王留國(guó)，田 靖

(天方藥業(yè)有限公司，河南 駐馬店 463000)

雙氯芬酸鈉(Diclofenac sodium)為解熱鎮(zhèn)痛、非甾體類抗炎藥，起效較快，主要通過(guò)抑制前列腺素的合成而產(chǎn)生鎮(zhèn)痛、抗炎、解熱作用，用于緩解類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎、骨關(guān)節(jié)炎、脊柱關(guān)節(jié)病、痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎、風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎等各種關(guān)節(jié)炎的關(guān)節(jié)腫痛癥狀，用于治療非關(guān)節(jié)性的各種軟組織風(fēng)濕性疼痛、如肩痛、腱鞘炎、滑囊炎、肌痛及運(yùn)動(dòng)后損傷性疼痛等，它常作為醫(yī)藥原料用于生產(chǎn)雙氯芬酸鈉腸溶片、雙氯芬酸鈉腸溶膠囊、雙氯芬酸鈉栓、雙氯芬酸鈉搽劑和雙氯芬酸鈉滴眼液[1]。國(guó)內(nèi)對(duì)雙氯芬酸鈉研究已不少見[2-4]。在雙氯芬酸鈉的生產(chǎn)過(guò)程中常用到甲醇、丙酮、甲苯、乙酸乙酯和二氯乙烷等，這些有機(jī)溶劑有的是第一類溶劑、屬應(yīng)該避免使用的如二氯乙烷，有的屬第二類、第三類溶劑也是應(yīng)該限制使用和藥品GMP或其他質(zhì)量要求限制使用的[5]。為保證產(chǎn)品質(zhì)量、控制殘留溶劑在法規(guī)要求的限度內(nèi)、需對(duì)溶劑殘留進(jìn)行檢測(cè)控制?！吨袊?guó)藥典》未收載該品種溶劑殘留檢測(cè)方法。本研究在參考中國(guó)藥典和相關(guān)文獻(xiàn)基礎(chǔ)上[6-8]，采用GC法檢查雙氯芬酸鈉中的殘留溶劑。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

氣相色譜儀(Agilent6890N)，頂空進(jìn)樣器(AgilentG1888)，Mettler Toledo MS204S電子天平(十萬(wàn)之一)。

1.2 試劑

雙氯芬酸鈉樣品(寧波斯邁克藥業(yè)有限公司生產(chǎn)，批號(hào)分別為DOSR-1703031、DOSR-1705011、DOSR-1707016)，甲醇(分析純，國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司，批號(hào)20170306)，丙酮(分析純，洛陽(yáng)市化學(xué)試劑廠，批號(hào)150508)，二氯乙烷(分析純，山東西亞化學(xué)工業(yè)有限公司，批號(hào)H40516),乙酸乙酯(分析純，西隴科學(xué)有限公司，批號(hào)1705031)，甲苯(分析純，國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司，批號(hào)20161225)，二甲基亞砜(色譜純，國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司，批號(hào)16110352)。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

色譜柱為6%氰丙基苯-94%二甲基聚硅氧烷毛細(xì)管柱(DB-624，規(guī)格：30m×0.320mm，1.8μm)；柱箱初始溫度100℃，保留6min；汽化溫度150℃；檢測(cè)溫度250℃；載氣為氮?dú)?；流?.0mL/min；氫氣40 mL/min；空氣400 mL/min；分流比5∶1；頂空瓶溫度(爐溫)100℃；定量環(huán)溫度105℃；傳輸線溫度110℃；樣品瓶恒溫30min；加壓時(shí)間0.2min；定量環(huán)定量時(shí)間0.2min；定量環(huán)平衡時(shí)間0.2min；進(jìn)樣時(shí)間1min。

2.2 溶液配制

對(duì)照品溶液：取甲醇、丙酮、甲苯、乙酸乙酯和二氯乙烷適量，精密稱定，置同一100 mL量瓶中，用二甲基亞砜制成每1 mL中約含甲醇3.0 mg、丙酮5.0 mg、甲苯0.89 mg、乙酸乙酯5.0 mg、二氯乙烷0.005 mg的混合溶液，精密量取1mL置頂空瓶中，壓蓋密封作為對(duì)照溶液。

供試品溶液：取雙氯芬酸鈉約1.0 g, 置10 mL頂空瓶中，精密加二甲基亞砜1mL，壓蓋密封，超聲處理使樣品溶解作為供試溶液。

2.3 專屬性試驗(yàn)

取空白溶劑、對(duì)照溶液、供試溶液分別進(jìn)樣，記錄色譜圖?？瞻兹軇o(wú)干擾，對(duì)照溶液、樣品溶液色譜圖中色譜峰均可完全分離，所有峰基線分離，色譜峰彼此無(wú)干擾，分離度最低10.47，見圖1。說(shuō)明該方法專屬性強(qiáng)，滿足檢測(cè)要求。

圖1 甲醇、丙酮、乙酸乙酯、甲苯、二氯乙烷典型色譜圖

2.4 線性試驗(yàn)和檢測(cè)限(LOD)

精密稱定甲醇、丙酮、甲苯、乙酸乙酯和二氯乙烷適量，加二甲基亞砜制成每1 mL中各約含5 mg、1 mg、0.5 mg、0.1 mg、0.05 mg甲醇、丙酮、甲苯、乙酸乙酯和二氯乙烷的混合溶液，頂空進(jìn)樣分析，以c濃度為橫坐標(biāo)，峰面積A為縱坐標(biāo)，進(jìn)行線性回歸。同時(shí)計(jì)算檢測(cè)限(LOD)和定量限(LOQ)，結(jié)果見表1。甲醇、丙酮、甲苯、乙酸乙酯和二氯乙烷在5～5000 ppm范圍線性關(guān)系良好。

表1 甲醇、丙酮、甲苯、乙酸乙酯和二氯乙烷的回歸方程及LOD、LOQ

2.5 精密度試驗(yàn)

取對(duì)照品溶液，連續(xù)進(jìn)樣6次，測(cè)定峰面積，計(jì)算甲醇、丙酮、甲苯、乙酸乙酯和二氯乙烷的峰面積RSD分別為0.97%、0.63%、0.62%、1.23%、0.86%結(jié)果見表2。表明本方法測(cè)定甲醇、丙酮、甲苯、乙酸乙酯和二氯乙烷含量精密度良好。

表2 甲醇、丙酮、甲苯、乙酸乙酯和二氯乙烷峰面積及RSD

2.6 穩(wěn)定性試驗(yàn)

取同一份供試品溶液，室溫放置，于0、2、4、6和10 h分別進(jìn)樣測(cè)定，計(jì)算甲醇、丙酮、甲苯、乙酸乙酯和二氯乙烷峰面積的RSD為1.07%、0.93%、1.28%、0.79%、1.19%。表明供試品溶液室溫放置10 h內(nèi)相對(duì)穩(wěn)定。

2.7 重復(fù)性試驗(yàn)

取同批次雙氯芬酸鈉6份,每份約1.0 g，分別置10 mL頂空瓶中,另取對(duì)照品甲醇、丙酮、甲苯、乙酸乙酯和二氯乙烷適量，精密稱定，加二甲基亞砜2 mL，制成每份中每1 mL中約含甲醇0.5 mg、丙酮0.5 mg、甲苯0.5 mg、乙酸乙酯0.5 mg和二氯乙烷0.5μg的6份溶液，壓蓋密封，超聲處理使樣品溶解作為供試溶液，進(jìn)樣測(cè)定，按外標(biāo)法以峰面積計(jì)算含量。結(jié)果甲醇、丙酮、甲苯、乙酸乙酯和二氯乙烷含量的RSD分別為2.82%、3.93%、1.97%、2.77%和3.6%。

2.8 回收率試驗(yàn)

取樣品雙氯芬酸鈉1.0 g 9份，精密稱定，置10 mL頂空瓶中，精密量取對(duì)照溶液0.8 mL、1 mL、1.2 mL加入頂空瓶中，壓蓋密封，超聲處理使樣品溶解，制成相當(dāng)于80%、100%、120%濃度的樣品溶液各3份。按照殘留溶劑測(cè)定方法，頂空進(jìn)樣，計(jì)算回收率。結(jié)果加樣平均回收率為：甲醇100.7%、丙酮99.1%、甲苯98.8%、乙酸乙酯101.3%、二氯乙烷98.3%，RSD分別為1.78%、2.16%和3.01%、1.96%、2.37%。

2.9 樣品測(cè)定

取3批雙氯芬鈉樣品，按“2.2”項(xiàng)下方法制備供試品溶液和對(duì)照品溶液，按“2.1”項(xiàng)下色譜條件分別頂空進(jìn)樣，記錄色譜圖，計(jì)算甲醇、丙酮、甲苯、乙酸乙酯和二氯乙烷的殘留量，結(jié)果見表3。

表3 殘留溶劑測(cè)定結(jié)果/%(n=3)

3 討論

3.1 耐用性試驗(yàn)考察

用丙酮進(jìn)樣，通過(guò)改變進(jìn)樣溫度，汽化溫度和流速，理論塔板數(shù)最低69733、檢測(cè)結(jié)果變化不大，重現(xiàn)性較好，說(shuō)明本方法耐用性好，對(duì)色譜條件要求不苛刻，結(jié)果見表4。

表4 耐用性試驗(yàn)結(jié)果

3.2 溶劑選擇

分別采用水和二甲基亞砜作為溶劑，結(jié)果顯示二氯乙烷難溶于水，甲苯極微溶于水，乙酸乙酯微溶于水，甲醇、丙酮溶于水。在二甲基亞砜中甲醇、丙酮、甲苯、乙酸乙酯和二氯乙烷有較好的溶解性，且二甲基亞砜溶劑峰對(duì)甲醇、丙酮、甲苯、乙酸乙酯和二氯乙烷的峰無(wú)干擾，故選用二甲基亞砜作為溶劑。