高效液相色譜法測定禽蛋中蘇丹紅殘留量

◎ 苗 翠

（遼寧省獸藥飼料畜產(chǎn)品質(zhì)量安全檢測中心，遼寧 沈陽 110016）

蘇丹紅是一種人工合成的偶氮類、油溶性化工染色劑，在食品中使用具有增色的作用。蘇丹紅有Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ共4種，經(jīng)毒理學研究表明，其具有造成人類肝臟細胞的DNA突變，具有致癌致突變的特性[1-2]，在我國禁止使用于食品中。由于在目前有不法養(yǎng)殖戶為謀取利益在蛋禽飼養(yǎng)中違法添加，導致禽蛋中蘇丹紅殘留的情況時有發(fā)生，自2005年起，類似肯德基、亨氏等一些大食品企業(yè)在北京、浙江等多省市均出現(xiàn)過蘇丹紅事件。北京市場上也曾出現(xiàn)“紅心鴨蛋事件”，據(jù)報道這些紅心鴨蛋是由于鴨農(nóng)在飼料中加入蘇丹紅Ⅳ造成的[3]。

目前，針對禽蛋中蘇丹紅殘留量檢測尚無明確的檢測標準，在監(jiān)管過程中多依據(jù)國標GB/T 19681-2005《食品中蘇丹紅染料的檢測方法 高效液相色譜法》實施檢測[4-5]，但該準標對于禽蛋檢測中的陽性樣品確證的準確性不足，存在一定風險，難以滿足禽蛋中蘇丹紅殘留量檢測，本文研究建立了一種采用SDR專用固相萃取柱，回收率高、快捷、靈敏和穩(wěn)定的適用于禽蛋中蘇丹紅殘留的檢測方法，為監(jiān)管提供了有力技術(shù)支持。

1 材料與方法

1.1 儀器與試劑

Agilent1100高效液相色譜儀；紫外測器；色譜柱：Athena C18-WP液相色譜柱4.6×150 mm，5 μm；Mettler NE260分析天平；Therom Biofuge離心機；J.Tbaker ASEMD 60固相萃取裝置；Buchi V-700旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀；美國Orgaomation公司N-EVAP112氮氣吹干儀；Stuart SA8渦旋混合器。

正己烷、丙酮、二氯甲烷、乙腈，均為色譜純；蘇丹紅Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ號標準品，購自Dr.Ehrenstorfer GmbH（蘇丹紅Ⅰ批號30619、蘇丹紅Ⅱ批號10615、蘇丹紅Ⅲ批號20619、蘇丹紅Ⅳ批號91102）；實驗所用雞蛋均為遼寧省獸藥飼料畜產(chǎn)品質(zhì)量安全檢測中心日常檢測樣品；實驗用水為一級水；固相萃取柱為安普公司的sudanred專用柱。

1.2 標準溶液的制備

分別取蘇丹紅Ⅰ、蘇丹紅Ⅱ、蘇丹紅Ⅲ、蘇丹紅Ⅳ對照品適量，精密稱定，加甲醇溶解配制成蘇丹紅Ⅰ、蘇丹紅Ⅱ、蘇丹紅Ⅲ、蘇丹紅Ⅳ 0.1 mg/mL對照溶液。

1.3 樣品制備

稱取煮熟的蛋黃樣品5 g于離心管中，加入10 mL正己烷勻漿5 min，3 000 r/min離心10min，吸取正己烷層，于下層中加入正己烷6 mL勻漿，離心，合并正己烷，加入5 g無水硫酸鈉脫水，過濾后待用。固相萃取小柱依次用5 mL二氯甲烷，5 mL正己烷活化，備用液過柱，5 mL正己烷淋洗，5 mL二氯甲烷洗脫，洗脫液于40 ℃下氮氣吹干，用流動相1.0 mL定容，0.22 μm濾膜過濾，上機。

1.4 色譜條件

色譜柱：Athena C18-WP液相色譜柱，4.6×150 mm，5 μm；流動相：乙腈∶水（95∶5，V∶V）；流速：1.0 mL/min；紫外檢測器：波長500 nm；柱溫：35 ℃進樣量：20 μL。結(jié)果見圖1。

圖1 蘇丹紅標準品色譜圖

2 結(jié)果與討論

2.1 檢出限和定量限的確定

按照1.3要求，?。?±0.5）g雞蛋樣品，分別制備成一系列濃度的蘇丹紅Ⅰ、蘇丹紅Ⅱ、蘇丹紅Ⅲ、蘇丹紅Ⅳ樣品，按照本方法操作進行，結(jié)果顯示5 ng/g的蘇丹紅Ⅰ、蘇丹紅Ⅱ、蘇丹紅Ⅲ、蘇丹紅Ⅳ樣品，其檢測圖譜定量離子的信噪比總能大于3以上，10 ng/g的蘇丹紅樣品，其信噪比在10以上，且其圖譜清晰，分離效果較好，所以將蘇丹紅Ⅰ、蘇丹紅Ⅱ、蘇丹紅Ⅲ、蘇丹紅Ⅳ檢出限和定量限分別定為5 ng/g和10 ng/g。

2.2 對標準曲線

分別配制蘇丹紅Ⅰ、蘇丹紅Ⅱ、蘇丹紅Ⅲ、蘇丹紅Ⅳ的 10、50、100、200、500 μg/L 和 1 000 μg/L 的標準品，上機。以標準品濃度為橫坐標，以峰面積為縱坐標繪制標準曲線。蘇丹紅Ⅰ、蘇丹紅Ⅱ、蘇丹紅Ⅲ、蘇丹紅Ⅳ的標準曲線結(jié)果見表1。

表1 蘇丹紅Ⅰ、蘇丹紅Ⅱ、蘇丹紅Ⅲ、蘇丹紅Ⅳ標準品曲線結(jié)果表

結(jié)果表明，蘇丹紅Ⅰ、蘇丹紅Ⅱ、蘇丹紅Ⅲ、蘇丹紅Ⅳ標準品曲線在10～1 000 μg/L范圍內(nèi)線性關(guān)系很好，相關(guān)系數(shù)均在0.99以上，符合確證實驗相關(guān)要求。

2.3 添加回收試驗

對分別添加20 ng/g、50 ng/g、100 ng/g蘇丹紅Ⅰ、蘇丹紅Ⅱ、蘇丹紅Ⅲ、蘇丹紅Ⅳ的雞蛋樣品進行6次平行檢測，平均回收率情況見表2。

2.4 精密度

對不同添加濃度的樣品進行檢測，其回收率和變異系數(shù)情況見表2。批間和批內(nèi)變異系數(shù)均小于15%，符合實驗室質(zhì)量控制規(guī)范相關(guān)要求。詳見表2。

表2 雞蛋中添加回收和變異系數(shù)統(tǒng)計表

2.5 準確度

通過對不同基質(zhì)進行不同濃度的添加回收試驗，測得其檢測值和真值的偏差，詳見表3。

表3 準確度統(tǒng)計結(jié)果

3 結(jié)論

本文研究應用高效液相色譜法檢測禽蛋中的蘇丹紅，前處理方法簡單快速，不需要進行國標方法中復雜的活度調(diào)節(jié)和活性測試，整個操作過程不超過1 h；耗費溶劑少，僅為國標方法的1/3；采用SDR專用固相萃取柱，提高了回收率；填補現(xiàn)行標準中無蘇丹紅在禽蛋中的殘留檢測標準的空白，為監(jiān)管提供了有力技術(shù)支持。