白秀萍，董玉杰*

（1. 淄博市食品藥品檢驗(yàn)研究院，山東 淄博 255086；2. 山東金城生物藥業(yè)有限公司，山東 淄博 255000）

阿司匹林（aspirin）作為一種解熱鎮(zhèn)痛藥，歷史悠久，應(yīng)用廣泛。阿司匹林大多通過水楊酸?；磻?yīng)獲得，反應(yīng)中使用原料醋酐[1-2]，醋酐與水反應(yīng)可形成醋酸，可能作為副反應(yīng)雜質(zhì)存在于阿司匹林成品中。醋酸作為第三類溶劑限值為0.5%[3-4]，應(yīng)對(duì)其進(jìn)行定量分析。

1 儀器與試藥

LC-2010A 高效液相色譜儀（日本島津）；阿司匹林（山東新華制藥，批號(hào)：0702238，0702250，0702251，0702256，0702258）；甲醇（分析純，天津四友精細(xì)化學(xué)品公司）；乙醇（分析純，國(guó)藥集團(tuán)）；磷酸（分析純，國(guó)藥集團(tuán)）；冰醋酸（分析純，萊陽(yáng)經(jīng)濟(jì)技術(shù)開發(fā)區(qū)精細(xì)化工廠）。

2 方法與結(jié)果

2.1 溶液制備

2.1.1 對(duì)照品溶液的制備 精密稱取冰醋酸0.5 g（約0.5 ml）于100 ml量瓶中，用甲醇稀釋到刻度，再取以上溶液1.00 ml，用甲醇稀釋至50 ml，得100 μg/ml醋酸對(duì)照品溶液。

2.1.2 樣品溶液的制備 精密稱取阿司匹林樣品約0.2 g，用甲醇溶解并稀釋至10.0 ml。

2.2 色譜條件

色譜柱：ZORBAX SB-C18（4.6 mm×250 mm，5 μm）；梯度洗脫（方案見表1），流動(dòng)相A：pH 3.0磷酸鹽緩沖液:甲醇=950:50，流動(dòng)相B：甲醇；檢測(cè)波長(zhǎng)：210 nm；流速：1.2 ml/min；靈敏度：1.0吸收單位；進(jìn)樣量：10 μl。

表1 梯度洗脫方案

2.3 計(jì)算方法

取5份對(duì)照品溶液，連續(xù)進(jìn)樣，記錄色譜圖，主峰面積的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD）應(yīng)不大于2.0%。分別取空白溶劑（甲醇）和樣品溶液，各進(jìn)樣10μl，記錄色譜圖。外標(biāo)法計(jì)算醋酸的殘留量。計(jì)算公式如下。

式中At為樣品峰面積，Wt為樣品稱樣量，Ar為對(duì)照品峰面積，Wr為對(duì)照品稱樣量。

2.4 專屬性試驗(yàn)

用甲醇為空白溶劑，進(jìn)樣，沒有干擾峰出現(xiàn)，表明空白溶劑不干擾樣品測(cè)定；取對(duì)照品溶液，進(jìn)樣，測(cè)得主峰保留時(shí)間為3.631 min；再取阿司匹林樣品溶液進(jìn)樣，無(wú)干擾峰出現(xiàn)，證明阿司匹林樣品不影響醋酸含量的檢測(cè)。取0.2 g阿司匹林樣品，用醋酸對(duì)照品溶液稀釋至10 ml，進(jìn)樣，醋酸與阿司匹林峰主峰分辨率為21.6，表明二者不存在相互干擾，專屬性測(cè)試圖譜見圖1。

圖1 專屬性測(cè)試圖譜

2.5 系統(tǒng)適用性試驗(yàn)

取6份100 μg/ml醋酸對(duì)照品溶液，每份0.5 ml，連續(xù)進(jìn)樣，記錄色譜圖，系統(tǒng)適用性試驗(yàn)結(jié)果見表2。主峰面積的RSD小于2.0%，表明系統(tǒng)適用性試驗(yàn)符合要求。

表2 系統(tǒng)適用性試驗(yàn)結(jié)果

2.6 檢測(cè)限和定量限

取適量100 μg/ml醋酸對(duì)照品溶液，用甲醇稀釋成含醋酸5 μg/ml的測(cè)試液，取兩份，分別進(jìn)樣，記錄色譜圖，主峰高是基線噪聲峰高的10倍，確定定量限為5 μg/ml（0.025%）。同法制備含醋酸2 μg/ml的測(cè)試液，取兩份進(jìn)分別樣，得到的主峰高是基線噪聲峰高的3倍，確定檢測(cè)限為2 μg/ml（0.01%）。

2.7 線性范圍

精密稱定冰醋酸0.5 ml（0.5005 g），加入100 ml量瓶，用甲醇稀釋至刻度，再分別用甲醇稀得到含醋酸濃度分別為5，10，50，80，100，120 μg/ml的測(cè)試液。每個(gè)濃度各取兩份，分別進(jìn)樣檢測(cè)。結(jié)果表明醋酸在5～120 μg/ml濃度范圍內(nèi)線性關(guān)系良好?；貧w方程為：Y=279X-108，r=0.999 99。

2.8 準(zhǔn)確度

分別制備濃度為80，100，120 μg/ml的酸酸對(duì)照品溶液。取6份100 μg/ml醋酸對(duì)照品溶液，每份0.5 ml，連續(xù)進(jìn)樣，進(jìn)行系統(tǒng)適用性測(cè)試，符合規(guī)定后，再分別取80，100，120 μg/ml的酸酸對(duì)照品溶液各3份，分別進(jìn)樣，計(jì)算醋酸含量和回收率，結(jié)果見表3。結(jié)果表明回收率符合要求。

表3 回收率結(jié)果

2.9 中間精密度

精密稱定冰醋酸約0.5 ml（0.5012 g），不同操作者（操作者A和操作者B）分別按2.1.1項(xiàng)方法制備對(duì)照品溶液、配制流動(dòng)相，使用不同高效液相色譜儀（LC-2010A，LC-2010A HT）和不同色譜柱，在不同時(shí)間進(jìn)樣。計(jì)算所得主峰峰面積的RSD值。測(cè)定結(jié)果見表4。結(jié)果顯示，中間精密度符合要求。

表4 中間精密度測(cè)試結(jié)果

2.10 樣品測(cè)定

用驗(yàn)證的方法檢測(cè)5批阿司匹林品，結(jié)果見表5。

表5 樣品檢測(cè)結(jié)果

3 討論

原料藥中的殘留溶劑是雜質(zhì)的主要來(lái)源之一，是影響藥品安全性的關(guān)鍵項(xiàng)目之一，必須確保溶劑殘留量在可接受標(biāo)準(zhǔn)范圍內(nèi)。但中國(guó)藥典各品種項(xiàng)下均未作出具體要求，因產(chǎn)品中殘留溶劑需根據(jù)生產(chǎn)工藝中使用、產(chǎn)生或污染的溶劑類別進(jìn)行評(píng)估，再確定是否列入產(chǎn)品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，中國(guó)藥典在附錄中給出了常用溶劑的殘留限度要求，殘留溶劑的測(cè)定大多采用頂空氣相色譜分析[4]。本文探索使用HPLC檢測(cè)殘留溶劑，并通過方法學(xué)驗(yàn)證，用該方法對(duì)5批阿司匹林樣品進(jìn)行測(cè)定，結(jié)果表明該法靈敏度高、精密度好，可用于阿司匹林中醋酸殘留的測(cè)定。