閆海霞，鄧杰玲，關(guān)世凱，黃昌艷，何荊洲，卜朝陽，張自斌

(廣西壯族自治區(qū)農(nóng)業(yè)科學(xué)院花卉研究所，廣西 南寧 530007)

【研究意義】蒜香藤(Pseudocalymmaalliaceum)為紫葳科蒜香藤屬多年生常綠植物[1]，又名紫鈴藤、張氏紫薇，原產(chǎn)于熱帶美洲，生態(tài)適應(yīng)性廣，是優(yōu)良的垂直綠化植物，也是新興的藤本花卉類群。蒜香藤一年可開多次花，尤其在夏末初秋的9-10月開花最旺。因其花、葉在搓揉之后會散發(fā)出濃郁的大蒜香，故而得名。蒜香藤可用于籬笆、圍墻美化或涼亭、棚架裝飾，此外，還可用作陽臺攀援花卉或垂吊花卉，在廣東等沿海地區(qū)多數(shù)用于盆栽。近年來，隨著城市垂直綠化逐漸興起，市場對藤本花卉的需求越來越大，但傳統(tǒng)繁育已無法滿足市場對優(yōu)質(zhì)種苗的需求，因此亟待開展藤本花卉繁育技術(shù)多樣化研究。蒜香藤市場前景廣闊，是藤本花卉的主流類群，開展其繁育技術(shù)多樣化研究有利于藤本花卉的規(guī)模化和產(chǎn)業(yè)化。【前人研究進展】國內(nèi)對蒜香藤的繁殖研究不多，主要集中在扦插繁育技術(shù)上[2-3]。如廖美蘭等[4]以不同濃度GGR6號及不同基質(zhì)進行扦插，得出基質(zhì)以細沙為宜，以300 mg/LGGR6號生根粉速蘸后扦插，生根率可達90 %；周亮等[5]探討了不同生長調(diào)節(jié)劑及不同濃度、不同基質(zhì)、不同插穗長度和直徑對生根的影響，研究發(fā)現(xiàn)以直徑0.50～0.80 cm長度10 cm的插穗、采用割傷+IBA(200 mg/L)速蘸處理、用泥炭和河沙比例4∶1作基質(zhì)進行扦插效果最好。但扦插繁殖周期長，占用空間大。而組織培養(yǎng)技術(shù)具有繁殖速度快、繁殖系數(shù)大，繁殖后代整齊一致，能保持原有品種的優(yōu)良性狀，不受季節(jié)限制等優(yōu)點，已廣泛應(yīng)用于各種觀賞植物[6-7]，組培快繁在紫葳科物種上的應(yīng)用也有相關(guān)報道[8-11]。【本研究切入點】目前國內(nèi)鮮見有關(guān)蒜香藤組培快繁的報道。【擬解決的關(guān)鍵問題】以蒜香藤的帶芽莖段為外植體，通過不同滅菌方法獲得無菌苗，進而在附加不同種類和濃度的植物生長調(diào)節(jié)劑的培養(yǎng)基上分別進行初代培養(yǎng)基、繼代培養(yǎng)基、生根培養(yǎng)基的篩選，建立其組培快繁體系，為其今后的快速繁殖和遺傳轉(zhuǎn)化提供基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 試驗材料

供試蒜香藤植株由廣西壯族自治區(qū)農(nóng)業(yè)科學(xué)院花卉研究所提供。1000 mL MS培養(yǎng)基的配置：將40 g MS培養(yǎng)基固體粉末加熱溶解于1000 mL蒸餾水中， 調(diào)節(jié)pH為5.8～6.0。1000 mL WPM培養(yǎng)基的配置：將2.14 g WPM培養(yǎng)基固體粉末、0.56 g硝酸鈣、20 g/L蔗糖、4 g/L瓊脂加熱溶解于1000 mL蒸餾水中，調(diào)節(jié)pH為5.8～6.0。

1.2 試驗方法

1.2.1 外植體的消毒滅菌 以蒜香藤的帶芽莖段(未萌發(fā))為外植體，洗衣粉浸泡8～10 min后用自來水沖洗，在超凈工作臺上，先用75 %酒精拭擦莖段，無菌水沖洗3次，再用0.10 %升汞處理8～12 min，無菌水沖洗3次。接入MS培養(yǎng)基后，每天觀察污染情況，連續(xù)觀察15 d后統(tǒng)計污染率、成活率。污染率( %)=污染數(shù)/接種數(shù)×100，成活率( %)=萌芽數(shù)/接種數(shù)×100。

1.2.2 增殖培養(yǎng) 將萌發(fā)的新芽切取下來，接在附加了不同植物生長調(diào)節(jié)劑的培養(yǎng)基上。30 d后統(tǒng)計并計算增殖系數(shù)：增殖系數(shù)=增殖植株數(shù)/接種數(shù)。

1.2.3 生根培養(yǎng) 當增殖出的小苗長至高2.00～2.50 cm時，轉(zhuǎn)接于生根培養(yǎng)基中。30 d后統(tǒng)計并計算生根率：生根率( %)=生根植株數(shù)/接種數(shù)×100。

1.2.4 煉苗移栽 將已生根的組培瓶苗在室外煉苗1～2 d，然后打開瓶蓋再煉苗1～2 d，洗凈培養(yǎng)基，生根苗在50 %多菌靈可濕性粉劑800～1000倍溶液中浸泡10 min后移栽到基質(zhì)中，澆透定根水，15 d統(tǒng)計移栽成活率：移栽成活率( %)=成活植株數(shù)/移栽植株數(shù)×100。

1.3 統(tǒng)計分析

采用SPSS 19.0統(tǒng)計軟件進行方差分析及Duncan’s 多重比較。

2 結(jié)果與分析

2.1 不同處理對蒜香藤莖段滅菌的影響

由表1可知，莖段采用的滅菌方法不同，其污染率和成活率有所不同。方差分析表明，各處理污染率從高到低依次為1>2>3>4=5=6，除了處理4、5和6之間差異不顯著外，處理1、2、3的污染率差異均達顯著水平，其中處理4、5和6均為0。在成活率上，各處理從高到低依次為4>5>6>3>2>1，其中處理4成活率最高，為100.00 %，但與處理5、6的成活率無顯著差異。由此表明，莖段拭擦酒精后可顯著降低污染，提高成活率。隨著升汞浸泡時間的增加，污染率和成活率變化趨勢因拭擦酒精與否而有所不同。莖段不拭擦酒精，隨著升汞浸泡時間增加，污染率逐漸降低，成活率逐漸升高；莖段拭擦酒精后，隨著升汞浸泡時間增加，污染率均為0，成活率逐漸降低。莖段滅菌采用酒精拭擦后再用升汞浸泡8～12 min的滅菌效果最佳。

表1 不同滅菌方法對蒜香藤莖段滅菌的影響

注：同列數(shù)據(jù)后不同小寫字母表示差異達顯著水平(P<0.05)。下同。

Note:In the same series, values with different lower case letters mean the difference was signiflcant(P<0.05). Similarly hereinafter.

表2 不同基本培養(yǎng)基、植物生長調(diào)節(jié)劑配比對蒜香藤增殖培養(yǎng)的影響

2.2 不同處理對蒜香藤增殖培養(yǎng)的影響

由表2數(shù)據(jù)分析可知，各處理的增殖系數(shù)從高到低依次為X15>X18>X17>X9> X12>X11>X16>X14>X8>X13>X10>X7>X6>X5>X3>X4>X2>X1。方差分析表明，在MS培養(yǎng)基中，在相同的NAA濃度下，隨著6-BA濃度的增加，增殖系數(shù)逐漸增加，但增幅不顯著；在相同的6-BA濃度下，隨著NAA濃度的增加，增殖系數(shù)逐漸增大，當6-BA和NAA達到實驗最大濃度，即1.5 mg/L，增殖系數(shù)為MS組中的最大值。在WPM培養(yǎng)基上，當NAA濃度相同時，隨著6-BA濃度的增加增殖系數(shù)逐漸增加，當6-BA濃度相同時，隨著NAA濃度的增加增殖系數(shù)逐漸增加，其中在NAA為0.1 mg/L、6-BA為1.5 mg/L時增殖系數(shù)增加最顯著，為4.86，且顯著高于其他17個處理。因此，結(jié)合植株生長情況可得出，適宜蒜香藤增殖培養(yǎng)的培養(yǎng)基為WPM+6-BA1.5 mg/L+NAA 0.1 mg/L，增殖系數(shù)為4.86。

2.3 不同處理對蒜香藤生根培養(yǎng)的影響

由表3可知，各處理的生根率從高到低依次為T7> T8> T6> T4> T3> T2> T5> T1，除了T7與 T8、T4與 T3之間差異不顯著外，各處理的生根率差異均達顯著水平。各處理的平均根數(shù)從高到低依次為T8> T6> T7> T4> T3> T5> T2> T1，其中T8的平均根數(shù)顯著高于其他培養(yǎng)基。在生根時間上，各處理從長到短依次為T5> T1> T3> T2> T4> T6> T8> T7，T7、T8的最短生根時間顯著短于其他處理。由此表明，IBA濃度以及基本培養(yǎng)基類型對生根具有顯著影響。在MS培養(yǎng)基上，隨著IBA濃度增加，生根率逐漸升高，最短生根時間呈先降低后升高的趨勢。在WPM培養(yǎng)基上，隨著IBA濃度的增加，生根率呈現(xiàn)先升后降的變化趨勢，最短生根時間呈現(xiàn)先降后升的變化趨勢，當IBA濃度為0.2 mg/L時，生根率達最大，為96.67 %，最短生根時間最短，為20 d，當IBA濃度為0.3 mg/L時，生根率為94.67 %，最短生根時間為20.33 d。方差分析已表明WPM+IBA 0.2 mg/L的生根率、最短生根時間和WPM+IBA 0.3 mg/L無顯著差異，但是WPM+IBA 0.3 mg/L平均根數(shù)顯著高于WPM+IBA 0.2 mg/L。因此，蒜香藤的適宜生根培養(yǎng)基為WPM+IBA 0.2～0.3 mg/L，生根率高，根數(shù)多，生根時間短，長勢好，根較粗壯。

表3 不同培養(yǎng)基對蒜香藤生根培養(yǎng)的影響

2.4 不同處理對蒜香藤移栽的影響

通過表4可知，各處理成活率從高到低依次為S4>S5>S1>S6>S3>S2，除了S1與S6處理之間差異不顯著外，各處理的成活率差異均達顯著水平；其中S1處理成活率最高，為100.00 %，且植株健壯，長勢好，緩苗時間短；S2處理成活率最低，為57.33 %，且植株長勢差，緩苗時間長。因此，蒜香藤的移栽基質(zhì)以泥炭混合珍珠巖，體積比為2∶1的移栽效果最佳。

3 討 論

外植體的滅菌效果取決于滅菌劑的種類和滅菌時間。本實驗采用了2種不同的滅菌劑，其中酒精滅菌采用拭擦方式，與多數(shù)外植體采用酒精浸泡的方式有所不同。擦拭可以極大地縮短莖段接觸酒精時間，在一定程度上減輕了酒精對外植體的毒害作用，有利于提高莖段成活率。從實驗可知，蒜香藤的外植體滅菌較容易，原因可能是莖段表面較光滑，從自然界中攜帶的微生物較少。

在蒜香藤的增殖培養(yǎng)和生根培養(yǎng)中，以MS和WPM為基本培養(yǎng)基的培養(yǎng)效果有所不同。WPM為基本培養(yǎng)基更有利于蒜香藤的增殖和生根培養(yǎng)，雖然現(xiàn)今大多以MS為基本培養(yǎng)基進行紫葳科植物的組織培養(yǎng)，但由于組織培養(yǎng)的基本培養(yǎng)基和物種間并沒有必然的聯(lián)系，因此同科植物的研究對于目標物種的研究僅是一個參考。即使同一物種，在不同培養(yǎng)階段，基本培養(yǎng)基不同培養(yǎng)效果有所不同，如在進行豐花月季葉片的愈傷組織誘導(dǎo)時，在MS，B5，White，WPM 4種基本培養(yǎng)基中，以MS培養(yǎng)基的誘導(dǎo)率最高[12]。同一品種在同一培養(yǎng)階段使用的基本培養(yǎng)基也有可能不同，如月季‘卡羅拉’的不定芽增殖培養(yǎng)基、生根培養(yǎng)基分別是MS+2.0 mg/L6-BA+0.2 mg/L NAA，1/2 MS+0.3 mg/LIBA[13]，但由于植株的生理狀態(tài)或組培條件的差異，不定芽增殖培養(yǎng)基、生根培養(yǎng)基也可以分別采用WPM+3.00 mg/L 6-BA +0.10 mg/L NAA和WPM+0.30 mg/L IBA[14]。

WPM培養(yǎng)基是一種在MS培養(yǎng)基的基礎(chǔ)上改良的低鹽培養(yǎng)基，主要用于木本植物，針對性較強。蒜香藤是一種木質(zhì)藤本，在MS培養(yǎng)基上的增殖和生根效果較差，可能是MS培養(yǎng)基中的氮鹽偏高，而WPM培養(yǎng)基的氮鹽偏低，因為MS培養(yǎng)基中的KNO3在WPM中被K2SO4代替，MS培養(yǎng)基中的NH4NO3用量在WPM中也僅有1/4。具體原因還有待于進一步研究。

4 結(jié) 論

通過實驗得出：莖段滅菌的最佳組合宜先用75 %酒精拭擦莖段再用0.10 %升汞浸泡8～12 min，污染率為0，成活率為100.00 %；適宜的增殖培養(yǎng)基為WPM+6-BA1.50 mg/L+NAA 0.10 mg/L，增殖系數(shù)為4.86；適宜的生根培養(yǎng)基為WPM+ IBA 0.20～0.30 mg/L，生根率高，植株的根數(shù)多、粗壯，生根時間短，長勢好；移栽基質(zhì)以體積比為2∶1的泥炭混合珍珠巖為宜，移栽成活率為100.00 %，植株長勢好，健壯，緩苗時間很短。