□ 肖聰偉 江西省食品檢驗(yàn)檢測(cè)研究院

1 檢測(cè)方法

本實(shí)驗(yàn)按照SN/T 1948-2007《進(jìn)出口食品中環(huán)己基氨基磺酸鈉的檢測(cè)方法 液相色譜-質(zhì)譜/質(zhì)譜法》的原理及方法步驟，利用液相色譜質(zhì)譜聯(lián)用儀對(duì)食品中環(huán)己基氨基磺酸鈉進(jìn)行檢測(cè)，選取茶飲料作為樣品基質(zhì)，采用陰性樣品加標(biāo)實(shí)驗(yàn)評(píng)定該方法的不確定度。

1.1 提取

稱取1g左右茶飲料樣品置于25mL離心管中，加入8mL水，混勻后，超聲20min，于4000r/min離心5min，移取水相，過膜，供液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀測(cè)定。

1.2 計(jì)算公式

試樣中環(huán)己基氨基磺酸鈉的含量均按下式進(jìn)行計(jì)算：

式中：X為試樣中目標(biāo)物的含量，單位為微克/千克（μg/kg）；C為樣液中目標(biāo)物的濃度，單位為納克/毫升（ng/mL）；V為被測(cè)液定容體積，單位為毫升（mL）；M為樣品質(zhì)量，單位為克（g）；f為稀釋因子。

2 不確定度的來源分析及測(cè)量數(shù)學(xué)模型的建立[1-3]

環(huán)己基氨基磺酸鈉含量測(cè)定的不確定度來源包括以下幾個(gè)方面：①樣品稱量質(zhì)量引入的不確定度；②樣品定容體積引入的不確定度；③樣品提取液測(cè)定濃度引入的不確定度，包括采用最小二乘法擬合標(biāo)準(zhǔn)工作曲線求得樣品濃度過程中所引入的不確定度、標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液制備引入的不確定度：標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液制備過程中的不確定度由標(biāo)準(zhǔn)品的不確定度、天平的允差、容量瓶體積的不確定度組成；④平均回收率引入的不確定度；⑤測(cè)試過程中因?qū)嶋H操作引入的不確定度，其由重復(fù)進(jìn)行的加標(biāo)樣品的精密度和準(zhǔn)確度來體現(xiàn)。

圖1 不確定度來源因果圖

表1 不同濃度下的響應(yīng)值

不確定度數(shù)學(xué)模型為：

3 不確定度評(píng)定

3.1 樣品稱量質(zhì)量引入的不確定度

3.2 定容體積引入的不確定度

樣品定容體積的不確定度主要由移液管的校準(zhǔn)和溫度變化所引起。

3.2.1 移液管的校準(zhǔn)引入的不確定度

在操作步驟中，定容使用到10mL的容量瓶。根據(jù)福建計(jì)量的校準(zhǔn)技術(shù)指標(biāo)，10mL的容量瓶在20℃時(shí)容量相對(duì)誤差為0.1%（0.001mL），重復(fù)性偏差為0.6%（0.006mL）。

3.2.2 溫度變化引入的不確定度

移液器已在20℃校準(zhǔn)，而實(shí)驗(yàn)室的溫度在（20±4）℃之間變動(dòng)。溫度變化引入的不確定度按矩形分布處理。

1mL移液器引入的溫度不確定度：

1mL移液器引入的體積不確定度：

淋巴管瘤需要和單純性囊腫、腫瘤囊變、脊膜膨出、畸胎瘤、血管瘤等疾病進(jìn)行準(zhǔn)確鑒別，以淋巴管瘤水樣均勻密度為依據(jù)，囊壁菲薄未發(fā)生強(qiáng)化，單純依據(jù)“爬行性生長”及“液-液”平面等特點(diǎn)進(jìn)行診斷，確診率較高，但出現(xiàn)出血、感染等繼發(fā)改變后，則會(huì)相應(yīng)的增加鑒別診斷難度。

由于定容過程使用兩次移液器，則體積不確定度為：

合成上述不確定度分量，則樣品定容體積引入的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)不確定度為：

3.3 樣品提取液濃度計(jì)算值引入的不確定度

為了得到一元線性回歸方程，用已知濃度（C）的不同標(biāo)準(zhǔn)溶液進(jìn)行n次測(cè)量，得到n個(gè)儀器響應(yīng)值A(chǔ)，然后再按最小二乘法就可求得一元線性回歸方程：Y=C×B1+B0。式中，Y為儀器響應(yīng)值乘以內(nèi)標(biāo)濃度與內(nèi)標(biāo)響應(yīng)值的比值，即A*(IS C./IS A.)；C為待測(cè)溶液的濃度；B1為校準(zhǔn)曲線的斜率；B0為校準(zhǔn)曲線的截距。

由于這是一條擬合直線，按照該線性回歸方程求得的待測(cè)樣品濃度就不可避免地產(chǎn)生測(cè)量不確定度，該測(cè)量不確定度按下文進(jìn)行計(jì)算。

3.3.1 校準(zhǔn)曲線擬合

利用校準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中目標(biāo)物的含量。使用配制的100ug/mL標(biāo)準(zhǔn)溶液稀釋兩次后配制5個(gè)混合標(biāo)準(zhǔn)工作溶液，其濃度分別為6.48、12.96、25.92、51.84、64.8ng/mL，每個(gè)濃度分別測(cè)定1次，使用線性最小二乘法以色譜峰面積對(duì)環(huán)己基氨基磺酸鈉濃度進(jìn)行線性擬合，得到線性方程分別為：環(huán)己基氨基磺酸鈉：Y=25.6816C+14.1623。5個(gè)校準(zhǔn)標(biāo)準(zhǔn)溶液測(cè)量結(jié)果見表1。

3.3.2 樣品提取液測(cè)量濃度引入的不確定度

3.3.2.1 擬合不確定度

對(duì)陰性加標(biāo)樣品進(jìn)行3次測(cè)定，環(huán)己基氨基磺酸鈉含量平均值為53.95ng/mL，由校準(zhǔn)曲線所帶來的不確定度可由式(1)計(jì)算：

式中：u1（C）為待測(cè)溶液濃度C的測(cè)定不確定度；S為殘差的標(biāo)準(zhǔn)偏差；C為樣品加標(biāo)后檢測(cè)平均值；為不同標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度的平均值（共測(cè)量n次）；B1為擬合曲線中的斜率；P為樣品平行的測(cè)定次數(shù)；n為標(biāo)準(zhǔn)溶液測(cè)定的次數(shù)； Scc為離均差平方和。

3.3.2.2 儲(chǔ)存標(biāo)準(zhǔn)溶液和中間標(biāo)準(zhǔn)使用液濃度不確定度

實(shí)際測(cè)量過程中，標(biāo)準(zhǔn)使用液配制如下：利用校準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中環(huán)己基氨基磺酸鈉的含量；使用標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液(濃度偏差為0.05%)分兩次稀釋配制5個(gè)標(biāo)準(zhǔn)工作溶液。

由于配制過程中因稀釋產(chǎn)生的不確定度遠(yuǎn)小于標(biāo)準(zhǔn)曲線擬合所帶入的不確定度，因此將此類不確定度忽略不計(jì)。因此，樣品提取液環(huán)己基氨基磺酸鈉測(cè)量濃度引入的不確定度為：

3.4 重復(fù)性測(cè)試體現(xiàn)儀器精密度的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)不確定度u (精密度）

表2 環(huán)己基氨基磺酸鈉

表3 標(biāo)準(zhǔn)系列擬合直線求樣品中產(chǎn)生的標(biāo)準(zhǔn)不確定度

表4 重復(fù)性測(cè)試體現(xiàn)儀器的精密度

表5 加標(biāo)回收測(cè)試體現(xiàn)的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)不確定度

用6.48ng/mL的標(biāo)品，重復(fù)進(jìn)樣6次，峰面積數(shù)據(jù)及RSD如表4：

環(huán)己基氨基磺酸鈉：

3.5 加標(biāo)回收測(cè)試體現(xiàn)測(cè)定過程準(zhǔn)確度的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)不確定度u (精密度）

表6 環(huán)己基氨基磺酸鈉的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)不確定度各分量計(jì)算值

4 合成標(biāo)準(zhǔn)不確定度及擴(kuò)展不確定度

一般情況下，按照慣例，測(cè)量結(jié)果的擴(kuò)展不確定度[4]包含擴(kuò)展因子k，則擴(kuò)展不確定度：Urel=k ，在95%置信概率下，k=2，因此，擴(kuò)展不確定度U=3.64×2=7.28μg/kg。

則樣品中環(huán)己基氨基磺酸鈉含量測(cè)量結(jié)果應(yīng)表示為：χ=(53.95±7.28)μg/kg。

5 結(jié)論

在95%置信概率下，利用液相色譜質(zhì)譜聯(lián)用儀對(duì)茶飲料中環(huán)己基氨基磺酸鈉進(jìn)行檢測(cè)的擴(kuò)展不確定度U=7.28μg/kg。