2019年3月14日,深圳大學(xué)莫蓓莘教授研究組以擬南芥為模式植物,系統(tǒng)評估了內(nèi)源RNAi對不同啟動子驅(qū)動的Cas9系統(tǒng)編輯效率的影響。研究結(jié)果顯示,組成型表達(dá)的強(qiáng)啟動子,如35S CaMV啟動子驅(qū)動的Cas9表達(dá),受內(nèi)源RNAi的影響較大,而胚特異性表達(dá)的啟動子,如EC1.2啟動子驅(qū)動的Cas9表達(dá),則不受內(nèi)源RNAi的影響。在擬南芥RNAi突變體rdr6、dcl2、dcl3、dcl4背景下,35S-Cas9系統(tǒng)的基因編輯效率較野生型(WT)背景下有顯著提高;基于此,利用人工miRNA(amiRNA)抑制擬南芥內(nèi)源RNAi通路關(guān)鍵基因RDR6,將amiR-RDR6與Cas9元件構(gòu)建在一起,可以有效提高35S-Cas9系統(tǒng)的基因編輯效率;同時,利用amiR-RDR6的發(fā)育表型,可有效地篩選不含Cas9 T-DNA插入的純合突變體。該研究為CRISPR/Cas9介導(dǎo)的農(nóng)作物基因編輯技術(shù)的改良提供了新思路。
相關(guān)研究結(jié)果在線發(fā)表在《Science China Life Science》上。