高通量測(cè)序分析不同產(chǎn)地帶魚冷藏時(shí)微生物群落多樣性

高乾坤，焦琳舒，杜賀超，陸兆新，別小妹，呂鳳霞*

（南京農(nóng)業(yè)大學(xué)食品科學(xué)技術(shù)學(xué)院，江蘇 南京 210095）

帶魚（Trichiurus haumela）是我國的主要海洋經(jīng)濟(jì)魚種之一，其廣泛分布于我國沿海各省并以東海產(chǎn)量最高，其味道鮮美，營養(yǎng)價(jià)值高，具有很高的經(jīng)濟(jì)效益。帶魚中富含不飽和脂肪酸，相比于家禽肉類，如牛肉、豬肉和雞肉等，更易被人體吸收[1]。但同樣因?yàn)槠漭^高的脂肪酸含量比例，使其相較于其他家禽肉類更易氧化、腐敗變質(zhì)。另外，帶魚屬于深海魚種，生活在深水區(qū)，當(dāng)被捕撈上岸之后便會(huì)死亡，不能像淡水魚一樣在捕撈、運(yùn)輸甚至銷售過程中一直保持鮮活。因此，帶魚的防腐保鮮對(duì)于其發(fā)揮更大的經(jīng)濟(jì)效益，便成為一個(gè)至關(guān)重要的問題[2-3]。

帶魚的腐敗，主要是由于腐敗微生物引起的。魚體是一個(gè)優(yōu)良的天然“培養(yǎng)基”，富含各種營養(yǎng)基質(zhì)，微生物會(huì)在魚體快速繁殖生長，逐漸引起腐敗。對(duì)這些致腐微生物的研究，是防腐的首要關(guān)鍵[4]。常用的腐敗菌分析方法有傳統(tǒng)的微生物培養(yǎng)分離、熒光定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（polymerase chain reaction，PCR）與變性梯度凝膠電泳（denatured gradient gel electrophoresis，DGGE）等方法[5-8]，但是由于細(xì)菌之間的相互作用復(fù)雜，部分微生物培養(yǎng)條件困難，傳統(tǒng)方法無法準(zhǔn)確分離鑒定樣品腐敗期間細(xì)菌群落組成。有研究者將傳統(tǒng)分離方法與16S rRNA分子鑒定技術(shù)相結(jié)合，對(duì)帶魚冷藏過程中的主要腐敗微生物進(jìn)行分離與快速鑒定發(fā)現(xiàn)，帶魚的主要優(yōu)勢(shì)腐敗菌為腐敗希瓦氏菌（Shewanella putrefaciens）與熒光假單胞菌（Pseudomonas fluorescens），但由于傳統(tǒng)分離檢測(cè)方法的局限性，仍無法對(duì)帶魚冷藏過程中微生物群落結(jié)構(gòu)變化進(jìn)行全面分析[9-11]。

近年來，隨著分子生物學(xué)技術(shù)的發(fā)展，高通量測(cè)序技術(shù)應(yīng)運(yùn)而生。作為一種無需微生物分離培養(yǎng)的快速檢測(cè)技術(shù)，高通量測(cè)序技術(shù)不僅可以檢出難以培養(yǎng)的優(yōu)勢(shì)微生物，還能確定樣品中大多數(shù)微生物的相對(duì)豐度[9]。因此，高通量測(cè)序技術(shù)已廣泛應(yīng)用于水土環(huán)境檢測(cè)[12-13]、人體腸道微生物檢測(cè)[14-16]、食品生產(chǎn)加工[17-19]等多方面。在扇貝柱[20]等水產(chǎn)品中微生物多樣性分析上，高通量測(cè)序技術(shù)也是一種有效手段。

為了系統(tǒng)地研究不同產(chǎn)地帶魚從新鮮狀態(tài)到腐敗階段的整個(gè)過程菌相的動(dòng)態(tài)變化情況，更全面地了解帶魚貯藏過程中菌群變化規(guī)律，本實(shí)驗(yàn)以產(chǎn)自江蘇南通呂四港黃海海域和浙江舟山港東海海域的帶魚為研究對(duì)象，采用Illumina Miseq高通量測(cè)序技術(shù)分析不同冷藏時(shí)間下的帶魚樣品中的菌群組成情況及變化規(guī)律，為帶魚的防腐保鮮提供理論依據(jù)，也為開發(fā)水產(chǎn)品微生物快速鑒定方法以保障帶魚質(zhì)量安全提供基礎(chǔ)信息。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

新鮮帶魚（200～250 g），當(dāng)日早晨捕撈于江蘇南通呂四港、浙江舟山港口，冰運(yùn)至實(shí)驗(yàn)室。產(chǎn)自江蘇南通的樣品編號(hào)為HH，產(chǎn)自浙江舟山的樣品編號(hào)為DH。經(jīng)保鮮袋密封包裝后放置于4 ℃冰箱冷藏。以購買當(dāng)天帶魚作為對(duì)照組，記為0 d，其余為實(shí)驗(yàn)組，分別冷藏2、4、6、8 d。

細(xì)菌基因組DNA提取試劑盒 美國Omega公司；Axy Prep DNA凝膠回收試劑盒 美國Axygen公司。

1.2 儀器與設(shè)備

5084R高速冷凍離心機(jī) 德國Eppendorf公司；PTC-100TM PCR儀 美國MJ Research公司；拍擊式均質(zhì)機(jī)法國Interscience公司。

1.3 方法

1.3.1 提取DNA的樣品處理

在無菌超凈工作臺(tái)中，將帶魚去頭去尾去內(nèi)臟，割取不同部位魚肉組織，剪成塊狀。為保證采集樣品的代表性，隨機(jī)選取3 條帶魚樣品進(jìn)行混合。稱取25 g魚肉組織，置于無菌均質(zhì)袋中，加入50 mL含0.1 g/100 mL蛋白胨的0.85 g/100 mL的生理鹽水，均質(zhì)10 min。經(jīng)200 目無菌紗布過濾后，濾液1 000 r/min離心10 min，去沉淀，上清液于10 000 r/min離心10 min，棄上清液，沉淀重懸浮于1 mL TE buffer，-70 ℃凍存?zhèn)溆谩?/p>

1.3.2 總DNA的提取

按照Omega公司細(xì)菌基因組DNA提取試劑盒的方法操作，提取細(xì)菌總DNA，并用1%的瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)提取效果。

1.3.3 PCR擴(kuò)增及高通量測(cè)序

以提取的總細(xì)菌基因組DNA為模板，引物針對(duì)16S rRNA基因V3/V4區(qū)合成特異引物，利用338F（5’-ACTCCTACGGGAGGCAGCA-3’）和806R（5’-GGACTACHVGGGTWTCTAAT-3’）引物進(jìn)行PCR擴(kuò)增。擴(kuò)增后的PCR產(chǎn)物進(jìn)行2%瓊脂糖凝膠電泳，經(jīng)純化后的樣品進(jìn)行定量檢測(cè)。將檢測(cè)后的樣品委托上海美吉生物醫(yī)藥科技有限公司，進(jìn)行高通量測(cè)序。

對(duì)MiSeq測(cè)序得到的雙端序列數(shù)據(jù)進(jìn)行處理，首先根據(jù)PE reads之間的overlap關(guān)系，將成對(duì)的reads拼接（merge）成一條序列，同時(shí)對(duì)reads的質(zhì)量和merge的效果進(jìn)行質(zhì)控過濾，根據(jù)序列首尾兩端的barcode和引物序列區(qū)分樣品得到有效序列，并校正序列方向[21]。

基于操作分類單元（operational taxonomic units，OTU）聚類分析結(jié)果，研究環(huán)境中微生物的多樣性，通過單樣本的多樣性（Alpha多樣性）分析微生物群落的豐度和多樣性，以及對(duì)測(cè)序深度進(jìn)行檢測(cè)[22]?；诜诸悓W(xué)信息，在各個(gè)分類水平上進(jìn)行群落結(jié)構(gòu)統(tǒng)計(jì)，綜合討論不同產(chǎn)地帶魚冷藏的微生物群落。

2 結(jié)果與分析

2.1 測(cè)序數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)與OUT分析

圖1 樣品序列長度分布圖Fig. 1 Length distribution profile of trimed sequences

采用Illumina Miseq高通量測(cè)序獲得了江蘇南通及浙江舟山兩種產(chǎn)地帶魚樣品的原始序列數(shù)據(jù)后，經(jīng)Trimmomatic及FLASH軟件優(yōu)化數(shù)據(jù)后得到了10 個(gè)樣本共388 229 條有效序列，序列平均長度為445.98～449.89 bp，主要集中在441～460 bp的區(qū)間長度內(nèi)（圖1）。隨著樣品量的不斷增大，在樣品量大于20 000時(shí)，OUT曲線（圖2A）和Shannon-Wiener曲線趨于平坦（圖2B），說明測(cè)序數(shù)據(jù)量合理，且測(cè)序數(shù)據(jù)量足夠大，可以反映樣本中絕大多數(shù)的微生物多樣性信息[23]。

圖2 稀釋曲線（A）和 Shannon-Wiener曲線（B）分析Fig. 2 Rarefaction curves (A) and Shannon-Wiener curves (B)

對(duì)樣品進(jìn)行OUT聚類分析，獲得了OUT數(shù)量為209 個(gè)，涵蓋了14 門，24 綱，46 目，78 科，129 屬。產(chǎn)自江蘇南通及浙江舟山的新鮮帶魚樣品的OUT數(shù)量分別為183和146（表1），帶魚樣品在經(jīng)8 d冷藏后，OUT數(shù)量分別下降至68與78，即在冷藏期間，樣品中的微生物種類在不斷減少，尤其是在冷藏后期4～8 d時(shí)，OUT數(shù)量急速減少，可能是冷藏后期腐敗程度較高，多種微生物無法生存導(dǎo)致。

表1 測(cè)序數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)結(jié)果Table 1 Statistical results of sequence data

2.2 Alpha多樣性分析

根據(jù)97%相似性水平下的OTU信息，采用Alpha多樣性指標(biāo)的Shannon、Simpson、ACE、Chao1及Coverage指數(shù)對(duì)樣品微生物物種的豐富度和多樣性進(jìn)行評(píng)估。由表2可知， 各樣品的Coverage都達(dá)到了0.999以上，即樣品文庫覆蓋率高，序列未被檢出的可能性較小，可用于樣品細(xì)菌多樣性分析。產(chǎn)地為江蘇南通呂四港的帶魚樣品的ACE、Chao1及Shannon指數(shù)在冷藏第4天時(shí)達(dá)到最高，Simpson值最低，這說明該產(chǎn)地帶魚在冷藏4 d后物種豐富度達(dá)到最高，可能由于此時(shí)帶魚中營養(yǎng)物質(zhì)最為豐富，細(xì)菌生長迅速。而浙江舟山產(chǎn)地的帶魚樣品的ACE、Chao1及Shannon指數(shù)在冷藏2 d時(shí)達(dá)到最高，冷藏6 d時(shí)，ACE、Chao1及Shannon指數(shù)略有回升，這現(xiàn)象可能是由腐敗菌的大量增加造成的。冷藏8 d時(shí)，兩種產(chǎn)地來源的帶魚樣品的ACE、Chao1及Shannon指數(shù)均達(dá)到其最小值，Simpson值則剛好相反，這說明了在冷藏8 d后，帶魚樣品中的細(xì)菌豐度及多樣性最低。

表2 Alpha多樣性指數(shù)Table 2 Alpha diversity index

2.3 不同產(chǎn)地帶魚冷藏過程中細(xì)菌群落結(jié)構(gòu)分析

2.3.1 基于門水平的細(xì)菌菌群結(jié)構(gòu)分析

圖3 基于門分類水平上的樣品菌群分布圖Fig. 3 Bacterial distribution pattern at the phylum level

兩種產(chǎn)地帶魚樣本序列經(jīng)RDP classifier軟件進(jìn)行分類分析，在門水平上，其樣本群落組成如圖3所示。產(chǎn)自江蘇南通呂四港的新鮮帶魚樣品總細(xì)菌組成主要由變形菌門（Proteobacteria）、厚壁菌門（Firmicutes）、異常球菌-棲熱菌門（Deinococcus-Thermus）及擬桿菌門（Bacteroidetes）組成，相對(duì)豐度分別為53.06%、12.64%、24.29%及7.51%，還包括少量的梭桿菌門（Fusobacteria）及放線菌門（Actinobacteria）。而產(chǎn)自浙江舟山港的新鮮帶魚樣品總細(xì)菌組成主要以變形菌門與厚壁菌門為主，占據(jù)菌群總量的94.98%，余下5.02%為異常球菌-棲熱菌門、擬桿菌門、梭桿菌門、放線菌門與極少量的其他門類。

在兩種產(chǎn)地的帶魚樣品整個(gè)冷藏過程期間，變形菌門始終占據(jù)優(yōu)勢(shì)，相對(duì)豐度為49.72%～98.84%，尤其是在冷藏后期，樣品HH8與DH8中，變形菌門相對(duì)豐度皆在94%以上。其次是厚壁菌門，在江蘇南通呂四港產(chǎn)地的帶魚樣品中，第6天時(shí)，厚壁菌門相對(duì)豐度達(dá)到最高為38.39%，說明隨著冷藏時(shí)間延長，厚壁菌門對(duì)帶魚的腐敗變質(zhì)起了越來越大的影響，其影響程度僅次于變形菌門。在兩種產(chǎn)地的帶魚樣品中，冷藏第2天，擬桿菌門的相對(duì)豐度皆有所增加，在樣品HH2與DH2中產(chǎn)自最高可達(dá)到16.90%與15.01%，且隨著冷藏時(shí)間的延長，擬桿菌門所占比例逐漸下降，直至冷藏第8天相對(duì)豐度已不足1%，說明擬桿菌門在帶魚腐敗變質(zhì)中并不是主要成因。

另外，兩種不同產(chǎn)地帶魚樣品之間菌落結(jié)構(gòu)的主要差異為異常球菌-棲熱菌門。產(chǎn)自浙江舟山港的帶魚樣品在冷藏第0、2、6天時(shí)檢出異常球菌-棲熱菌門，其相對(duì)豐度分別為1.76%、11.61%和1.03%，而產(chǎn)自江蘇南通呂四港的帶魚樣品在冷藏0～4 d時(shí)都能檢出異常球菌-棲熱菌門，新鮮樣品中相對(duì)豐度最高達(dá)到了24.29%。

2.3.2 基于屬水平的細(xì)菌菌群結(jié)構(gòu)分析

在屬水平上，兩種不同產(chǎn)地的帶魚樣品在冷藏期間共分離得到了129 屬，圖4為相對(duì)豐度大于1%的菌群柱狀分布圖。嗜冷菌屬（Psychrobacter）一直占據(jù)優(yōu)勢(shì)，在兩種帶魚冷藏期間豐度呈上升趨勢(shì)，冷藏8 d后，在江蘇南通及浙江舟山產(chǎn)地帶魚樣品中，嗜冷菌屬微生物相對(duì)豐度分別達(dá)到了微生物總量的65.69%和55.88%，在帶魚腐敗變質(zhì)中起重要作用?，F(xiàn)有研究報(bào)道，嗜冷菌屬是低溫冷藏食品的優(yōu)勢(shì)腐敗菌，在牛奶、冷鮮肉及需冷藏海產(chǎn)品中都十分常見[24-26]。次要優(yōu)勢(shì)菌屬為Oceanisphaera，此菌屬首次報(bào)道于2003年，是分離自海底淤泥中的較為新型的菌屬[27]。近年來相關(guān)多集中于該菌屬新菌種的發(fā)現(xiàn)[28-29]，鮮見有研究發(fā)現(xiàn)其在水產(chǎn)品腐敗中的作用。而通過高通量測(cè)序技術(shù)檢測(cè)出Oceanisphaera是帶魚腐敗變質(zhì)的優(yōu)勢(shì)腐敗菌屬，這一研究結(jié)果說明，高通量測(cè)序技術(shù)可直接對(duì)待測(cè)樣品中全部基因序列進(jìn)行檢測(cè)，可檢測(cè)出無法培養(yǎng)的或較為新型的腐敗菌，與傳統(tǒng)分離檢測(cè)技術(shù)相比更加快速全面。

圖4 基于屬分類水平上的樣品菌群分布圖Fig. 4 Bacterial distribution pattern at the genus level

此外，兩種產(chǎn)地帶魚在冷藏期間微生物多樣性與豐度有明顯差異。產(chǎn)自江蘇南通呂四港的帶魚樣品在冷藏期間以嗜冷菌屬、棲熱菌屬（Thermus）、Oceanisphaera、肉桿菌屬（Carnobacterium）、漫游球菌屬（Vagococcus）、黃桿菌屬（Flavobacterium）、假交替單胞菌（Pseudoalteromonas）、希瓦氏菌屬（Shewanella）為主。新鮮帶魚樣品中，棲熱菌屬與假交替單胞菌所占比例僅次于嗜冷菌屬，相對(duì)豐度分別為24.29%和17.96%。冷藏第2天后，假交替單胞菌相對(duì)豐度驟降至2.54%。冷藏第6天時(shí)，肉桿菌屬與漫游球菌屬含量明顯增加，相對(duì)豐度分別達(dá)到16.08%與15.09%。這兩屬在進(jìn)化關(guān)系上十分相近，是水產(chǎn)品的重要致病菌、腐敗菌[30-31]。冷藏第8天時(shí)，相對(duì)豐度大于10%的僅有嗜冷菌屬及Oceanisphaera兩菌屬，且此時(shí)微生物豐度及多樣性達(dá)到最低值，即帶魚樣品中的營養(yǎng)物質(zhì)被極大的消耗，多數(shù)微生物已無法生存。

而產(chǎn)自浙江舟山港的帶魚樣品在冷藏期間以嗜冷菌屬、希瓦氏菌屬、假單胞菌屬（Pseudomonas）、Oceanisphaera、黃桿菌屬、臺(tái)灣溫單胞菌屬（Tepidimonas）、漫游球菌屬、米勒氏菌屬（Moellerella）為主。新鮮帶魚樣品中，嗜冷菌屬、希瓦氏菌屬、假單胞菌屬、漫游球菌屬、米勒氏菌屬、丹毒桿茵屬（Erysipelothrix）、摩根菌屬（Morganella）7 種菌屬的相對(duì)豐度相差不大，均為10%左右。其中米勒氏菌屬占最大比例為15.07%。冷藏2 d時(shí)，優(yōu)勢(shì)微生物種類有較大改變，黃桿菌屬、臺(tái)灣溫單胞菌屬、棲熱菌屬豐度提升，皆超出總微生物的10%。冷藏4～8 d時(shí)，嗜冷菌屬、希瓦氏菌屬、假單胞菌屬、Oceanisphaera占絕對(duì)優(yōu)勢(shì)，帶魚腐敗已基本結(jié)束，菌群組成變化較小，這4 類菌屬在其腐敗過程中起到了不容忽視的作用。藍(lán)蔚青等[9,32]通過PCR-DGGE技術(shù)研究冷藏過程中帶魚的菌相變化時(shí)發(fā)現(xiàn)，嗜冷桿菌在前期亦是帶魚的優(yōu)勢(shì)腐敗菌，與本研究結(jié)果不同的是，到腐敗后期，希瓦氏菌屬和弧菌屬取代了嗜冷桿菌，占據(jù)優(yōu)勢(shì)地位。

此外，優(yōu)勢(shì)菌的比例與細(xì)菌總量呈正相關(guān)，在一定程度上反映樣品在貯藏過程中腐敗變質(zhì)的情況。之前的實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，帶魚在4 ℃的貯藏過程中，菌落總數(shù)保持增長趨勢(shì)。江蘇南通呂四港的帶魚在貯藏2 d時(shí)，菌落總數(shù)已接近國標(biāo)限量6（lg（CFU/g）），浙江舟山的帶魚在貯藏4 d時(shí)，也超過了這一限量。高通量測(cè)序的結(jié)果顯示，江蘇南通和浙江舟山的帶魚樣品主要腐敗菌嗜冷桿菌、Oceanisphaera和希瓦氏菌等也分別在第2天和第4天時(shí)呈現(xiàn)出上升趨勢(shì)。第8天時(shí)，兩個(gè)產(chǎn)地的樣品優(yōu)勢(shì)腐敗菌相對(duì)豐度超過89%，細(xì)菌總數(shù)和揮發(fā)性鹽基氮含量都遠(yuǎn)超過了國標(biāo)限量，帶魚嚴(yán)重腐敗。說明這些優(yōu)勢(shì)菌與帶魚的腐敗密切相關(guān)。

綜上所述，帶魚在冷藏期間微生物群落以嗜冷菌屬為主，兩種不同產(chǎn)地的新鮮帶魚樣品及冷藏前期的菌相差異較大，隨著冷藏時(shí)間的延長，兩者都以嗜冷菌屬及Oceanisphaera為優(yōu)勢(shì)菌屬，這與帶魚的深海生存環(huán)境及冷凍保藏的常規(guī)運(yùn)輸方式有十分重要的關(guān)系。

2.4 不同產(chǎn)地帶魚冷藏時(shí)細(xì)菌群落的主成分分析（principal component analysis，PCA）

如圖5所示，橫坐標(biāo)為PC1，其貢獻(xiàn)率為41.81%。縱坐標(biāo)為PC2，貢獻(xiàn)率為25.07%。這兩個(gè)主成分是樣品微生物群落結(jié)構(gòu)組成差異的主要因子。在PC1方向上，產(chǎn)自江蘇南通呂四港的帶魚樣品在冷藏不同時(shí)間的樣本點(diǎn)分布差異十分顯著，新鮮帶魚樣本點(diǎn)與冷藏8 d的帶魚樣本點(diǎn)處于PC1水平的兩個(gè)極端，且冷藏2～6 d樣本點(diǎn)分布于X軸中間，說明不同冷藏時(shí)間在PC1水平上對(duì)樣品菌群結(jié)構(gòu)變化影響顯著；在PC2水平上，兩種產(chǎn)地的樣品點(diǎn)分布區(qū)域十分明顯，江蘇南通呂四港產(chǎn)地樣本點(diǎn)基本上分布于Y軸的下方，浙江舟山產(chǎn)地樣本點(diǎn)分布于Y軸的上方，即PC2是解釋兩種產(chǎn)地樣品菌群結(jié)構(gòu)變化的主要成分。

圖5 樣品PCAFig. 5 PCA scatter plot of PC1 vs. PC2 for bacterial communities

3 結(jié) 論

本研究以不同產(chǎn)地的帶魚為研究對(duì)象，采用Illumina Miseq高通量測(cè)序技術(shù)分析不同冷藏時(shí)期帶魚樣品中菌群組成及變化情況。結(jié)果表明，兩種產(chǎn)地帶魚在新鮮狀態(tài)時(shí)菌相差異較大：產(chǎn)自江蘇南通呂四港的新鮮帶魚樣品以嗜冷菌屬、棲熱菌屬與假交替單胞菌為主，相對(duì)豐度分別為23.25%、24.29%和17.96%；產(chǎn)自浙江舟山港的新鮮帶魚樣品中菌群組成較為豐富，嗜冷菌屬、希瓦氏菌屬、假單胞菌屬、漫游球菌屬、米勒氏菌屬、丹毒桿茵屬、摩根菌屬7 種菌屬的相對(duì)豐度相差不大，均為10%左右。說明產(chǎn)地的區(qū)別是造成菌群組成有明顯差異的主要原因。隨著4 ℃貯藏時(shí)間的延長，帶魚腐敗程度加劇，兩個(gè)產(chǎn)地的帶魚菌種多樣性都開始下降，由于氧氣含量、溫度、競(jìng)爭(zhēng)等因素，優(yōu)勢(shì)菌數(shù)量逐漸增加變得顯著，說明優(yōu)勢(shì)菌與帶魚的腐敗有密切關(guān)系。并且兩個(gè)產(chǎn)地的菌群組成愈發(fā)相近，都以嗜冷菌屬與Oceanisphaera為優(yōu)勢(shì)腐敗菌。其中嗜冷菌屬作為主要優(yōu)勢(shì)腐敗菌在帶魚腐敗過程中起重要作用，而Oceanisphaera為帶魚腐敗中的次要優(yōu)勢(shì)腐敗菌，目前有關(guān)Oceanisphaera在水產(chǎn)品腐敗中的研究尚鮮見報(bào)道。由此可見，相對(duì)于傳統(tǒng)的分離鑒定方法，高通量測(cè)序技術(shù)在檢測(cè)新型腐敗菌時(shí)更具優(yōu)勢(shì)。高通量測(cè)序技術(shù)檢測(cè)不同產(chǎn)地帶魚冷藏過程中微生物多樣性的變化，不僅可以分析不同產(chǎn)地帶魚樣品中微生物多樣性的差異，更可以高效快速地分析帶魚腐敗過程中的優(yōu)勢(shì)腐敗菌，為今后帶魚質(zhì)量安全監(jiān)測(cè)及靶向研究帶魚防腐保鮮技術(shù)提供理論依據(jù)。