高欣妍，王海英*，劉志明

(1.東北林業(yè)大學 林學院，黑龍江 哈爾濱150040；2.東北林業(yè)大學 材料科學與工程學院，黑龍江 哈爾濱150040)

金銀忍冬[Loniceramaackii(Rupr.) Maxim.]，又名金銀木，為忍冬科(Caprifoliaceae)忍冬屬落葉灌木；高6 m，葉紙質(zhì)；花冠先白色，后變黃色；果實為暗紅色圓形漿果，越冬不落；花期5—6月，果熟期8—10月[1-2]。忍冬(L.japonicaThunb.)干燥花蕾，藥材商品名稱金銀花[3-5]。金銀忍冬與忍冬為同屬植物，有關(guān)金銀忍冬花蕾、果實化學成分研究較多，對其揮發(fā)性成分研究較少。金銀忍冬果實越冬不落，具有潛在的開發(fā)利用價值。蘇慧[6]研究結(jié)果表明從金銀忍冬果實中提取的環(huán)烯醚萜類總苷具有良好的保肝、降糖活性。袁升潔[7]研究結(jié)果表明金銀忍冬果實提取物中含有開環(huán)馬錢素二甲基乙縮醛(secologanin dimethylacetal)、開環(huán)馬錢素(secologanin)、7S-O-甲基莫諾苷(7S-O-methylmorroniside)、馬錢素(loganin)、開環(huán)馬錢素酸(secologanin acid)、馬錢素酸(loganic acid)、6’-O-β-D-呋喃芹糖基獐牙菜苷(6’-O-β-apiofuranosyl sweroside)。柴多武[8]研究結(jié)果表明金銀忍冬果實提取物中含有齊墩果酸，具有抗腫瘤活性。王玉莉等[9]將金銀忍冬果實提取物經(jīng)柱層析、重結(jié)晶等，鑒定了多種皂苷類化合物，分別為烏蘇醇、熊果酸乙酯、異常春藤皂苷元、常春藤皂苷元等。王廣樹等[10]進行了金銀忍冬果實中化學成分的研究。青梅等[11]采用超聲技術(shù)提取金銀忍冬果實中的綠原酸。綠原酸具有較強的抗菌、抗病毒作用，是被學者們廣泛關(guān)注的藥理成分。姬曉靈等[12]研究了寧夏生長的金銀忍冬果實中揮發(fā)性成分。李金英等[13]研究了2種忍冬果實揮發(fā)物質(zhì)組成。金銀忍冬果實具有藥理活性的化合物主要有黃酮類化合物、有機酸類化合物、三萜皂苷類化合物、環(huán)烯醚萜類化合物以及揮發(fā)油等。本實驗采用索氏提取法，正己烷為提取溶劑，結(jié)合氣相色譜-質(zhì)譜(GC-MS)技術(shù)進行金銀忍冬鮮果實提取物的成分分析，為金銀忍冬鮮果實提取物在藥用、與木醋液調(diào)配抑菌制劑的開發(fā)利用提供基礎(chǔ)數(shù)據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料、試劑和儀器

采集植物經(jīng)鑒定為忍冬科(Caprifoliaceae)忍冬屬金銀忍冬[Loniceramaackii(Rupr.) Maxim.]。金銀忍冬果實于2015年10月采自東北林業(yè)大學校園。

提取溶劑選擇提取植物天然產(chǎn)物常用溶劑正己烷，來源于天津市東麗區(qū)天大化學試劑廠，為二級品分析純(AR)。色譜分析試劑為常用試劑甲醇，天津市科密歐化學試劑有限公司生產(chǎn)，色譜純。

索氏提取裝置，定制；旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀(RE-2000A型)，鞏義市予華儀器有限責任公司。氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀(7890A-7000B型)，美國Agilent公司。

1.2 金銀忍冬鮮果實提取物的制備

采用索氏提取裝置提取金銀忍冬鮮果實，溶劑為正己烷。稱取金銀忍冬鮮果實樣品30 g，用濾紙小心包好碾碎的金銀忍冬鮮果實，并用細線扎緊后放入濾筒內(nèi)，向濾筒內(nèi)加入100 mL正己烷溶劑，使樣品完全浸沒在正己烷中。放入水浴鍋內(nèi)，連接好索氏提取裝置的各部分，接通冷凝水，( 83±2)℃水浴加熱，索氏提取4 h。采用旋轉(zhuǎn)薄膜蒸發(fā)法除去正己烷，得到金銀忍冬鮮果實提取物。稱量所得提取物質(zhì)量，計算得率。

1.3 金銀忍冬鮮果實提取物的GC-MS分析

用甲醇將金銀忍冬鮮果實提取物配制成10 mg/L的甲醇溶液，利用氣相色譜-質(zhì)譜(GC-MS)聯(lián)用儀對試樣進行分析。色譜分析條件：HP-5MS毛細管柱(30 m×0.25 mm×0.25 μm)；FID檢測器；初始溫度40 ℃(保持2 min)，以10 ℃/min的升溫速率升到280 ℃(保持2 min)；進樣口溫度250 ℃；進樣量1.0 μL；不分流，氦氣載氣，流速1 mL/min。質(zhì)譜分析條件：EI電離源，接口溫度280 ℃，離子源溫度230 ℃，電子能量70 eV，掃描范圍為30～500 u。

2 結(jié)果與分析

2.1 金銀忍冬鮮果實提取物的GC-MS分析

采用索氏提取法以正己烷為溶劑提取得到的金銀忍冬鮮果實提取物為淡黃色透明油狀液體，得率為0.77%。金銀忍冬鮮果實提取物樣品的總離子流色譜圖如圖1所示。通過面積歸一化法計算出各組分的GC含量，總GC含量76.47%的化合物被鑒定，共鑒定出13種化合物，分析結(jié)果如表1所示。

圖1 金銀忍冬鮮果實提取物的總離子流色譜圖

表1 金銀忍冬鮮果實提取物的GC-MS分析

從表1可知，金銀忍冬鮮果實提取物主要由烷烴類(35.75%)、酯類(27.34%)、酮類(10.89%)、酚類(1.76%)、醇類(0.73%)等化合物組成。GC含量最高的化合物是二十四烷(21.74%)，其次為苯甲酸-2,6-雙[(三甲基甲硅烷)氧基]-三甲基甲硅烷酯(13.06%)，也稱為三甲基甲硅烷醇三硅甲烷氧基水楊酯。2,4-雙(1,1-二甲基乙基)-苯酚(1.76%)，也稱為2,4-二叔丁基苯酚，為抗氧化劑的重要中間體。周寶利等[14]研究結(jié)果表明2,4-二叔丁基苯酚對番茄植株及葉霉病具有調(diào)控作用，0.1 mmol/L為田間施加最適濃度。王再強等[15]研究結(jié)果表明2,4-二叔丁基苯酚對秀麗隱桿線蟲有較好毒殺作用。張玉[16]研究結(jié)果表明叔丁基對苯二酚(TBHQ)、茶多酚(TP)、維生素E(VE)、吡咯喹啉醌(PQQ)、葡萄原花青素(GPC)5種抗氧化劑，總抗氧化能力和清除DPPH自由基能力均表現(xiàn)為TP>GPC>TBHQ>VE。范琛[17]研究結(jié)果表明維生素C抗氧化活性高于維生素E。金銀忍冬鮮果實提取物以及與木醋液的抗氧化活性、抑菌活性、殺蟲活性等生物活性比較，有待進一步研究。

2.2 金銀忍冬果實提取物的揮發(fā)性成分及應(yīng)用

姬曉靈等[12]研究了寧夏生長的金銀忍冬干果實中揮發(fā)性成分。乙醚為提取溶劑,氣相色譜-質(zhì)譜(GC-MS)分析金銀忍冬干果實乙醚索氏提取物揮發(fā)性成分。色譜峰面積歸一化法計算了各成分的GC含量。共鑒定出32種化合物，主要由烷烴類、酯類、酮類、醇類、有機酸類、皂苷類、醚類、酚類、烯烴類等化合物組成，其中GC含量最高的化合物是甲基己基過氧化氫(1.31%)。李金英等[13]研究了2種忍冬果實揮發(fā)物質(zhì)組成。頂空固相微萃取 HS-SPME 裝置采集金銀忍冬鮮果實的揮發(fā)性成分，氣相色譜-質(zhì)譜(GC-MS)分析結(jié)果表明金銀忍冬鮮果實的揮發(fā)性成分主要由醛類、醇類、酮類、酯類、萜烯類、烷烴類等化合物組成，共鑒定出16種化合物，其中GC含量最高的化合物是2-己烯醛(50.74%)。金銀忍冬果實提取物因產(chǎn)地、提取方法等揮發(fā)性成分各異。新鮮樣品、風干樣品對揮發(fā)性成分種類均有影響。金銀忍冬果實提取物揮發(fā)性化合物種類，如烷烴類、酯類、酮類、醇類等為共有化合物種類。金銀忍冬果實提取物揮發(fā)性成分的提取工藝優(yōu)化，有待進一步研究。

3 結(jié) 論

以正己烷為溶劑，采用索氏提取法提取金銀忍冬鮮果實中活性組分，通過氣相色譜-質(zhì)譜(GC-MS)分析其揮發(fā)性成分。GC-MS分析結(jié)果表明金銀忍冬鮮果實提取物主要由烷烴類(35.75%)、酯類(27.34%)、酮類(10.89%)、酚類(1.76%)、醇類(0.73%)等化合物組成。GC含量最高的化合物是二十四烷(21.74%)，其次為苯甲酸-2,6-雙[(三甲基甲硅烷)氧基]-三甲基甲硅烷酯(13.06%)，也稱為三甲基甲硅烷醇三硅甲烷氧基水楊酯。2,4-雙(1,1-二甲基乙基)-苯酚(1.76%)，也稱為2,4-二叔丁基苯酚，為抗氧化劑的重要中間體，具有抑菌、殺蟲等生物活性。