孫少起 孫茜 任光懿 任東悅 陶宗龍 陳成勛

摘要：為研究工廠化育苗循環(huán)用水亞硝酸鹽積累對鯉魚（Cyprinus carpio）孵化的影響，人工設(shè)置不同亞硝酸態(tài)氮濃度梯度，在恒溫22±0.5 ℃條件下進行鯉魚受精卵的人工孵化。在一定的亞硝酸態(tài)氮濃度范圍內(nèi)，隨著濃度的增加，鯉魚胚胎發(fā)育速度減慢，孵化率降低；魚苗畸形率增加，體質(zhì)變?nèi)?。實驗表明不同亞硝酸態(tài)氮濃度對鯉魚胚胎發(fā)育有一定的影響，隨著濃度增加孵化率降低、畸形率上升。亞硝酸態(tài)氮濃度與孵化率在一定范圍（0.622～15.648 mg/L）內(nèi)呈直線回歸關(guān)系，濃度達到7.099 mg/L時，魚苗因體質(zhì)弱而失去商品價值。根據(jù)結(jié)果得出，在其他理化因子不產(chǎn)生影響的條件下，亞硝酸態(tài)氮濃度在0.622 mg/L范圍以內(nèi)可獲得好的仔魚產(chǎn)出率。

關(guān)鍵詞：鯉魚（Cyprinus carpio）；受精卵；孵化率；畸形率；亞硝酸態(tài)氮

有關(guān)亞硝酸態(tài)氮對孵化的危害，前人對鯉魚（Cyprinus carpio）、草魚（Ctenopharyngodon idellus）、尼羅羅非魚（Oreochromis niloticus）、鮭科魚類及其它魚類的孵化[1-2]、魚苗[3-4]及成魚[5-6]已作出一定的研究。一般認為魚類血液中亞鐵血紅蛋白被亞硝酸氧化成高鐵血紅蛋白，從而抑制血液的載氧能力而影響魚類的生長。但國內(nèi)對大宗養(yǎng)殖魚類孵化、胚胎發(fā)育的影響報道較少，僅見于對斑馬魚（Danio rerio）胚胎發(fā)育的研究[7-8]。本試驗通過對鯉魚胚胎在不同亞硝酸態(tài)氮濃度水體中的胚胎發(fā)育及胚后發(fā)育情況的觀察，找出鯉魚孵化水體中的安全亞硝酸態(tài)氮濃度，從而在生產(chǎn)中控制孵化水體中的亞硝酸態(tài)氮濃度。在保證受精卵正常發(fā)育的前提下，提高孵化率，降低畸形率，增強魚苗體質(zhì)，更好地服務(wù)于生產(chǎn)。

1材料與方法

1.1實驗材料

1.1.1受精卵實驗用受精卵取自天津市西青區(qū)的水產(chǎn)養(yǎng)殖場成熟度好的3～4齡健康親魚，進行人工催產(chǎn)，通過人工授精獲受精卵。

1.1.2實驗用水實驗用水為曝氣48 h以上的地下水，pH：8.2，鹽度：0.51‰，氨氮：0.622 mg/L，硬度：43 mg/L，堿度：0.192 mg/L，硫化物：0064 17 mg/L。

1.1.3實驗器材規(guī)格75 cm×55 cm×45 cm的水箱一個，體積7 L的小塑料桶五個，1 L的小塑料盆12 個，1 mL、2 mL、5 mL移液管各一個，100 mL的量筒一個，WMZK-01型控溫儀兩個，5 cm×5 cm的聚乙烯網(wǎng)片12個。

1.2實驗方法

1.2.1實驗前準(zhǔn)備實驗前用濃度為20 mg/L的高錳酸鉀溶液對用具進行浸泡消毒處理，然后用清水充分清洗，并在日光下曝曬。配制濃度為100 mg/L的NaNO2溶液[9]，用曝氣加溫過的井水稀釋使其濃度依次為 4.148，7.099，10.991，14.892，15.648 mg/L，作為孵化用水分別放入容積為1 L的塑料盆中，并作上標(biāo)記，放進恒溫水箱中。

1.2.2實驗方法先使用鯉魚受精卵處理液處理受精卵，之后將受精卵均勻分布于消過毒的聚乙烯網(wǎng)片上，每網(wǎng)片布卵100粒左右，然后將布卵后的網(wǎng)片放入小盆中，并將小盆放入22土0.5℃的恒溫水箱中，每隔6 h換同溫度同濃度的孵化用水一次，期間用蒸餾水補充蒸發(fā)掉的水分，以保持水體中亞硝酸態(tài)氮的相對穩(wěn)定，并間隔充氧，保證水體中溶氧達7.5 mg/L。孵化開始時每0.5 h觀察一次胚胎發(fā)育情況，后期1 h觀察一次，記錄各階段發(fā)育情況。并作一次平行、兩次重復(fù)試驗。

2結(jié)果

參考相關(guān)文獻[10]并通過觀察不同亞硝酸態(tài)氮濃度下鯉魚胚胎發(fā)育階段時間并加以對照（見表1），發(fā)現(xiàn)亞硝酸態(tài)氮濃度對鯉魚心跳期以前的各個階段的發(fā)育速度影響不大，心跳期以后影響較明顯，各試驗組的胚胎發(fā)育速度相應(yīng)減慢，與對照組比，到完全破膜時其他各組依次延長了3、5、7、13和14.5 h。隨著亞硝酸態(tài)氮濃度升高，鯉魚孵化率和畸形率呈現(xiàn)相應(yīng)的降低和升高（見表2），實際觀察在亞硝酸態(tài)氮升高到7.099 mg/L以上時，仔魚活力減弱，基本失去商品價值。

隨水體中亞硝酸態(tài)氮濃度的增加，鯉魚胚胎的孵化率下降，各濃度組相對應(yīng)的鯉魚胚胎的孵化率基本在直線y=-1.092 115 x+88.101 997上。在濃度為10.991 mg/L時有一較顯著變化（見圖1）。

鯉仔魚的畸形率隨孵化水體中亞硝酸態(tài)氮濃度的增加而上升，當(dāng)濃度小于14.892 mg/L時，各濃度組相對應(yīng)的魚苗的畸形率基本分布在直線y=0.893 208 x+ 3.983 448上，而當(dāng)濃度大于14.892 mg/L時，畸形率則急劇上升，偏離上述直線（見圖2）。

通過對鯉魚在不同亞硝酸態(tài)氮濃度下的孵化率的方差分析發(fā)現(xiàn)，不同亞硝酸態(tài)氮濃度條件下，對鯉魚的孵化率影響較顯著（F2，12=4.39，P<005）。

通過對亞硝酸態(tài)氮濃度對鯉魚胚胎孵化影響的多重比較分析發(fā)現(xiàn)（見表3），濃度為15.648 mg/L以及濃度為14.892 mg/L的水體中仔魚的孵化率與對照組比差異極顯著（P<0.01），濃度為10.991 mg/L 的水體中的孵化率與對照組比差異較顯著（P<0.05）；濃度為4.148 mg/L及濃度為7.099 mg/L的水體中的孵化率與對照組比差異不顯著（P>0.05）。各組間比較：濃度為4148 mg/L組與濃度為10.991 mg/L 和7.099 mg/L組差異較顯著（P<0.05），濃度為7.099 mg/L 組與濃度為14.892 mg/L 組差異較顯著（P<0.05））。

著，下同。

通過觀察亞硝酸態(tài)氮對鯉魚初孵仔魚畸形率影響的方差分析，亞硝酸態(tài)氮濃度與鯉魚苗畸形率的關(guān)系極顯著 （F2，12=8.75，P<0.01）。

通過多重比較發(fā)現(xiàn)（見表4），不同的亞硝酸態(tài)氮濃度孵化水體中的初孵仔魚的畸形率與對照組比差異呈極顯著（P<0.01）。各濃度間比差異呈較顯著（P<0.05）或極顯著（P<0.01）。

由此，亞硝酸態(tài)氮濃度對魚苗畸形率影響較明顯。

隨亞硝酸態(tài)氮濃度的增加初孵仔魚在水體中的存活率下降（見表5），但其下降主要是在出苗后的前36 h，36 h后，由于魚苗對水體有了一定的適應(yīng)，未見魚苗繼續(xù)死亡。但從總體看，水體中的亞硝酸態(tài)氮濃度越高，初孵仔魚的短期存活率越低。

3討論

本試驗在保證其他水質(zhì)條件基本穩(wěn)定的情況下，逐漸增大孵化水體中亞硝酸態(tài)氮的濃度，觀察鯉魚胚胎發(fā)育速度、孵化率，魚苗畸形率、體質(zhì)以及魚苗在短期內(nèi)的存活情況，得出一些對生產(chǎn)有指導(dǎo)意義的結(jié)論。

隨孵化水體中亞硝酸態(tài)氮濃度的逐漸增大，鯉魚胚胎發(fā)育速度逐步減慢，由表1可以看出，孵化水體中的亞硝酸態(tài)氮對胚胎發(fā)育的影響主要在心跳期以后，濃度為4.148 mg/L的孵化水體中的鯉魚胚胎完全破膜的時間比對照組延長了3 h，濃度為7.099 mg/L的水體中的完全破膜時間延長了近5 h，而最大濃度組15.648 mg/L的孵化水體中的胚胎完全破膜時間則延長了近15 h，由此可以看出孵化水體中的亞硝酸態(tài)氮濃度越高，胚胎滯育現(xiàn)象越嚴重。故而在生產(chǎn)實踐中應(yīng)利用換水充氧等手段盡量控制亞硝酸態(tài)氮濃度不超過4.148 mg/L，以利于魚卵的正常發(fā)育。

鯉魚胚胎的孵化率、初孵仔魚的畸形率受孵化水體中的亞硝酸態(tài)氮濃度的影響也較明顯，隨濃度增加，胚胎孵化率下降，仔魚畸形率上升，在濃度低于14.892 mg/L時，孵化率的下降和畸形率上升分別在直線y=-1.092 115 x+ 88.101 997和y=0.893 208 x+ 3.983 448上。當(dāng)濃度大于14.892 mg/L時，胚胎孵化率和初孵仔魚畸形率則有一顯著的下降和上升。通過對亞硝酸態(tài)氮對孵化率和畸形率影響的多重比較發(fā)現(xiàn)，各濃度組孵化率的下降和畸形率的上升與對照組比差異顯著（P<0.05），故在生產(chǎn)中應(yīng)最大限度地降低孵化水體中的亞硝酸態(tài)氮濃度，以提高孵化率，降低畸形率。

對照組中的魚苗體質(zhì)健壯，游動迅速，魚苗較整齊，隨水中的亞硝酸態(tài)氮的增加，魚苗個體變得細弱，游動緩慢，濃度達7.099 mg/L時，魚苗因體質(zhì)弱而失去商品價值，這一濃度高于養(yǎng)殖水體中的亞硝酸態(tài)氮的安全濃度，根據(jù)王明學(xué)等（1989）、趙元鳳等（1991）的研究發(fā)現(xiàn)，鰱魚對亞硝酸態(tài)氮的安全濃度為2.4 mg/L[11]，鯉魚對亞硝酸態(tài)氮的耐度為1.8 mg/L[12]，羅非魚對亞硝酸態(tài)氮的耐度為2.8 mg/L[13]。本試驗在實踐發(fā)現(xiàn)銨態(tài)氮與亞硝酸態(tài)氮較高情況下魚苗成活率會受到影響背景下開展的單一因子的影響實驗，實驗結(jié)果顯示鯉魚受精卵發(fā)育對亞硝酸鹽的耐受限度高于上述結(jié)果，造成這一結(jié)果的原因主要應(yīng)與卵膜的保護相關(guān)，另外的可能性還在于在整個孵化過程都保持較高的溶氧水平會對魚卵、魚苗有一個良性作用。在循環(huán)使用孵化用水的生產(chǎn)中銨態(tài)氮、亞硝酸態(tài)氮會隨使用次數(shù)的積累上升到0.8 mg/L、1.5 mg/L，會使魚苗成活率降低到50%以下，本次試驗結(jié)果從側(cè)面提示了鯉魚工廠化育苗在循環(huán)使用孵化用水的一定階段后影響鯉魚孵化率和仔魚質(zhì)量的理化因素不是單一因子的作用，可以確定的是亞硝酸鹽對鯉魚高密度孵化的影響作用較低。

在工廠化育苗過程中，單位水體育苗量大，水體負載力高，各種水化因子變化劇烈，如超過一定的范圍，會對生產(chǎn)造成非常不利的影響。本試驗著重于對水體中的亞硝酸態(tài)氮對鯉魚胚胎發(fā)育的影響的觀察，初步得出在水體中溶氧7.5 mg/L左右，其他水質(zhì)條件較好時鯉魚胚胎孵化的安全的亞硝酸態(tài)氮濃度為4.148 mg/L，故在鯉魚孵化生產(chǎn)中應(yīng)控制水中亞硝酸態(tài)氮濃度使其不超過4.148 mg/L，從而使工廠化育苗工作能在較好的水質(zhì)條件下達到較理想的效果。

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（收稿日期：2018-04-02；修回日期：2018-06-23）