郭英 王斌 楊起東 司馬義江·阿布都熱西提

【摘 要】 目的：建立HPLC-DAD測(cè)定西帕依麥孜彼子口服液中梔子苷含量的方法。方法：采用Sepax HP-C18色譜柱，流動(dòng)相為乙腈-0.1%磷酸溶液，流速1.0mL/min，DAD檢測(cè)器，檢測(cè)波長(zhǎng)238nm，進(jìn)樣體積10μL。結(jié)果：梔子苷在2.26～56.60μg/mL（r=0.99999）范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系；精密度的RSD為0.11%，重復(fù)性試驗(yàn)的RSD為0.30%，穩(wěn)定性試驗(yàn)的RSD為1.14%，平均回收率為98.21%（RSD為1.12%，n=9）。結(jié)論：該方法簡(jiǎn)便、靈敏、重復(fù)性好，結(jié)果準(zhǔn)確，可用于西帕依麥孜彼子口服液的質(zhì)量控制。

【關(guān)鍵詞】 高效液相色譜法；西帕依麥孜彼子口服液；梔子苷；含量測(cè)定

【中圖分類(lèi)號(hào)】R284.2 【文獻(xiàn)標(biāo)志碼】 A【文章編號(hào)】1007-8517（2018）15-0027-03

Abstract：Objective To establish an method for content determination of geniposide in Xipayimaizibizi Oral Liquid. Method The HPLC method was adopted on the column of Sepax HP-C18 column with mobile phase of acetonitrile -0.1% phosphoric（14∶86）at a flow rate of 1.0m L/min， the detection wavelength was 238nm，the column temperature was 30℃，the injection volume was 10μL.Results The linear range was 2.26～56.60μg/mL for geniposide（r=0.99999）.The average recoveries were 98.21%（RSD=1.12%，n=9）.The content RSD of the precision was 0.11%.The content RSD of reproducibility was 0.30%. The content RSD of stability was 1.14%.Conclusion The method is easy to operate，accurate，sensitive and reproducible for the content determination of geniposide in Xipayimaizibizi oral liquid.

Keywords：HPLC；Xipayimaizibizi Oral Liquid；Geniposide；Content Determination

西帕依麥孜彼子口服液，收載于《中華人民共和國(guó)衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)》（維吾爾藥分冊(cè)），標(biāo)準(zhǔn)編號(hào)：WS3-BW-0122-98，具有增強(qiáng)機(jī)體營(yíng)養(yǎng)力、攝住力及排泄力，清濁利尿的功效[1]。用于前列腺炎和前列腺增生所致小便頻數(shù)、余瀝不盡、腰膝酸軟、頭暈?zāi)垦！⒚虏疃Q、早泄夢(mèng)遺等。西帕依麥孜彼子口服液為傳統(tǒng)維藥合劑，現(xiàn)行質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)過(guò)于落后，僅有鑒別項(xiàng)和檢查項(xiàng)，未確定主要成分含量測(cè)定指標(biāo)，難以保證制劑質(zhì)量的均一、穩(wěn)定。本研究參照相關(guān)文獻(xiàn)[2-6]，首次采用高效液相色譜法[7-11]（HPLC法），對(duì)西帕依麥孜彼子口服液中梔子苷的含量進(jìn)行了測(cè)定，為維藥西帕依麥孜彼子口服液的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究奠定基礎(chǔ)。

1 儀器與試藥

島津LC-2030C 3D高效液相色譜儀（島津公司）；Sepax HP-C18（250mm×4.6mm，5μm；填料：十八烷基硅烷鍵合硅膠）。

西帕依麥孜彼子口服液，規(guī)格：10mL，批號(hào)：170328、160838、160439，由新疆齊康哈博維藥股份有限公司生產(chǎn)。對(duì)照品梔子苷（批號(hào)110749-201316，含量97.5%，中國(guó)食品藥品檢定研究院），乙腈為色譜純，供貨商：賽默飛世爾科技（中國(guó)）有限公司，水為超純化水，其它試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件 色譜柱：Sepax HP-C18；流動(dòng)相：乙腈-0.1%磷酸（14∶86）；流速：1mL·min-1 檢測(cè)波長(zhǎng)：238nm；柱溫：30℃；進(jìn)樣量：10μL。

2.2 溶液制備

2.2.1 對(duì)照品儲(chǔ)備液：精密稱(chēng)取梔子苷對(duì)照品11.32mg，置100mL量瓶中，加甲醇適量，超聲至充分溶解，放冷，加甲醇至刻度，搖勻，制成含梔子苷0.1132mg·mL-1）的對(duì)照品儲(chǔ)備液。

2.2.2 對(duì)照品溶液：精密量取梔子苷對(duì)照品儲(chǔ)備液2mL，置10mL量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，得梔子苷的質(zhì)量濃度為22.64μg/mL的對(duì)照品溶液。

2.2.3 供試品溶液：精密量取西帕依麥孜彼子口服液0.5mL，置25mL量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，經(jīng)0.45μm微孔濾膜濾過(guò)，取續(xù)濾液，即得。

2.2.4 空白溶液：取制備供試品溶液的溶劑，同供試品溶液步驟方法制備，即得。

2.3 方法學(xué)考察 專(zhuān)屬性實(shí)驗(yàn)：精密吸取2.2項(xiàng)下的空白溶液、對(duì)照品溶液、供試品溶液各10μL，按上述色譜條件測(cè)定，記錄HPLC圖譜如圖1所示。

線性關(guān)系考察：分別精密量取2.2.1項(xiàng)下梔子苷對(duì)照品儲(chǔ)備液各1.0、2.0、5.0、10.0、25.0mL，分別置50mL量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，制得梔子苷濃度分別為2.26、4.53、11.32、22.64、56.60μg/mL的系列標(biāo)準(zhǔn)曲線溶液。按擬定色譜條件進(jìn)行測(cè)定，計(jì)算峰面積積分值。以梔子苷質(zhì)量濃度（X，μg/mL）為橫坐標(biāo)、峰面積積分值（Y）為縱坐標(biāo)進(jìn)行線性回歸，得回歸方程，梔子苷為Y=14199.00X-855.28，r=0.99999（n=5）。結(jié)果表明，梔子苷質(zhì)量濃度在2.26～56.60μg/mL范圍內(nèi)與峰面積積分值線性關(guān)系良好。

精密度試驗(yàn)：取2.2.2項(xiàng)下對(duì)照品溶液，按擬定色譜條件進(jìn)行測(cè)定，連續(xù)進(jìn)樣6次，記錄峰面積。結(jié)果梔子苷峰面積的RSD為0.11%（n=6），表明儀器精密度良好。

穩(wěn)定性試驗(yàn)：取2.2.3項(xiàng)下的同一供試品（批號(hào)為160838）溶液，置室溫下，分別于0、2、4、8、12、24h按擬定色譜條件進(jìn)行測(cè)定，記錄峰面積。結(jié)果梔子苷峰面積的RSD為1.14%（n=6），表明供試品溶液在室溫下24h內(nèi)穩(wěn)定。

重復(fù)性試驗(yàn)：取西帕依麥孜彼子口服液（批號(hào)為160838），按供試品溶液制備項(xiàng)下的方法制備6份供試品溶液，按擬定色譜條件進(jìn)行測(cè)定，記錄梔子苷峰面積。結(jié)果梔子苷峰面積的RSD為0.30%（n=6），表明方法重復(fù)性良好。結(jié)果見(jiàn)表1。

加樣回收試驗(yàn)：精密量取已知含量的西帕依麥孜彼子口服液（批號(hào)為160838）0.25mL 9份，置25mL量瓶中，分別加入濃度為113.20μg/mL梔子苷對(duì)照品2、2.5、3mL各三份，按供試品溶液制備方法制備9份待測(cè)溶液，按擬定色譜條件進(jìn)行測(cè)定，記錄溶液中梔子苷峰面積，并計(jì)算加樣回收率。結(jié)果見(jiàn)表2。

2.4 樣品含量測(cè)定 用3批西帕依麥孜彼子口服液，按2.2.2項(xiàng)下的方法制備供試品溶液，按擬定色譜條件進(jìn)行測(cè)定，記錄峰面積，并用梔子苷回歸方程計(jì)算含量。結(jié)果見(jiàn)表3。

3 討論

本實(shí)驗(yàn)選用不同比例的流動(dòng)相系統(tǒng)，乙腈-0.1%磷酸（10∶90、12∶88、14∶86、15∶85、16∶84、18∶82、20∶80）。結(jié)果表明，流動(dòng)相為乙腈-0.1%磷酸（14∶86）時(shí)柱效高，分離效果好。

實(shí)驗(yàn)中比較了純水、30%甲醇、50%甲醇、70%甲醇、甲醇為提取溶媒，結(jié)果表明甲醇提取效率最高，因此選用甲醇作為提取溶劑。

西帕依麥孜彼子口服液臨床應(yīng)用廣泛，但其質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)落后，本研究根據(jù)制劑組成，選擇有效成分梔子苷作為測(cè)試指標(biāo)，對(duì)西帕依麥孜彼子口服液的質(zhì)量進(jìn)行控制。本方法操作簡(jiǎn)單，線性關(guān)系良好，穩(wěn)定性、重現(xiàn)性好，加樣回收率符合要求，為西帕依麥孜彼子口服液的質(zhì)量控制提供了良好的依據(jù)。

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