文/戴洋洋 閆 磊 王春天 王紫竹 李 卉 宋 爽 曲建偉

（天津市乳品食品監(jiān)測中心）

牛奶中農(nóng)藥殘留問題受到世界各國的重視。國內(nèi)外毒理學專家研究證明，牛奶中農(nóng)藥殘留污染對人體健康存在微劑量、慢性細微毒性危害。控制奶產(chǎn)品中農(nóng)藥殘留污染，確保乳制品安全，日益受到關(guān)注[1]。農(nóng)藥可以用來殺滅昆蟲、真菌和其它危害作物生長的生物，部分農(nóng)藥穩(wěn)定性好，能在環(huán)境中長期存在，并在動植物及人體中不斷積累，對人畜的生命安全產(chǎn)生危害。由于奶牛飼料品種多，如玉米、麥類、稻米、高粱、豆類等，施用的農(nóng)藥品種更多，生鮮乳及其乳制品的產(chǎn)業(yè)鏈較長，牛奶在生產(chǎn)運輸加工過程中會受到各種各樣的污染，其中任何一種污染都有可能影響牛奶的安全性。

牛奶中的農(nóng)藥殘留主要來源于：①奶牛的喂養(yǎng)過程，動物飲用被污染水源或食用含有農(nóng)藥殘留的飼料，部分農(nóng)藥通過食物鏈在動物體內(nèi)蓄積；②為抑制奶牛身上的真菌、細菌、線蟲等，及周圍的蒼蠅、蚊子等昆蟲，使用的殺蟲劑可能會混入牛奶中，并且擠奶設(shè)備、用具等牛奶接觸到的物件也有可能導致農(nóng)藥殘留[2]；③飼料種植使用的農(nóng)藥經(jīng)遷移轉(zhuǎn)化后進入生鮮乳，再經(jīng)加工進入乳制品中。

由于牛奶中存在較多的脂肪和蛋白質(zhì)，要把牛奶中農(nóng)藥殘留和雜質(zhì)分離，需要對牛奶進行必要的前處理，有效提取目標物，并對目標分析物進行凈化與濃縮，以達到檢測要求[3]。

1 材料與方法

1.1 試劑和材料

乙腈，氯化鈉，乙酸鉛，正己烷；有機氯農(nóng)藥標準品：五氯硝基苯；七氯；艾氏劑；狄氏劑；六六六；滴滴涕；硫丹；氯丹。

固相萃取柱（ProElut DPC），規(guī)格為3 g/12 mL。

混合標準儲備溶液的配制：準確稱取標準品，用甲苯分別配制成10 mg/mL的標準儲備液，再用甲苯配制成10 μg/mL的混合標準儲備液。

1.2 儀器和設(shè)備

氣相色譜儀（帶電子捕獲檢測器，安捷倫6890N）；分析天平（精確到0.0001 g）。

1.3 測定步驟

1.3.1 提取

稱取10 g生鮮乳，加入15 mL乙腈、4 g氯化鈉、2 mL 200 g/L乙酸鉛溶液，振蕩5 min，8 000 r/min離心5 min，收集上層清液；按照上述步驟重復提取一次，合并上層清液；將上清液在40 ℃水浴下減壓蒸發(fā)至約5 mL，待凈化。

1.3.2 凈化

加入10 mL乙腈活化固相萃取柱，棄去流出液；隨后加入待凈化液，收集流出液；然后加入20 mL乙腈洗脫固相萃取柱，收集流出液；最后將收集的流出液在40 ℃水浴下減壓蒸餾至干，加入1 mL正己烷溶解，混勻，供氣相色譜分析。

表1 各有機氯農(nóng)藥標準曲線線性方程及相關(guān)系數(shù)

表2 生鮮乳中添加有機氯農(nóng)藥的添加回收試驗結(jié)果

1.4 儀器條件

色譜柱：HP-5，30 m×0.25 mm，0.25 μm，或性能相當者；載氣為氮氣，純度為99.999%；載氣流速1.0 mL/min；進樣口溫度280 ℃；檢測器溫度280 ℃；進樣量1 μL；不分流進樣；柱溫：初始溫度90 ℃，保持1 min，以40 ℃/min升至170 ℃，2.3 ℃/min升溫至230 ℃。

1.5 結(jié)果計算

按照式1計算生鮮乳中有機氯農(nóng)藥的殘留量。其中，X為試樣中農(nóng)藥殘留的含量（μg/kg）；Ai為試樣中農(nóng)藥殘留的峰面積；Ci0為標準溶液中農(nóng)藥殘留的濃度（ng/mL）；D為樣液的稀釋倍數(shù)；V為樣液最終定容體積（mL）；Ai0為標準溶液中農(nóng)藥殘留的峰面積；m為試樣的質(zhì)量（g）。結(jié)果以重復性條件下獲得的2 次獨立測定結(jié)果的算術(shù)平均值表示，保留3 位有效數(shù)字。

圖1 有機氯農(nóng)藥標準色譜圖

2 結(jié)果

2.1 標準曲線建立

配置不同濃度的有機氯農(nóng)藥混合標準溶液（0、1、2、3、4、5、6 ng/mL），氣相色譜測定。以各有機氯農(nóng)藥濃度為橫坐標，峰面積為縱坐標，建立標準曲線（表1）。

2.2 有機氯農(nóng)藥的標準色譜圖

在既定色譜條件下，有機氯農(nóng)藥的標準色譜圖見圖1?；旌蠘藴嗜芤涸诩榷ㄉV條件下能夠完全分離，峰型尖銳。

2.3 實際樣品測定

收集生鮮乳樣品，按照測定步驟檢測有機氯農(nóng)藥殘留，結(jié)果顯示，樣品中有機氯農(nóng)藥均未檢出（＜1.0 μg/kg）。

2.4 添加回收試驗

向空白生鮮乳樣品中添加有機氯農(nóng)藥標準品，進行添加回收試驗，按照提取方法和色譜條件測定添加回收率（扣除樣品本底值），結(jié)果見表2。結(jié)果表明，本方法的回收率為78%～107%，說明方法具有較好的準確度。

表3 各有機氯農(nóng)藥的最低檢出限

2.5 檢出限

根據(jù)《食品衛(wèi)生檢驗方法 理化部分 總則》（GB/T 5009.1-2003）中色譜法公式（式2）計算檢出限，其中，b為標準曲線回歸方程中的斜率，S為儀器噪音的3 倍，即儀器能辨認的最小物質(zhì)信號。結(jié)果見表3。

3 結(jié)論

目前測定生生鮮乳中多種農(nóng)藥殘留的方法主要參考國內(nèi)外相關(guān)技術(shù)資料。本文方法的準確性、重現(xiàn)性、檢出限等均能夠滿足檢測要求，可用于生鮮乳中有機氯農(nóng)藥殘留的檢測。