李 漠 董雪玉* 鞏文洋 楊 柳 牛一兵 李 永 張貴賢 王夕國 鞏元芳 馮敏山,** 李素芬**

(1.河北科技師范學(xué)院，秦皇島066004；2.河北省碣石皮毛產(chǎn)業(yè)研究院，昌黎066600；3.河北省秦皇島市三晶新農(nóng)飼料有限公司，昌黎066600)

烏蘇里貉是原產(chǎn)于我國的珍貴毛皮動(dòng)物，養(yǎng)殖數(shù)量達(dá)4 000萬只。我國是世界貉皮的主要生產(chǎn)國，河北省貉皮產(chǎn)量占全國的1/2以上，昌黎縣更是被中國農(nóng)學(xué)會(huì)命名為“中國養(yǎng)貉之鄉(xiāng)”和“中國皮毛產(chǎn)業(yè)化基地”。早期研究認(rèn)為，生長期貉飼糧粗蛋白質(zhì)水平需要達(dá)到32%～36%才能獲得理想的體重、體長及經(jīng)濟(jì)效益[1-2]。隨著合成賴氨酸和蛋氨酸等氨基酸在飼糧配合中的廣泛應(yīng)用，低蛋白質(zhì)平衡飼糧已成為降低氮排放的重要措施。Zhang等[3]報(bào)道，飼糧粗蛋白質(zhì)水平為24%且其賴氨酸和蛋氨酸含量與粗蛋白質(zhì)水平為30%時(shí)相等，生長期貉的生長性能未受到顯著影響，且可降低氮排放。由此可知，通過平衡飼糧中多種氨基酸進(jìn)一步降低貉飼糧中的粗蛋白質(zhì)水平是可行的。已有研究發(fā)現(xiàn)，在飼糧中添加脂肪可提高藍(lán)狐[4]和水貂[5]平均日增重，降低料重比，但關(guān)于貉脂肪營養(yǎng)的研究報(bào)道較少。鑒于此，本試驗(yàn)在添加賴氨酸、蛋氨酸和蘇氨酸的飼糧中設(shè)定不同的粗蛋白質(zhì)和粗脂肪水平，研究飼糧粗蛋白質(zhì)和粗脂肪水平對(duì)生長期貉生長性能、血清生化指標(biāo)及游離氨基酸含量的影響，旨在為生長期貉飼糧的配制提供科學(xué)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)設(shè)計(jì)

采用3×3完全隨機(jī)設(shè)計(jì)，設(shè)定3個(gè)粗蛋白質(zhì)水平分別為22%、24%和26%，3個(gè)粗脂肪水平分別為7.5%、9.5%和11.5%，共設(shè)計(jì)出9種試驗(yàn)飼糧。

1.2 試驗(yàn)動(dòng)物與飼糧

本試驗(yàn)于2017年7月26日購入體重相近的11周齡健康公貉63只，隨機(jī)分為9組，每組7只，單籠飼養(yǎng)，每籠為1個(gè)重復(fù)。預(yù)試6 d后，于2017年8月1日開始正式試驗(yàn)[初始體重(3.06±0.16) kg]，2017年9月25日結(jié)束，正試期56 d。

參照劉鳳華等[6]確定的生長期貉飼糧賴氨酸和蛋氨酸需要量，以及粗蛋白質(zhì)水平為26%的飼糧中蘇氨酸含量，配制賴氨酸、含硫氨基酸和蘇氨酸含量均相等的試驗(yàn)飼糧。試驗(yàn)飼糧組成及營養(yǎng)水平見表1。由于目前尚無貉飼料原料的能值數(shù)據(jù)，鑒于貉的食性和消化道的特點(diǎn)與豬相似，表1中代謝能為參照《中國飼料營養(yǎng)成分及營養(yǎng)價(jià)值表(2017年第28版)》[7]中豬代謝能所得計(jì)算值。

表1 試驗(yàn)飼糧組成及營養(yǎng)水平(飼喂基礎(chǔ))

1)預(yù)混料為每千克飼糧提供The premix provided the following per kg of diets：VA 6 000 IU，VD31 300 IU，VE 30.0 mg，VK 3.4 mg，VB13.0 mg，VB24.6 mg，VB61.8 mg，VB120.04 mg，葉酸 folic acid 0.5 mg，煙酸 niacin 20 mg，泛酸 pantothenic acid 15 mg，生物素 biotin 0.42 mg，氯化膽堿 choline chloride 0.60 mg，VC 90 mg，F(xiàn)e 38 mg，Zn 32 mg，Mn 16 mg，I 0.5 mg，Se 0.1 mg，Cu 5 mg。

2)代謝能為計(jì)算值，其他營養(yǎng)水平為實(shí)測(cè)值。ME was a calculated value, while the other nutrient levels were measured values.

1.3 飼養(yǎng)管理

試驗(yàn)期間以貉自由采食為原則，每天按只稱料，按照料水比為1∶3加水?dāng)嚢杈鶆?，每?8：00、15：00各飼喂1次，同時(shí)確保充足飲水，自然光照，定期清潔衛(wèi)生。試驗(yàn)結(jié)束時(shí)稱重，計(jì)算平均日增重、平均日采食量及料重比。

1.4 樣品采集與制備

試驗(yàn)結(jié)束后于貉后肢靜脈采血10 mL，4 000 r/min離心10 min制備血清，-20 ℃保存，以備分析血清生化指標(biāo)和游離氨基酸含量。

1.5 指標(biāo)測(cè)定

飼糧粗蛋白質(zhì)水平參照GB/T 6432—1994凱氏定氮法測(cè)定，粗脂肪水平參照GB/T 6433—2006索氏抽提法測(cè)定。參照GB/T 18246—2000采用酸水解法和氧化水解法處理飼糧樣品后，采用氨基酸自動(dòng)分析儀(Hitachi L-8900，Tokyo，日本)測(cè)定賴氨酸、蛋氨酸、半胱氨酸和蘇氨酸含量。

采用日立7600全自動(dòng)生化儀測(cè)定血清甘油三酯(TG)、總膽固醇(TC)、高密度脂蛋白膽固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)、葡萄糖(GLU)、白蛋白(ALB)、球蛋白(GLB)、總蛋白(TP)和尿素氮(UN)含量。

采用Wu等[8]報(bào)道的高效液相色譜法測(cè)定血清中游離氨基酸含量。取100 μL血清放入1.5 mL EP管中，加入200 μL 1.5 mol/L的HClO4，充分混勻后靜置15 min，之后加入100 μL 2 mol/L的K2CO3，在4 ℃、≥15 000×g條件下離心10 min，取上清，采樣高效液相色譜儀(Model 600E with 2475 Multi-λ，Waters Inc.,美國)測(cè)定游離氨基酸含量。上機(jī)測(cè)定體系為50 μL樣品+50 μL苯甲酸鈉+700 μL雙蒸水。

1.6 數(shù)據(jù)處理與分析

采用SAS 6.12軟件中的ANOVA過程對(duì)所有試驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行雙因素方差分析。每個(gè)重復(fù)為1個(gè)試驗(yàn)單元。方差分析差異顯著者，以LSD法比較平均值間的差異顯著性。以P<0.05作為差異顯著性判斷標(biāo)準(zhǔn)。

2 結(jié)果與分析

2.1 飼糧粗蛋白質(zhì)和粗脂肪水平對(duì)生長期貉生長性能的影響

由表2可知，飼糧粗蛋白質(zhì)與粗脂肪水平的交互作用及粗蛋白質(zhì)水平對(duì)生長期貉各生長性能指標(biāo)均無顯著影響(P>0.05)。飼糧粗脂肪水平顯著影響生長期貉的末重、平均日增重和料重比(P<0.05)，其中粗脂肪水平為9.5%和11.5%組的平均日增重顯著高于粗脂肪水平為7.5%組(P<0.05)，料重比則隨粗脂肪水平的升高而顯著降低(P<0.05)。

表2 飼糧粗蛋白質(zhì)和粗脂肪水平對(duì)生長期貉生長性能的影響

續(xù)表2項(xiàng)目 Items始重 IBW/kg末重 FBW/kg平均日采食量 ADFI/g平均日增重 ADG/g料重比 F/G粗脂肪 EE/%7.53.05±0.146.58±0.42b225±1362.93±6.67b3.60±0.21a9.53.02±0.176.76±0.40ab225±1266.75±6.22a3.38±0.20b11.53.09±0.166.92±0.23a222±768.32±5.11a3.27±0.19cP值 P-value粗蛋白質(zhì) CP0.8900.9210.7790.8150.807粗脂肪 EE0.4230.0170.6830.018<0.001粗蛋白質(zhì)×粗脂肪CP×EE0.8510.4860.4490.3820.248

同列數(shù)據(jù)肩標(biāo)無字母或字母相同者表示差異不顯著(P>0.05)，字母不同者表示差異顯著(P<0.05)。下表同。

Values in the same column with no letter or the same letter superscripts mean no significant difference (P>0.05), while with different letter superscripts mean significant difference (P<0.05). The same as below.

2.2 飼糧粗蛋白質(zhì)和粗脂肪水平對(duì)生長期貉血清生化指標(biāo)的影響

由表3可知，飼糧粗蛋白質(zhì)與粗脂肪水平的交互作用對(duì)所測(cè)血清生化指標(biāo)均無顯著影響(P>0.05)。飼糧粗蛋白質(zhì)水平對(duì)血清TC、TG、HDL-C、LDL-C、ALB、GLB含量均無顯著影響(P>0.05)，對(duì)血清UN含量有顯著影響(P<0.05)，其中粗蛋白質(zhì)水平為26%組顯著高于粗蛋白質(zhì)水平為22%和24%組(P<0.05)，粗蛋白質(zhì)水平為22%和24%組間差異不顯著(P>0.05)。此外，血清GLU含量有受飼糧粗蛋白質(zhì)水平影響的趨勢(shì)(P=0.055)，其中粗蛋白質(zhì)水平為26%組血清GLU含量在數(shù)值上高于粗蛋白質(zhì)水平為22%和24%組(P>0.05)。飼糧粗脂肪水平對(duì)血清TC、TG、HDL-C、LDL-C、ALB、GLB、UN含量均無顯著影響(P>0.05)，對(duì)血清GLU含量有顯著影響(P<0.05)，其中粗脂肪水平為11.5%組血清GLU含量顯著低于粗脂肪水平為7.5%和9.5%組(P<0.05)，粗脂肪水平為9.5%組血清GLU含量顯著低于粗脂肪水平為7.5%組(P<0.05)，即血清GLU含量隨脂肪水平的升高顯著降低(P<0.05)。

2.3 飼糧粗蛋白質(zhì)和粗脂肪加水平對(duì)生長期貉血清游離氨基酸含量的影響

由表4可知，血清中游離蘇氨酸、蛋氨酸、賴氨酸、總必需氨基酸、總非必需氨基酸及總氨基酸含量均受飼糧粗蛋白質(zhì)水平的顯著影響(P<0.05)，且均在飼糧粗蛋白質(zhì)水平為22%時(shí)顯著高于粗蛋白質(zhì)水平為26%時(shí)(P<0.05)，同時(shí)粗蛋白質(zhì)水平為22%時(shí)血清中游離蛋氨酸和賴氨酸含量還顯著高于粗蛋白質(zhì)水平為24%時(shí)(P<0.05)。血清中游離賴氨酸含量受飼糧粗脂肪水平的顯著影響(P<0.05)，其在粗脂肪水平為7.5%時(shí)顯著高于粗脂肪水平為11.5%時(shí)(P<0.05)。試驗(yàn)所測(cè)血清中游離氨基酸含量均受飼糧粗蛋白質(zhì)與粗脂肪水平交互作用的顯著影響(P<0.05)，其中以粗蛋白質(zhì)水平為24%、粗脂肪水平為7.5%時(shí)和粗蛋白質(zhì)水平為22%、粗脂肪水平為9.5%時(shí)各項(xiàng)測(cè)定指標(biāo)數(shù)值較高。

3 討 論

3.1 飼糧粗蛋白質(zhì)和粗脂肪水平對(duì)生長期貉生長性能的影響

樸厚坤等[9]研究得出體表面積與體重有直線回歸關(guān)系，生長期獲得較大的體重可為冬毛期獲得大張幅皮張奠定基礎(chǔ)。對(duì)單胃動(dòng)物來說，飼糧中的蛋白質(zhì)是通過氨基酸發(fā)揮作用的，蛋白質(zhì)供給不足會(huì)使動(dòng)物因氨基酸缺乏而生長緩慢，但飼糧粗蛋白質(zhì)水平過高也會(huì)因氨基酸過?；虿黄胶庥绊懮L。劉鳳華等[6]報(bào)道飼糧粗蛋白質(zhì)水平為23%、含硫氨基酸含量為0.98%、賴氨酸含量為1.54%時(shí)生長期貉可獲得最大日增重。本試驗(yàn)中，飼糧不同粗蛋白質(zhì)水平的各組間生長性能指標(biāo)無顯著差異，說明在平衡賴氨酸、含硫氨酸和蘇氨酸含量的條件下下，飼糧粗蛋白質(zhì)水平為22%即可滿足生長貉體增重的需要。

表3 飼糧粗蛋白質(zhì)和粗脂肪水平對(duì)生長期貉血清生化指標(biāo)的影響

表4 飼糧粗蛋白質(zhì)和粗脂肪水平對(duì)生長期貉血清游離氨基酸含量的影響

續(xù)表4項(xiàng)目 Items游離蛋氨酸 Free Met游離賴氨酸 Free Lys游離蘇氨酸 Free Thr總游離必需氨基酸 TFEAA總非游離必需氨基酸 TFNEAA總游離氨基酸 TFAA粗蛋白質(zhì) CP/%2259.1±10.2a305±43a210±24a1 556±105a1 935±205a3 492±280a2452.9±5.2b266±52b201±20ab1 542±138a1 894±195a3 436±309a2648.6±6.2b221±34c189±29b1 387±123b1 740±232b3 127±335b粗脂肪 EE/%7.554.0±8.4280±49a205±191 538±1591 884±1533 423±2899.554.7±10.5265±72ab198±291 478±1551 794±2693 272±40511.551.8±6.6247±38b197±281 469±1081 890±2333 359±329P值P-value粗蛋白質(zhì) CP0.001<0.0010.054<0.0010.0180.003粗脂肪 EE0.5190.0480.6660.1120.3010.486粗蛋白質(zhì)×粗脂肪 CP×EE0.0730.0010.0310.0010.0110.001

耿業(yè)業(yè)等[4]研究發(fā)現(xiàn)，生長期藍(lán)狐的平均日增重隨飼糧粗脂肪水平(8%～40%)的升高而增加。張海華等[5]報(bào)道，生長期雌性水貂的體重和平均日增重隨飼糧粗脂肪水平(10%～30%)的升高而增加，料重比隨飼糧粗脂肪水平的升高而降低。本試驗(yàn)也發(fā)現(xiàn)生長期貉的平均日增重隨飼糧粗脂肪水平的升高而增加，料重比則隨飼糧粗脂肪水平的升高而降低，與上述報(bào)道相一致，進(jìn)一步驗(yàn)證了脂肪的營養(yǎng)作用。

3.2 飼糧粗蛋白質(zhì)和粗脂肪水平對(duì)生長期貉血清生化指標(biāo)的影響

鳥氨酸循環(huán)合成的血清UN作為體內(nèi)蛋白質(zhì)代謝的終產(chǎn)物，可較準(zhǔn)確地反映蛋白質(zhì)代謝或氨基酸間的平衡狀況[9]。研究發(fā)現(xiàn)，降低飼糧粗蛋白質(zhì)水平或飼糧氨基酸平衡良好時(shí)，豬血清UN含量下降[11-12]。本試驗(yàn)中飼糧粗蛋白質(zhì)水平為26%組血清UN含量顯著高于其他2個(gè)水平組，與該組血清GLU含量較高的結(jié)果相一致，說明此時(shí)多余的氨基酸經(jīng)過脫氨基作用，其中的氨基轉(zhuǎn)變成尿素，碳鏈轉(zhuǎn)變?yōu)槠咸烟?，從而造成了氨基酸的浪費(fèi)。

血液中的GLU作為機(jī)體能量的主要來源，是糖的來源和去路互相平衡的結(jié)果。雖然有研究表明飼糧粗蛋白質(zhì)[13]和粗脂肪水平[5,14]對(duì)血液中GLU含量無顯著影響，但在本試驗(yàn)中血清GLU含量隨飼糧粗脂肪水平升高而顯著降低，說明飼糧粗脂肪水平低時(shí)貉需要?jiǎng)佑锰钱惿饔脕頋M足能量的需要。飼糧粗蛋白質(zhì)水平為26%時(shí)血清GLU含量有升高趨勢(shì)，說明過剩的蛋白質(zhì)中的氨基酸通過脫氨基生成了GLU，氨基則合成了尿素，在粗蛋白質(zhì)水平為26%時(shí)血清UN含量升高也證實(shí)了這一猜測(cè)。

TG、TC、HDL-C和LDL-C構(gòu)成了血液中的脂類物質(zhì)，脂類物質(zhì)是除糖外機(jī)體賴以生存的重要供能物質(zhì)。與耿業(yè)業(yè)等[4]報(bào)道的生長期藍(lán)狐和張海華等[5]報(bào)道的生長期雄性水貂血清TG、TC、HDL-C和LDL-C含量隨飼糧粗脂肪水平的升高而增加的結(jié)果不同，本試驗(yàn)中血清脂類代謝相關(guān)指標(biāo)并未受到飼糧粗脂肪水平的顯著影響，且飼糧粗脂肪水平達(dá)到11.5%時(shí)可以降低血清GLU含量，說明貉能夠很好地利用飼糧中的脂肪，至于飼糧更高粗脂肪水平對(duì)貉脂類代謝有何影響，還有待于進(jìn)一步研究。

3.3 飼糧粗蛋白質(zhì)和粗脂肪水平對(duì)生長期貉血清游離氨基酸含量的影響

血清游離氨基酸含量在一定程度上可反映動(dòng)物體內(nèi)氨基酸的代謝狀況。血清游離氨基酸含量隨飼糧中氨基酸含量的升高而直線上升，但當(dāng)飼糧中氨基酸含量滿足動(dòng)物需要后，血清游離氨基酸含量急劇增加[12,15]。因此，血清游離氨基酸含量可作為評(píng)定飼糧中氨基酸含量是否適宜的指標(biāo)，血清中總游離氨基酸含量越高，表明氨基酸代謝效果越好。研究發(fā)現(xiàn)，在低蛋白質(zhì)飼糧中添加賴氨酸、蛋氨酸和蘇氨酸時(shí)，血清中對(duì)應(yīng)的這些游離氨基酸和總非必需氨基酸的含量隨飼糧粗蛋白質(zhì)水平的降低而增加[16]。本試驗(yàn)中，飼糧粗蛋白質(zhì)水平為24%時(shí)，血清游離賴氨酸和蛋氨酸含量顯著低于飼糧粗蛋白質(zhì)水平為22%時(shí)；飼糧粗蛋白質(zhì)水平為26%時(shí)，試驗(yàn)所測(cè)血清游離氨基酸含量均顯著低于飼糧粗蛋白質(zhì)水平為22%時(shí)，這與飼糧高粗蛋白質(zhì)水平時(shí)血清UN含量升高的結(jié)果相一致，進(jìn)一步說明26%的飼糧粗蛋白質(zhì)水平降低了氨基酸的利用率。

蛋白質(zhì)在體內(nèi)的主要用途是合成體組織，但這僅占進(jìn)食蛋白質(zhì)總量的21%，其余部分則通過脫氨基轉(zhuǎn)化為GLU或氧化供能[13]。在動(dòng)物飼糧中添加脂肪可代替部分蛋白質(zhì)分解供能，從而提高動(dòng)物對(duì)飼糧蛋白質(zhì)的利用率[5]。本試驗(yàn)中血清各游離氨基酸及總氨基酸含量均受飼糧粗蛋白質(zhì)與粗脂肪水平交互作用的顯著影響，在飼糧粗蛋白質(zhì)水平為24%、粗脂肪水平為7.5%時(shí)以及粗蛋白質(zhì)水平為22%、粗脂肪水平為9.5%時(shí)貉所測(cè)各項(xiàng)指標(biāo)的數(shù)值較高，說明通過添加外源氨基酸改善氨基酸平衡性后，降低飼糧粗蛋白質(zhì)水平并適當(dāng)提高粗脂肪水平是減少氨基酸分解、提高蛋白質(zhì)利用效率的有效措施。

4 結(jié) 論

在平衡飼糧中賴氨酸、含硫氨基酸和蘇氨酸含量的前提下，飼糧粗蛋白質(zhì)水平為22%、粗脂肪水平為9.5%時(shí)生長期貉即可獲得較好的生長性能。