百華花楸果實(shí)抗炎作用的實(shí)驗(yàn)研究

李雪梅 孫延斌 周雪 張秀萍 侯甲福 劉世娟

[摘要]目的 觀察百華花楸果實(shí)水提取液的抗炎作用。方法 將實(shí)驗(yàn)用鼠50只，隨機(jī)分為5組，每組10只，分別設(shè)為空白對(duì)照組，百花花楸小、中、大劑量組（5、10、15 g/kg）、陽(yáng)性對(duì)照組?？瞻讓?duì)照組灌胃給予0.9%氯化鈉溶液，陽(yáng)性對(duì)照組灌胃給予藥物5 g/kg。采用氨水噴霧致咳法，觀察小鼠咳嗽次數(shù)；采用2%氯化乙酰膽堿和0.1%磷酸組織胺等量混合液致豚鼠哮喘法，觀察6 min內(nèi)引喘潛伏期；采用氣管螺旋條實(shí)驗(yàn)制備豚鼠氣管螺旋條法，觀察氣管松弛情況；采用小鼠足腫脹法觀察抗炎作用。結(jié)果 百華花楸小、中、大各劑量組小鼠的咳嗽次數(shù)均少于空白對(duì)照組（P<0.05）。百華花楸小、中、大各劑量組的6 min內(nèi)引喘潛伏期均長(zhǎng)于空白對(duì)照組（P<0.05）。百華花楸小、中、大各劑量組對(duì)豚鼠氣管平滑肌的松弛率均高于空白對(duì)照組（P<0.05），百華花楸小劑量組對(duì)豚鼠氣管平滑肌的松弛率低于陽(yáng)性對(duì)照組，百華花楸中、大劑量組對(duì)豚鼠氣管平滑肌的松弛率均高于陽(yáng)性對(duì)照組（P<0.05）。百華花楸小、中、大劑量組對(duì)小鼠足腫脹的抑制程度均高于空白對(duì)照組（P<0.05）。結(jié)論 百華花楸果實(shí)水提取液具有抗炎作用。

[關(guān)鍵詞]百華花楸果實(shí)；提取；抗炎作用

[中圖分類(lèi)號(hào)] R965.2 [文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼] A [文章編號(hào)] 1674-4721（2018）11（c）-0030-04

[Abstract] Objective To observe the anti-inflammatory effect of water extract of Srobus pohuashanensis fruit. Methods A total of 50 experimental mice were randomly divided into 5 groups， and there were 10 mice in each group， namely blank control group， low， medium and high dose of Srobus pohuashanensis group （5， 10， 15 g/kg respectively） and positive control group. In the blank control group， 0.9% sodium chloride solution was intragastrically administered. In the positive control group， 5 g/kg drug was intragastrically administered. The mouse cough was induced by ammonium hydroxide spraying in order to observe the cough times of mice. The guinea pig asthma was induced by the mixture of 2% acetylcholine chloride and 0.1% phosphoric acid histamine in equal and the latency of asthma was observed within 6 min. Spiral strips of trachea were used to prepare spiral strips in guinea pigs， and tracheal relaxation was observed. The tracheal relaxation was observed using guinea pig tracheal spiral strip. The anti-inflammatory effect was observed by swelling of the mouse foot. Results The cough times in the mice of low， medium and high doses of Srobus pohuashanensis were lower than that of the blank control group （P<0.05）. The latency of asthma within 6 min in low， medium and high doses of srobus pohuashanensis was longer compared with the blank control group （P<0.05）. The relaxation rates of guinea pig tracheal smooth muscle were higher in the low， medium and high doses of Srobus pohuashanensis than that in the blank control group （P<0.05）. Compared with the positive control group， the relaxation rate of guinea pig tracheal smooth muscle in the low dose of srobus pohuashanensis was lower， while in the medium and high doses， the relaxation rates were higher （P<0.05）. The inhibition degree of foot swelling in the low， medium and high doses of Srobus pohuashanensis was greater than that of the blank control group respectively （P<0.05）. Conclusion The water extract of Srobus pohuashanensis fruit has an anti-inflammatory effect.

[Key words] Srobus pohuashanensis fruit； Extraction； Anti-inflammatory effect

百華花楸（Sorbus pohuashanensis）系薔薇科，花楸屬，落葉喬木，分布于我國(guó)東北和華北等地，其果實(shí)稱(chēng)“花楸果”[1]。花楸果含有多種維生素，味微苦略甜，生性平和，可以食用。含有多種具有生物活性的物質(zhì)，包括黃酮類(lèi)、氰苷類(lèi)、三萜類(lèi)、有機(jī)酸、氨基酸和蛋白質(zhì)等八大類(lèi)化合物[2]，及各種微量元素，豐富的抗壞血酸、胡蘿卜素、山梨醇、有機(jī)酸、維生素C等，具有清熱利肺、補(bǔ)脾生津之功效，是可進(jìn)一步開(kāi)發(fā)的珍貴資源[3-5]。目前臨床常用的哮喘治療藥物，主要有糖皮質(zhì)激素和支氣管擴(kuò)張劑等[6]，雖然這些藥物都有一定的療效，但也具有副作用較多且難以根治的缺點(diǎn)。傳統(tǒng)醫(yī)藥與西藥相比，具有調(diào)節(jié)整體功能、療效穩(wěn)定、副作用小的特點(diǎn)。因此，研制開(kāi)發(fā)有效預(yù)防和治療該病的天然藥物極為迫切。百華花楸藥材資源非常豐富，采集枝葉、果實(shí)不破壞生態(tài)，且總黃酮有效部位含量達(dá) 50%以上[7]，具有很好的應(yīng)用前景。本研究對(duì)白華花楸的止咳、抗炎、平喘等作用進(jìn)行了考察。

1材料與方法

1.1 藥物與試劑

百華花楸果實(shí)（2016年9月份采于黑龍江牡丹江地區(qū)，經(jīng)牡丹江醫(yī)學(xué)院藥學(xué)院鑒定為薔薇科植物百華花楸的果實(shí)）；氨水（哈爾濱華利爾化工有限公司）；氯化乙酰膽堿[赫澎（上海）生物科技有限公司]；磷酸組織胺（上海遠(yuǎn)慕生物科技有限公司）；鹽酸異丙腎上腺素（ISO，濟(jì)南為民制藥有限公司）；氨茶堿（杭州民生藥業(yè)有限公司）；急支糖漿（太極集團(tuán)浙江東方制藥有限公司）；二甲苯（淄博德魯克經(jīng)貿(mào)有限公司）。

1.2儀器與動(dòng)物

BL-410微機(jī)型生物機(jī)能實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)；402型超聲霧化器（上海合力醫(yī)療器械廠）；BT125型電子分析天平[托利多梅特勒（上海）有限公司]。健康小鼠，體重18～22 g，健康豚鼠，體重300～400 g。

1.3方法

1.3.1花楸果提取液的制備 將百華花楸進(jìn)行系統(tǒng)分離，取天山花楸干燥果實(shí)研碎，依次用石油醚，95%乙醇溶液各回流提取3次，分別合并提取液，濃縮，回收溶劑，得石油醚部分（1.6 kg）和乙醇部分（2.7 kg）浸膏。取百華花楸浸膏，依次用乙酸乙酯，正丁醇萃取，各萃取液置于水浴減壓濃縮收盡溶劑，分別得到萃取物浸膏，加入2.5%吐溫-80配制成所需濃度溶液，得提取液組[8]。

1.3.2鎮(zhèn)咳作用研究 小鼠50只，隨機(jī)分成5組，每組10只，各組小鼠連續(xù)灌胃給藥5 d，每天1次?？瞻讓?duì)照組灌胃給予0.9%氯化鈉溶液；陽(yáng)性對(duì)照組灌胃給予急支糖漿5 g/kg。按照百華花楸使用量，將對(duì)照組分為小劑量組、中劑量組、大劑量組，使用量分別為5、10、15 g/kg；末次給藥1 h后，將小鼠放入誘咳引喘儀中恒壓噴入濃氨水氣霧，觀察小鼠3 min內(nèi)的咳嗽次數(shù)。

1.3.3平喘作用研究

1.3.3.1整體引喘實(shí)驗(yàn) 采用濃氨水噴霧法[9-10]，將豚鼠放入氣霧箱，用超聲霧化器噴入引喘藥液（2%氯化乙酰膽堿與0.1%磷酸組織胺的等量混合液）15 s，記錄6 min豚鼠的哮喘反應(yīng)（出現(xiàn)呼吸困難，前足抓撓面部，身體傾斜，跌倒等），豚鼠的哮喘潛伏期，與發(fā)生抽搐的動(dòng)物數(shù)。陽(yáng)性對(duì)照組灌胃給予氨茶堿5 g/kg，按照百華花楸使用量，將對(duì)照組分為小劑量組、中劑量組、大劑量組，使用量分別為5、10、15 g/kg；每天1次，連續(xù)7 d。末次給藥1 h后記錄豚鼠的哮喘潛伏期，觀察百華花楸果實(shí)水提取液不同劑量的平喘作用。

1.3.3.2氣管螺旋條實(shí)驗(yàn) 制備豚鼠氣管螺旋條[11-12]，盛放于裝于營(yíng)養(yǎng)液的（37.0±0.5）℃恒溫水浴培養(yǎng)皿中，將氣管螺旋條一端連于通氣管上，另一端連肌力換能器并與BL-410生物機(jī)能實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)相連，通氧氣，將基線調(diào)于固定水平。記錄2 h正常活動(dòng)曲線，待基線平穩(wěn)后向浴槽中加入磷酸組織胺或氯化乙酰膽堿[13-15]，待氣管收縮達(dá)高峰并穩(wěn)定3～5 min后，加入百華花楸果實(shí)提取液，按照百華花楸使用量，將對(duì)照組分為小劑量組、中劑量組、大劑量組，使用量分別為5、10、15 g/kg，陽(yáng)性對(duì)照組灌胃給予氨茶堿5 g/kg，觀察氣管松弛情況。

1.3.3.3蛋清足腫脹法 取小鼠50只，雌雄各半，體重，隨機(jī)分為組，空白對(duì)照組灌胃給予0.9%氯化鈉溶液，陽(yáng)性對(duì)照組灌胃給予地塞米松5 g/kg（相當(dāng)人7倍用量），按照百華花楸使用量，將對(duì)照組分為小劑量組、中劑量組、大劑量組，使用量分別為5、10、15 g/kg。所有藥物均用蒸餾水混懸，按0.2 ml/kg體重灌胃，每天1次，連續(xù)7 d。末次給藥前，以螺旋測(cè)微儀測(cè)量右后足跖厚度，作為致炎前右后足正常厚度。末次給藥后1 h，在每只小鼠右后足跖皮注射蛋清0.1 mL/只，測(cè)量注入致炎后1、2、3 h后右足厚度，并減去致炎前小鼠右后足正常厚度，作為各鼠在不同時(shí)間的足腫脹度[16-20]。

2 結(jié)果

2.1各組咳嗽次數(shù)的比較（鎮(zhèn)咳作用研究）

與空白對(duì)照組比較，百華花楸小、中、大各劑量組小鼠的咳嗽次數(shù)均少于空白對(duì)照組（P<0.05），陽(yáng)性對(duì)照組小鼠的咳嗽次數(shù)少于空白對(duì)照組（P<0.05）（表1）。

2.2平喘作用研究

2.2.1各組給藥前后6 min內(nèi)引喘潛伏期的比較

與空白對(duì)照組比較，百華花楸小、中、大各劑量組豚鼠的6min內(nèi)引喘潛伏期均長(zhǎng)于空白對(duì)照組（P<0.05），陽(yáng)性對(duì)照組豚鼠的6 min內(nèi)引喘潛伏期長(zhǎng)于空白對(duì)照組（P<0.05）。百華花楸小、中、大各劑量組，陽(yáng)性對(duì)照組給藥后的6 min內(nèi)引喘潛伏期均長(zhǎng)于給藥前（P<0.05）（ 表2）。

2.2.2各組對(duì)豚鼠氣管平滑肌松弛率的比較（氣管螺旋條實(shí)驗(yàn)）

與空白對(duì)照組比較，百華花楸小、中、大各劑量組對(duì)豚鼠氣管平滑肌的松弛率均高于空白對(duì)照組（P<0.05），其中百華花楸大劑量組對(duì)豚鼠氣管平滑肌的松弛率較高，陽(yáng)性對(duì)照組對(duì)豚鼠氣管平滑肌松弛率高于空白對(duì)照組（P<0.05）。與陽(yáng)性對(duì)照組比較，百華花楸小劑量組對(duì)豚鼠氣管平滑肌的松弛率低于陽(yáng)性對(duì)照組，百華花楸中、大劑量組對(duì)豚鼠氣管平滑肌的松弛率均高于陽(yáng)性對(duì)照組（P<0.05）（表3）。

2.2.3各組對(duì)小鼠足腫脹抑制程度的比較（蛋清足腫脹法）

注射蛋清后，小鼠足跖在10 min后開(kāi)始腫脹程度最明顯。與空白對(duì)照組比較，百華花楸小、中、大各劑量在不同時(shí)間對(duì)小鼠足腫脹抑制程度均高于空白對(duì)照組（P<0.05），陽(yáng)性對(duì)照組對(duì)小鼠足腫脹抑制程度高于空白對(duì)照組（P<0.05）（表4）。

3討論

呼吸系統(tǒng)疾病的一個(gè)主要癥狀就是咳嗽，是一種保護(hù)性反射，而劇烈的咳嗽會(huì)使患者感到非常痛苦，引起并發(fā)癥，甚至導(dǎo)致哮喘的發(fā)生。支氣管哮喘是一種由多種細(xì)胞特別是肥大細(xì)胞、嗜酸性細(xì)胞和淋巴細(xì)胞參與的慢性氣道炎癥。為防止疾病進(jìn)一步嚴(yán)重，對(duì)于咳嗽應(yīng)首先采用鎮(zhèn)咳藥進(jìn)行治療。鎮(zhèn)咳藥的鎮(zhèn)咳作用能夠減輕因咳嗽引起的不適，從而防止原發(fā)病及并發(fā)癥的產(chǎn)生。鎮(zhèn)咳藥在支氣管哮喘的治療中，也會(huì)起到輔助治療的作用，具有一定的意義。

實(shí)驗(yàn)使用濃氨水噴霧法對(duì)百華花楸的鎮(zhèn)咳作用進(jìn)行研究，濃氨水是一種強(qiáng)的刺激物，能刺激呼吸道黏膜上皮的感受器，反射性地引起咳嗽。實(shí)驗(yàn)表明百華花楸能明顯減少小鼠咳嗽次數(shù)。組胺引喘實(shí)驗(yàn)是評(píng)價(jià)藥物平喘作用的常用藥理學(xué)方法，實(shí)驗(yàn)表明百華花楸可延長(zhǎng)組胺引喘豚鼠的引喘潛伏期，具有抗哮喘作用。實(shí)驗(yàn)采用小鼠足腫脹模型來(lái)代表慢性增殖炎癥模型，在小鼠注射蛋清后，小鼠足趾在10 min后開(kāi)始腫脹程度最明顯，提示百華花楸可抑制小鼠足腫脹程度，具有一定的抗炎作用。

綜上所述，百華花楸果實(shí)小、中、大劑量組均可減少小鼠的咳嗽次數(shù)；延長(zhǎng)由濃氨水所誘導(dǎo)的小鼠咳嗽的潛伏期；延長(zhǎng)豚鼠哮喘的潛伏期；降低小鼠足腫脹程度，提示百華花楸有很好的鎮(zhèn)咳、平喘、抗炎作用，也為進(jìn)一步研究其藥物作用給出可行性方向，為藥物開(kāi)發(fā)作出準(zhǔn)備，有望將其研究成為一種新的治療呼吸系統(tǒng)疾病的藥物。

[參考文獻(xiàn)]

[1]柴曉冬.百華花楸果實(shí)有效成分的研究[J].遼寧林業(yè)科技，2015，（4）：31-32

[2]尹永霞，趙巖，蔡恩博，等.百花花楸果研究現(xiàn)狀及其發(fā)展前景[J].北方園藝，2017（17）：188-191.

[3]王幻，唐輝，王國(guó)軍，等.HPLC測(cè)定天山花楸葉提取物中6種黃酮成分[J].中國(guó)實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志，2014，20（15）：58-61.

[4]中國(guó)科學(xué)院植物志編輯委員會(huì).中國(guó)植物志：第36卷[M].北京：科技出版社，1974：2848.

[5]孟令鍇，張朝立，高長(zhǎng)久，等.高效液相色譜法同時(shí)測(cè)定百華花楸果實(shí)中金絲桃苷和蘆丁的含量[J].中國(guó)醫(yī)藥導(dǎo)報(bào)，2016，13（4）：32-35

[6]劉飛，穆晶晶，張博，等.超聲波輔助提取黑果腺肋花楸花色苷工藝優(yōu)化及穩(wěn)定性研究[J].天然產(chǎn)物研究與開(kāi)發(fā)，2018， 30（3）：485-494

[7]姚莉莉，趙海泓，申立營(yíng)，等.西伯利亞花楸組培快繁技術(shù)體系的研究[J].遼寧農(nóng)業(yè)科學(xué)，2005，（6）：19-21

[8]闞毓銘.中藥化學(xué)實(shí)驗(yàn)操作技術(shù)[M].北京：中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，1988：8.

[9]鄭燕敏，張兵.抗哮喘藥物現(xiàn)狀和研發(fā)動(dòng)態(tài)[J].上海醫(yī)藥，2008，29（5）：216-217.

[10]胡桂英.支氣管哮喘發(fā)病機(jī)制研究進(jìn)展[J].河北醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào)，1994，20（4）：255-256.

[11]侯甲福，李雪梅，李文超，等.百華花球果實(shí)抗炎有效部位的研究[J].中國(guó)藥物經(jīng)濟(jì)學(xué)，2013，8（5）：225-226.

[12]馬俊鵬，常軍民，盧冬梅.天山花楸水提取液鎮(zhèn)咳平喘作用的實(shí)驗(yàn)研究[J].西北藥學(xué)雜志，2008，23（3）：186

[13]王丹，向陽(yáng)，常軍民.天山花楸平喘膠囊鎮(zhèn)咳、祛痰、平喘、抗炎及免疫作用的研究[J].中國(guó)實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)，2013， 19（23）：262-265.

[14]楊本坤，王素軍，曾潔，等.大鼠在體單向腸灌流模型研究肉桂酸腸道吸收特點(diǎn)[J].廣東藥學(xué)院學(xué)報(bào)，2013，29（1）：69-72.

[15]王婷婷，李偉，袁勇，等.大鼠單向灌流模型研究田薊苷的在體腸吸收[J].中國(guó)中藥雜志，2013，38（7）：1079-1082

[16]徐叔云，卞如濂，陳修.藥理實(shí)驗(yàn)方法學(xué)[M].3版.上海：上?？茖W(xué)技術(shù)出版社，2002：1370

[17]周瑞玲，陳玉興，崔景朝.川貝枇杷膏止咳、化痰、平喘、抗炎及免疫作用研究[J].中國(guó)實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志，2004，10（5）：25.

[18]賈秀娟，魏曉瑤，趙艷敏，等.黑果花楸果實(shí)中花青素含量分布及抗氧化活性[J].食品研究與開(kāi)發(fā)，2017，38（8）：33-37.

[19]張?jiān)谄?小青龍湯對(duì)哮喘小鼠肺組織Th1/Th2作用的實(shí)驗(yàn)研究[J].中國(guó)中西醫(yī)結(jié)合急救雜志，2004，11（6）：649-652.

[20]劉靜，徐莉莉.黑果腺肋花楸黃酮提取工藝優(yōu)化及體外抗氧化研究[J].食品研究與開(kāi)發(fā)，2017，38（3）：60-65.