. 2006. An overview of research on the microsporidian biodiversity[J]. Chinese Bulletin of Entomology，43（2）：153-158.]

羅梅蘭，黃旭華，潘志新，蔣滿貴，湯慶坤，黃深惠，安春梅，胡文娟，甘麗紅. 2012. 一株家蠶病原性微孢子蟲(chóng)的生物學(xué)特性與分子系統(tǒng)發(fā)育分析[J]. 蠶業(yè)科學(xué)，38（5）：856-863. [Luo M L，Huang X H，Pan Z X，Jiang M G，Tang Q K，Huang S H，An C M，Hu W J，Gan L H. 2012. Biological characters and molecular phylogenetic analysis of a microsporidian isolate pathogenic to Bombyx mori[J]. Science of Sericulture，38（5）：856-863.]

邱璐瑤，平靜，李文道，丁嵩濤，劉含登. 2017. 3種微孢子蟲(chóng)在我國(guó)西南部分地區(qū)腹瀉患者中的流行情況調(diào)查[J]. 中國(guó)真菌學(xué)雜志，12（5）：257-261. [Qiu L Y，Ping J，Li W D，Ding S T，Liu H D. 2017. Investigation of the prevalence of Enterocytozoon bieneusi，Enterocytozoon intestinalis and Enterocytozoon cuniculi among diarrheal patients in the southwest of China[J]. Chinese Journal of Mycology，12（5）：257-261.]

石旺鵬，季榮. 2017. 昆蟲(chóng)病原微孢子研究與應(yīng)用[J]. 中國(guó)生物防治學(xué)報(bào)，33（1）：11-17. [Shi W P，Ji R. 2017. Research and application of entomopathogenic microspori-dium[J]. Chinese Journal of Biological Control，33（1）：11-17.]

時(shí)連根，費(fèi)建明，王象禮，徐俊良. 1999. 桑尺蠖Thelohania類微孢子蟲(chóng)及其對(duì)家蠶的傳染性研究[J]. 浙江農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)，25（2）：175-178. [Shi L G，F(xiàn)ei J M，Wang X L，Xu J L. 1999. Study on the character of a Thelohania like microsporidian isolated from Phthonandria atrilineata and the infectivity to the silkworm Bombyx mori L.[J]. Journal of Zhejiang Agricultural University，25（2）：175-178.

萬(wàn)永繼，劉仁華，沈佐銳. 2005. 寄生于龍眼裳卷蛾的微孢子蟲(chóng)一新種（微孢子蟲(chóng)門(mén)，布雷孢蟲(chóng)科）[J]. 動(dòng)物分類學(xué)報(bào)，30（2）：291-294. [Wan Y J，Liu R H，Shen Z R. 2005. A new microsporidium（Microsporedia，Burenellidae） from the insect of Lepidoptera，Cerace stipatana（Walker）[J]. Acta Zootaxonomica Sinica，30（2）：291-294.]

王容燕，王金耀，曹偉平，杜立新，宋健，馮書(shū)亮. 2008. 棉鈴蟲(chóng)微孢子蟲(chóng)病的田間發(fā)生調(diào)查及其致病力測(cè)定[J]. 華北農(nóng)學(xué)報(bào)，23（S）：248-251. [Wang R Y，Wang J Y，Cao W P，Du L X，Song J，F(xiàn)eng S L. 2008. The occurrence of microsporidiosis（Nosema sp.） infecting Helicoverpa armigera in field and its pathogenicity[J]. Acta Agriculturae Boreali-Sinica，23（S）：248-251.]

楊瓊，李夫濤，吳福泉，唐翠明，羅國(guó)慶. 2007. 一種從甜菜夜蛾分離的微孢子蟲(chóng)的生物學(xué)特性研究[J]. 蠶業(yè)科學(xué)，33（1）：57-61. [Yang Q，Li F T，Wu F Q，Tang C M，Luo G Q. 2007. Characterization of a microsporidium isolated from larvae of beet armyworm，Laphygma exigua H.[J]. Acta Sericologica Sinica，33（1）：57-61.]

張茂林，王戎疆. 2011. 昆蟲(chóng)多樣性的保護(hù)現(xiàn)狀與趨勢(shì)[J]. 應(yīng)用昆蟲(chóng)學(xué)報(bào)，48（3）：739-745. [Zhang M L，Wang R J. 2011. The status and trend of insect diversity conservation[J]. Chinese Journal of Applied Entomology，48（3）：739-745.]

趙彥華，劉洪巖，丁正峰，孫夢(mèng)玲，薛暉. 2017. 江蘇省河蟹主養(yǎng)區(qū)微孢子感染情況調(diào)查報(bào)告[J]. 水產(chǎn)養(yǎng)殖，38（1）：11-14. [Zhao Y H，Liu H Y，Ding Z F，Sun M L，Xie H. 2017. Investigation report of microsporidian infection on Chinese mitten crab in Jiangsu main cultivation areas[J]. Journal of Aquaculture，38（1）：11-14.]

鄭祥明，楊瓊，方定堅(jiān)，廖森泰，鄒宇曉，黃炳輝. 2003. 廣東省昆蟲(chóng)微孢子蟲(chóng)資源調(diào)查及交叉感染的研究[J]. 蠶業(yè)科學(xué)，29（4）：380-383. [Zheng X M，Yang Q，F(xiàn)ang D J，Liao S T，Zou Y X，Huang B H. 2003. Studies on insect microsporidia resources in Guangdong Province and cross infection among some insects[J]. Acta Sericologica Sinica，29（4）：380-383.]

周澤揚(yáng)，潘國(guó)慶，向仲懷. 2014. 家蠶微孢子蟲(chóng)研究10年回顧[J]. 蠶業(yè)科學(xué)，40（6）：949-956. [Zhou Z Y，Pan G Q，Xiang Z H. 2014. A retrospect on researches in Nosema bombycis during the past ten years[J]. Science of Sericulture，40（6）：949-956.]

Fürst M A，McMahon D P，Osborne J L，Paxton R J，Brown M J. 2014. Disease associations between honeybees and bumblebees as a threat to wild pollinators[J]. Nature，506（7488）：364-366.

Huang X H，Qi G J，Pan Z X，Zhu F R，Huang Y J，Wu Y H. 2014. Identification of a microsporidian isolate from cnaphalocrocis medinalis and its pathogenicity to Bombyx mori[J]. Journal of Basic Microbiology，54（11）：1166-1174.

Kawarabata T. 2003. Biology of microsporidians infecting the silkworm，Bombyx mori，in Japan[J]. Journal of Insect Biotechnology and Sericology，72（1）：1-32.

Winters A D，F(xiàn)aisal M. 2014. Molecular and ultrastructural characterization of Haplosporidium diporeiae n. sp.，a pa-rasite of Diporeia sp.（Amphipoda，Gammaridea） in the Laurentian Great Lakes（USA）[J]. Parasites & Vectors，7：343.

（責(zé)任編輯 蘭宗寶）