回瑞華,侯冬巖,李鐵純,刁全平

(鞍山師范學(xué)院 化學(xué)與生命科學(xué)學(xué)院,遼寧 鞍山 114007)

槲寄生屬(Viscum)植物系桑寄生科(Lorantheceae)半寄生常綠灌木，常寄生于梨、榆、楊、山楂、桑、茶、山毛茛、蕓香、薔薇科等植物上，我國(guó)大部分地區(qū)均有分布[1-3].由于特殊的寄生特性，可吸收寄主的內(nèi)涵物，其化學(xué)成分與寄主密切相關(guān)，同時(shí)也有其本身的獨(dú)特活性成分.槲寄生富含三萜類、甾醇類、黃酮類等化合物，其所含豐富的化學(xué)成分具有廣泛的藥理活性，具有祛風(fēng)濕、補(bǔ)肝腎、強(qiáng)筋骨、養(yǎng)血、安胎、降血壓等作用，近年來(lái)，在傳統(tǒng)藥用基礎(chǔ)上不斷發(fā)現(xiàn)其新療效和新應(yīng)用，如抗腫瘤、抗癌等作用[4,5].茶寄生是一種寄生在樹(shù)齡較高的古喬木茶樹(shù)上的寄生物，形狀像小珊瑚，因寄生枝桿節(jié)狀帶毫，故此被稱為“螃蟹腳”.梨寄生是寄生在梨樹(shù)上的寄生物.國(guó)內(nèi)外對(duì)槲寄生的研究發(fā)展較快，報(bào)道較多，而關(guān)于茶寄生和梨寄生的研究少見(jiàn)報(bào)道.本文對(duì)茶寄生和梨寄生中黃酮化合物進(jìn)行分析，為茶寄生和梨寄生的開(kāi)發(fā)利用提供科學(xué)依據(jù).

1 實(shí)驗(yàn)部分

1.1 儀器與試劑

實(shí)驗(yàn)所用儀器與試劑見(jiàn)表1.

表1 實(shí)驗(yàn)所用儀器與試劑

1.2 樣品及樣品處理

茶寄生樣品：取自福建.

梨寄生樣品：取自遼寧鞍山.

分別將兩種樣品清洗潔凈后放入烘箱中，于60 ℃干燥4 h，粉碎后過(guò)0.425 mm篩，裝入干凈的密封袋中備用.

1.3 標(biāo)準(zhǔn)溶液及實(shí)驗(yàn)溶液的配制

標(biāo)準(zhǔn)溶液配制：以槲皮素作測(cè)定樣品中黃酮化合物含量的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)，精確稱取0.020 g.

槲皮素標(biāo)準(zhǔn)品，加乙醇使其溶解稀釋，置于50 mL的容量瓶中定容至刻度，得到濃度為400 μg/mL標(biāo)準(zhǔn)品儲(chǔ)備液，搖勻，備用.

1%三氯化鋁溶液配制：準(zhǔn)確稱取1.756 7 g的AlCl3·6H2O,加水溶解并稀釋，置于100 mL容量瓶中定容至刻度，搖勻，備用.

1.4 黃酮化合物吸收曲線的繪制及測(cè)定波長(zhǎng)的確定

準(zhǔn)確吸取1.3標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液0.5 mL，置于10 mL容量瓶中，加1%的三氯化鋁溶液，充分混合并定容至刻度，室溫下靜置10 min，在波長(zhǎng)200～800 nm范圍內(nèi)掃描，繪制出其吸收曲線，如圖1.

圖1 標(biāo)準(zhǔn)溶液的吸收光譜圖

分別稱取經(jīng)1.2處理的樣品10.00 g置于250 mL錐形瓶中，用95%的乙醇在20 ℃下，超聲波提取25 min，料液比1∶15.抽濾，濾渣重復(fù)提取1次，合并濾液，除去溶劑，得浸膏在60 ℃烘箱中干燥至恒重得樣品浸膏[6,7].將浸膏用95%乙醇定容至50 mL容量瓶中，搖勻.取其1 mL溶液置10 mL容量瓶中，用1%的三氯化鋁溶液定容，搖勻，室溫放置10 min，以相應(yīng)試劑為空白，在200～800 nm范圍內(nèi)掃描，繪制出其吸收曲線，如圖2和圖3.

圖2 茶寄生樣品的吸收光譜

由圖1～3可知，標(biāo)準(zhǔn)溶液的吸收光譜圖和樣品的吸收光譜圖圖形相同，均在270 nm和420 nm有較強(qiáng)吸收.但峰形不對(duì)稱，這樣會(huì)給含量測(cè)定帶來(lái)影響.采用三波長(zhǎng)光譜法可有效地消除吸收峰不對(duì)稱給定量分析造成的影響并校正基線傾斜，用作圖法確定出3個(gè)測(cè)定波長(zhǎng)分別為λ1=250 nm、λ2=270 nm、λ3=295 nm[8-14].

圖3 梨寄生樣品的吸收光譜

2 結(jié)果與結(jié)論

2.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制

分別取0.20，0.40，0.60，0.80，1.00，1.20 mL的1.3槲皮素標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液，置于10 mL容量瓶中，用1%的三氯化鋁溶液定容，室溫放置10 min，以相應(yīng)試劑為空白，用三波長(zhǎng)光譜法測(cè)得相應(yīng)的ΔA值，繪制成標(biāo)準(zhǔn)曲線，得回歸方程：ΔA=17.118C+0.020，相關(guān)系數(shù)r=0.999 8，說(shuō)明標(biāo)準(zhǔn)溶液在0.008～0.048 mg/mL范圍內(nèi)，ΔA與濃度C呈良好線性關(guān)系，可按標(biāo)準(zhǔn)曲線法進(jìn)行定量分析.標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度與吸光度的關(guān)系如表2所示.

表2 標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度與吸光度的關(guān)系

2.2 樣品穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)

用1.4的方法配制樣品溶液進(jìn)行穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)，結(jié)果表明：樣品放置120 min，測(cè)得其吸光度值基本不變，說(shuō)明樣品穩(wěn)定性較好.

2.3 方法精密度實(shí)驗(yàn)

按1.4的方法配制樣品溶液，在測(cè)定波長(zhǎng)下測(cè)定ΔA，得到標(biāo)準(zhǔn)偏差和變異系數(shù)，結(jié)果列于表3.

表3 方法精密度 (μg/mL)

2.4 方法回收率實(shí)驗(yàn)

按1.4的方法配制3 個(gè)不同濃度樣品溶液，按標(biāo)準(zhǔn)加入法加入等量的1.4標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液，在測(cè)定波長(zhǎng)下測(cè)定ΔA，得到回收率，結(jié)果見(jiàn)表4.

表4 方法回收率 (μg/mL)

由表4可知，實(shí)驗(yàn)方法回收率為97.5%～101.9%.

按照1.4的方法處理茶寄生和梨寄生樣品，在三波長(zhǎng)下分別測(cè)定其ΔA值3次，黃酮化合物的含量結(jié)果為：茶寄生黃酮化合物含量13.7 mg/g，梨寄生黃酮化合物含量8.05 mg/g.

2.5 結(jié)論

本實(shí)驗(yàn)采用超聲提取茶寄生和梨寄生黃酮化合物，用三波長(zhǎng)光譜法測(cè)定黃酮化合物的含量.方法的回收率為97.5%～101.9%，變異系數(shù)小于0.054%，方法的準(zhǔn)確度與精密度均較高.由于ΔA值與黃酮的濃度成正比，在所選擇的3個(gè)波長(zhǎng)處，其相應(yīng)的吸收光譜曲線上3點(diǎn)在一條直線上，有效地消除吸收峰不對(duì)稱和基線漂移給定量分析造成的影響，因此三波長(zhǎng)光譜法為測(cè)定茶寄生和梨寄生的黃酮化合物含量提供了更準(zhǔn)確的方法.