張?jiān)姄P(yáng),吳 婷

(黑龍江省牡丹江市醫(yī)學(xué)院附屬二院口腔科,牡丹江 157000;*通訊作者,E-mail:185771392@qq.com)

1 材料與方法

1.1 一般資料及研究分組

選取2015-06～2017-01在牡丹江市醫(yī)學(xué)院附屬二院口腔科接受正畸治療的患者,共30例。所有患者均為安氏錯(cuò)畸形,年齡16-33歲,平均(23.8±4.54)歲。接受舌側(cè)組的15人中,男性8人、女性7人;接受唇側(cè)組的15人中,男性6人、女性9人。本研究經(jīng)過(guò)牡丹江市醫(yī)學(xué)院附屬二院倫理委員會(huì)審核批準(zhǔn)。所有參與研究患者均簽署知情同意書。所有患者納入及排除標(biāo)準(zhǔn)如下:①身體健康,無(wú)糖尿病心血管病等其他系統(tǒng)疾病;②口內(nèi)余留牙至少為24顆,其中除智齒外應(yīng)有磨牙8顆;③牙周健康,口腔衛(wèi)生良好,患者依從性好;④開(kāi)口度及開(kāi)口型均正常;⑤前牙無(wú)修復(fù)體治療;⑥無(wú)長(zhǎng)期服用激素、抗菌藥物史;⑦女性患者不處于妊娠期或哺乳期。

所有納入試驗(yàn)的患者均進(jìn)行口腔衛(wèi)生宣教,掌握正確刷牙方法即改良BASS法,使用正畸牙刷及牙間隙刷,每次進(jìn)食后均要刷牙,每次刷牙不少于3 min。試驗(yàn)期間不使用漱口水及抗生素。試驗(yàn)前2周進(jìn)行牙周潔治,并讓患者按照宣教維持好口腔衛(wèi)生。在安裝固定矯治器前及安裝后第3,6個(gè)月進(jìn)行牙周相關(guān)檢查。

1.2 牙周檢查

1.2.1 牙周檢查 由同1名經(jīng)過(guò)培訓(xùn)牙周專業(yè)醫(yī)師進(jìn)行牙周檢查,檢查的牙位為16,11,31,46。檢查每個(gè)牙位的牙齦指數(shù)(gingival index,GI)、探診出血指數(shù)(bleeding index,BI),及牙周探診深度(pocket depth,PD)。每位患者的4顆牙的牙周指數(shù)的平均值即為此病例的各項(xiàng)指數(shù)值

GI:牙齦健康計(jì)0分;牙齦顏色輕度改變及輕度水腫,探診不出血計(jì)1分;牙齦紅腫,探診出血計(jì)2分;牙齦紅腫,有自動(dòng)出血傾向計(jì)3分。

BI:牙齦及齦乳頭健康,探診不出血計(jì)0分;牙齦緣有輕度炎癥,探診不出血計(jì)1分;牙齦呈輕度炎癥,探診點(diǎn)狀出血計(jì)2分;牙齦呈中度炎癥,探診后出血溢在齦溝內(nèi)計(jì)3分;牙齦呈重度炎癥,探診后出血溢出齦溝計(jì)4分;牙齦明顯腫脹,探診后出血或自發(fā)出血計(jì)5分。

PD:檢測(cè)牙齦緣至牙周袋或齦溝底的距離,每顆牙齒檢測(cè)6個(gè)位點(diǎn),每個(gè)位點(diǎn)檢測(cè)3次,取所有測(cè)量值的平均值即為該牙的PD值。

1.2.2 牙周細(xì)菌采集 患者均選取16,11,31,46位點(diǎn)(近中頰側(cè)、正中頰側(cè)、遠(yuǎn)中頰側(cè)、近中舌側(cè)、正中舌側(cè)和遠(yuǎn)中舌側(cè))作為齦溝液采集位點(diǎn)。使用手工刮治器去除采集位點(diǎn)的齦上菌斑及牙石,棉卷隔濕。先后用2根40號(hào)無(wú)菌紙尖插入牙周袋底20 s后取出,放入無(wú)菌1.5 ml Eppendorf管中,置-20 ℃保存。

1.2.3 細(xì)菌DNA的提取 按照廠商提供的說(shuō)明書,使用High Pure PCR Template Preparation Kit(Roche Diagnostics公司,德國(guó))試劑盒提取無(wú)菌紙尖上的DNA,置-20 ℃保存,待檢。

1.2.4 real time-PCR檢測(cè)牙周細(xì)菌樣本DNA 將提取的樣本DNA采用real time-PCR檢測(cè)方法檢測(cè)放線伴放線桿菌(A.actinomycetemcomitans,Aa),牙齦卟啉單胞菌(P.gingivalis,Pg),中間普氏菌(P.intermedia,Pi),福賽斯坦納菌(T.forsythia,Tf)和齒垢密螺旋體(T.denticola,Td)。根據(jù)細(xì)菌16S rDNA基因特異保守區(qū)域,使用primer premier 5.0軟件(primer公司,加拿大)設(shè)計(jì)特異性引物,引物序列見(jiàn)表1,引物序列均由生工生物工程(上海)公司合成。

表1 Real time-PCR所用的引物序列Table 1 Primer sequences used in real time-PCR

real time-PCR反應(yīng)使用SYBR?Fast qPCR Mix試劑盒(Takara生物,大連)按照試劑盒生產(chǎn)商的說(shuō)明書配制反應(yīng)體系,使用ABI 7300實(shí)時(shí)熒光定量PCR系統(tǒng)(Applied Biosystems,美國(guó))進(jìn)行real time-PCR反應(yīng)。反應(yīng)條件:預(yù)變性95 ℃ 30 s;PCR反應(yīng)95 ℃ 5 s,60 ℃ 13 s,40個(gè)循環(huán);繪制溶解曲線(見(jiàn)圖1,2)。每個(gè)樣本均重復(fù)檢測(cè)3次,取平均值。

牙周細(xì)菌包括放線伴放線桿菌、牙齦卟啉單胞菌、中間普氏菌、福賽斯坦納菌、齒垢密螺旋體

1.3 統(tǒng)計(jì)方法

牙周細(xì)菌包括放線伴放線桿菌、牙齦卟啉單胞菌、中間普氏菌、福賽斯坦納菌、齒垢密螺旋體

2 結(jié)果

2.1 取樣位點(diǎn)臨床指標(biāo)比較

納入研究的舌側(cè)組平均年齡(35.96±10.69)歲,唇側(cè)組的平均年齡(38.52±11.02)歲,兩組差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05);舌側(cè)組男性 ∶女性=8 ∶7,唇側(cè)組男性 ∶女性=9 ∶6,兩組差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。兩組人群取樣點(diǎn)的臨床指標(biāo)見(jiàn)表2。相比矯治前，舌側(cè)組、唇側(cè)組在矯治后3，6個(gè)月時(shí)PD、GI、BI值均增高，在矯治3，6個(gè)月時(shí),舌側(cè)組和唇側(cè)組間PD差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05);舌側(cè)組和唇側(cè)組間GI值差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05);而B(niǎo)I值在矯治3個(gè)月時(shí)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),在6個(gè)月時(shí)舌側(cè)組和唇側(cè)組差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。

表2 兩組取樣位點(diǎn)PD、GI和BI的比較Table 2 Comparison of PD, GI and BI at sampling sites between two groups

2.2 實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)細(xì)菌結(jié)果

矯治3和6個(gè)月時(shí),舌側(cè)組和唇側(cè)組中Pg,Pi,Tf和Td的表達(dá)較矯治前明顯升高(P<0.05,見(jiàn)表3)。在矯治3個(gè)月和6個(gè)月時(shí),舌側(cè)組與唇側(cè)組Pi值差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05);在矯治3個(gè)月和6個(gè)月時(shí),舌側(cè)組與唇側(cè)組的Pg值差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05);在矯治3個(gè)月和6個(gè)月時(shí),舌側(cè)組與唇側(cè)組的Td值差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05,見(jiàn)表3)。而Tf在各時(shí)間點(diǎn)舌側(cè)組與唇側(cè)組間差異均不具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05,見(jiàn)表3)。

表3 實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)牙周細(xì)菌Aa、Pg、Pi、Tf和Td的表達(dá)Table 3 Expression of Aa, Pg, Pi, Tf and Td in periodontal bacteria by real-time fluorescence quantitative PCR

3 討論

舌側(cè)固定矯治是一種將正畸托槽粘結(jié)在舌側(cè)的新型正畸手段,具有支抗強(qiáng)、易于打開(kāi)咬合、隱形美觀的特點(diǎn),受到正畸醫(yī)師及成年患者的青睞[4,5]。牙周健康是正畸過(guò)程中的重要問(wèn)題,正畸過(guò)程中的生物力學(xué)刺激以及矯治器的機(jī)械、化學(xué)刺激可以引起牙齦腫脹和探診出血等牙周組織炎癥性改變,嚴(yán)重者甚至可以導(dǎo)致矯正失敗[6-8]。

固定矯治器影響了牙齒的自潔功能,不利于口腔衛(wèi)生的維護(hù),再加上正畸過(guò)程中的生物力學(xué)刺激,極易引起牙周組織的炎癥改變。本研究結(jié)果顯示,在開(kāi)始矯正后第3個(gè)月及第6個(gè)月,舌側(cè)及唇側(cè)固定矯治的各項(xiàng)牙周臨床指標(biāo)(PD、GI和BI)均有不同程度的升高,并且多項(xiàng)指標(biāo)顯示舌側(cè)的值高于唇側(cè),表明固定矯治對(duì)牙周健康有不良影響,并且舌側(cè)固定矯治對(duì)牙周健康的影響更為明顯。而白曉東等[9]的試驗(yàn)結(jié)果顯示舌側(cè)正畸對(duì)牙周狀況無(wú)明顯影響,與本研究的結(jié)論不一致,這可能是由于選擇的觀測(cè)時(shí)間點(diǎn)不同所造成。

牙周致病菌(Aa、Pg、Pi、Tf和Td)在牙周炎的發(fā)生發(fā)展中起重要作用,檢測(cè)牙周致病菌的表達(dá)量對(duì)牙周健康評(píng)價(jià)有重要意義[10,11]?，F(xiàn)有的相關(guān)研究表明,Pg是慢性牙周炎中的優(yōu)勢(shì)菌,其在正常人中也可以檢出,有證據(jù)表明為條件致病菌[12,13];Pi通過(guò)直接侵襲口腔組織細(xì)胞促進(jìn)炎性因子的釋放、干擾宿主免疫反應(yīng)和抑制骨形成促進(jìn)骨吸收等作用而參與牙周炎的發(fā)生發(fā)展[14,15];Td在深牙周袋中檢出較高,與牙槽骨吸收有關(guān)。本研究結(jié)果顯示矯治3,6個(gè)月時(shí)Pg、Pi、Tf和Td均有不同程度的增高,并且舌側(cè)組的Pg、Pi、Td的表達(dá)量要高于唇側(cè)組。Lombardo等[16]的研究結(jié)果與本研究相一致,認(rèn)為舌側(cè)矯治患者的口腔內(nèi)微生物的表達(dá)水平會(huì)升高。這表明采用舌側(cè)矯治的患者未來(lái)發(fā)生牙周炎的機(jī)率可能要高于唇側(cè)正畸患者。舌側(cè)固定矯治器結(jié)構(gòu)復(fù)雜,舌側(cè)固定矯治的患者,因矯治器位于牙齒舌側(cè),口腔衛(wèi)生難以徹底維護(hù),故多種口腔衛(wèi)生措施應(yīng)聯(lián)合使用,更好地清除牙菌斑,控制牙齦炎。矯治器對(duì)牙周組織影響是客觀存在的,維護(hù)牙周健康的關(guān)鍵是控制菌斑。控制牙菌斑的有效方法是應(yīng)用藥物和機(jī)械清除。諸多研究表明[17-19],應(yīng)用氯己定液漱口配合含氟牙膏,患者菌斑指數(shù)、牙齦指數(shù)明顯下降,口腔衛(wèi)生狀況顯著改善。

舌側(cè)固定矯治雖然能起到隱形矯治的效果,但位于舌側(cè)的矯治器給清潔帶來(lái)困難,本研究結(jié)果顯示舌側(cè)矯治對(duì)牙周健康的影響要高于唇側(cè)矯治的影響。而陶李明等[20]認(rèn)為舌側(cè)正畸與唇側(cè)正畸矯治結(jié)束后對(duì)牙周健康影響無(wú)顯著差異,但其仍指出在舌側(cè)矯治過(guò)程中PLI指數(shù)升高需要重視。因此,對(duì)于舌側(cè)固定矯治的患者,維護(hù)口腔衛(wèi)生、有效地維持牙周組織健康是臨床正畸工作的重中之重。本研究設(shè)定的隨訪時(shí)間比較短,在后繼研究項(xiàng)目中,我們會(huì)注意將隨訪時(shí)間盡量延長(zhǎng)。