劉婷婷 楊寧江

我國(guó)消化道腫瘤有極高的發(fā)病率，早發(fā)現(xiàn)、早診斷、早治療是降低死亡率的關(guān)鍵，隨著醫(yī)學(xué)技術(shù)的不斷發(fā)展，消化內(nèi)鏡技術(shù)是當(dāng)前診斷和篩查消化道腫瘤的最主要檢查手段，消化道內(nèi)鏡活檢組織便成為了病理科最為常見(jiàn)的標(biāo)本[1-3]。由于這種標(biāo)本一般體積小、組織碎、數(shù)量少，又存在代表性差和因灼燒、擠壓導(dǎo)致細(xì)胞變形的可能，相對(duì)大標(biāo)本增加了診斷難度，因此，更需要一張制作優(yōu)良的組織切片。本文收集500 例消化道內(nèi)鏡活檢標(biāo)本石蠟切片，對(duì)切片存在的質(zhì)量缺陷進(jìn)行回顧性分析，總結(jié)歸納制片經(jīng)驗(yàn)，旨在提高消化道內(nèi)鏡活檢標(biāo)本石蠟切片制作的質(zhì)量，從而保證病理診斷的準(zhǔn)確性。

1 資料與方法

1.1 一般資料

我院病理科2017 年10 月—2018 年10 月期間接收的消化道內(nèi)鏡活檢組織標(biāo)本為1 495 例，隨機(jī)選取500 例標(biāo)本作為研究對(duì)象，其中包括胃鏡238 例和腸鏡262 例，病理診斷結(jié)果有黏膜慢性炎、息肉、腺瘤、間質(zhì)瘤、腺癌以及類癌等。

1.2 方法

病理常規(guī)石蠟切片質(zhì)量?jī)?yōu)質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)：切面完整；薄厚均勻；無(wú)刀痕、裂隙；平坦無(wú)褶皺；無(wú)污染物；透明度良好；細(xì)胞核、質(zhì)染色對(duì)比清晰；裱貼適當(dāng)；標(biāo)簽牢固編號(hào)清晰。根據(jù)此評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)，對(duì)選取標(biāo)本的石蠟切片在顯微鏡下進(jìn)行觀察，記錄切片存在的質(zhì)量缺陷，并分析其產(chǎn)生的相關(guān)原因，總結(jié)相應(yīng)制片經(jīng)驗(yàn)。

2 結(jié)果

在本文選取的500 例石蠟切片中，存在質(zhì)量缺陷的切片為93例，其中出現(xiàn)問(wèn)題較多的是組織切片裂隙、切片有褶皺，分別為32 例、27 例；其次是組織切面不完整、細(xì)胞核呈灰藍(lán)色、組織切片有污染物，分別為13 例、9 例、7 例；其他綜合問(wèn)題5 例。組織切片裂隙有的呈不規(guī)則狀、有的出現(xiàn)波紋狀、有的為起縱裂紋；在切片褶皺中，橫向褶皺居多，組織邊緣易于卷曲折疊；組織切面不完整表現(xiàn)為組織缺損、有空洞形成。

3 討論

筆者認(rèn)真分析了本文結(jié)果中主要質(zhì)量缺陷出現(xiàn)的原因，有以下幾個(gè)方面：（1）裂隙原因：消化道內(nèi)鏡活檢標(biāo)本體積一般較小，容易處理過(guò)度，質(zhì)地變硬變脆；冷凍溫度太低、冷凍時(shí)間太長(zhǎng)，蠟塊變得過(guò)硬；刀片不鋒利，切片動(dòng)作力度過(guò)大；攤片水溫太高，造成人為裂隙。（2）褶皺原因：由于組織脆小，取材時(shí)鑷子若夾取太緊，組織易受到機(jī)械壓迫；制備過(guò)程中蠟塊溫度過(guò)高或切片刀變鈍[4]；攤片水溫過(guò)高或過(guò)低。（3）不完整原因：切片時(shí)用力過(guò)快過(guò)猛，組織中的小斑塊會(huì)從蠟塊中脫落，留下小空洞，尤其在過(guò)度處理的組織中容易發(fā)生；蠟塊粗修時(shí)，沒(méi)有暴露組織最大面，便急于切片、貼片。（4）細(xì)胞核灰藍(lán)原因：組織處理溫度過(guò)高、過(guò)熱，在石蠟的停留時(shí)間過(guò)長(zhǎng)；或者固定時(shí)間太短，直接進(jìn)行了高濃度的脫水處理[5]。（5）污染原因：取材臺(tái)面不干凈或取材器械沒(méi)及時(shí)沖洗，將污染物或上例標(biāo)本碎小組織帶入；包埋時(shí)，把別的組織殘?jiān)烊?；切片刀有蠟屑、載玻片有污染、攤片水面不干凈，導(dǎo)致污染物粘附在切片上。

鑒于上述原因，提示消化道內(nèi)鏡活檢標(biāo)本石蠟切片質(zhì)量缺陷的產(chǎn)生主要和固定取材、脫水浸蠟、石蠟包埋、組織切片和HE 染色這幾個(gè)制片環(huán)節(jié)密切相關(guān)，根據(jù)日常工作操作及查閱文獻(xiàn)復(fù)習(xí)，本文對(duì)其制作過(guò)程進(jìn)行了相關(guān)經(jīng)驗(yàn)的總結(jié)，介紹如下：

3.1 固定取材

組織固定是石蠟切片技術(shù)的重要環(huán)節(jié)，固定不及時(shí)或不徹底會(huì)影響以后的各個(gè)制片過(guò)程。組織離體后，內(nèi)鏡醫(yī)師應(yīng)及時(shí)將標(biāo)本投入10%中性緩沖福爾馬林溶液固定，固定液的量應(yīng)超過(guò)標(biāo)本體積的10 倍以上，根據(jù)標(biāo)本大小，固定時(shí)間6～24 h 為宜，固定溫度為正常室溫[6]。選擇廣口、有蓋及平底的固定容器，以利于夾取組織并保持其原形。由于消化道內(nèi)鏡活檢標(biāo)本一般體積較小或者帶有黏液，取材時(shí)要小心夾取，以防標(biāo)本滑落丟失。微小組織（長(zhǎng)徑小于0.3 cm）全部取材，并放在擦鏡紙上按四折疊法進(jìn)行折疊[7]，可滴加伊紅上色以便于包埋和切片；較大組織（如直徑大于0.5 cm 的胃息肉、腸息肉等）可視其厚度剖開(kāi)切面盡量全部取材，以防影響后面脫水質(zhì)量。每取完一次標(biāo)本，鑷子要沖洗干凈，以免之前標(biāo)本的混入造成污染。當(dāng)取材標(biāo)本量多時(shí)，可先將取完的標(biāo)本投入生理鹽水中，既能保持組織的結(jié)構(gòu)，又能防止組織干涸[8-9]。

3.2 脫水浸蠟

有條件的單位盡量選擇消化道內(nèi)鏡活檢組織這類小標(biāo)本與大標(biāo)本分開(kāi)處理的方式，以免造成小標(biāo)本過(guò)度處理。脫水劑乙醇要保證從低濃度到高濃度的順序，低濃度乙醇對(duì)組織的處理很重要，如果前面先用到高濃度乙醇進(jìn)行脫水，使組織表面先硬化形成屏障，難以使組織內(nèi)部充分脫水，從而影響脫水質(zhì)量[10]。為了節(jié)省成本，可以將脫水機(jī)前一個(gè)缸的乙醇倒掉，依次將后面乙醇梯度前移使用，但第一缸的乙醇應(yīng)該保證80%的濃度。浸蠟溫度不應(yīng)過(guò)高，一般設(shè)置為比熔點(diǎn)高2℃，使固體石蠟全部液化即可，浸蠟時(shí)間也不宜過(guò)長(zhǎng)，以免組織過(guò)度處理變硬變脆或者影響后期細(xì)胞核著色[11]。要定期檢查乙醇、透明劑的濃度和石蠟的純度，注意及時(shí)更換。

3.3 石蠟包埋

消化道內(nèi)鏡活檢標(biāo)本一般體積小、塊數(shù)多，包埋的關(guān)鍵是多塊組織能否包在同一個(gè)平面上，包埋的方向是否正確，包埋時(shí)可以注意以下幾個(gè)方面：（1）夾取組織的鑷尖部位應(yīng)預(yù)熱，以防溫度過(guò)低造成碎小組織粘附在鑷子上不利于包埋。（2）包埋模具先注入一部分蠟液后移至冷凍臺(tái)上，待包埋模具底部形成一層蠟?zāi)ず螅瑢⒔M織移至模具再注入剩余蠟液，以利于多塊組織聚集在同一個(gè)平面。（3）多塊小組織包埋時(shí)，不要雜亂無(wú)章，應(yīng)呈線狀排列為佳。（4）條索狀組織，平放包埋；片狀組織，豎起來(lái)包埋；小塊組織，以窄面朝下包埋。（5）當(dāng)組織塊大小相差很大時(shí)，按照從大到小的順序包埋，使所有組織的最大切面在同一個(gè)平面上。另外，夾取組織時(shí)動(dòng)作要輕柔，防止其彈出包埋盒，而且每包埋完一個(gè)標(biāo)本，用軟布擦拭鑷子或者更換一把鑷子，以防碎小組織殘留造成污染。

3.4 組織切片

切片前應(yīng)該仔細(xì)檢查切片機(jī)上有關(guān)的螺旋是否擰緊，切片刀的切片角度是否合適。組織冷凍臺(tái)的溫度以-5℃為佳，冷凍數(shù)分鐘，不要冷凍時(shí)間過(guò)長(zhǎng)，否則組織較硬，切片時(shí)易破碎[12]。攤片機(jī)的水溫以40℃～46℃為宜，以免水溫過(guò)高造成人為裂隙，并及時(shí)清理水面，以免殘留的碎屑污染下一例切片。切片刀的角度在5°左右為合適，切片時(shí)動(dòng)作輕柔，速度均勻一致，切片厚度為3～4 μm。切片刀應(yīng)一直保持鋒利，可以在舊刀鋒位置上粗切蠟塊，暴露組織最大切面后，再換到新刀鋒位置上正式切片，以減少切片褶皺和刀痕。若切片的褶皺難于展平，可以先放入5%～10%的乙醇內(nèi)在放入恒溫水中。每個(gè)蠟塊要求選取6～8 個(gè)切面。此外，及時(shí)清掃切片機(jī)刀座上周圍的蠟屑，以防切片時(shí)造成污染和損傷刀片。

3.5 HE 染色

烤片時(shí)，溫度60℃～65℃為宜，時(shí)間20～30 min；對(duì)石蠟切片脫蠟要徹底并且及時(shí)更換脫蠟液，以免影響后期染色效果；注意觀察蘇木精染液的染色情況，若因其過(guò)氧化染色力明顯下降，應(yīng)立即更換染液；控制好1%鹽酸酒精的分化時(shí)間，若處理時(shí)間過(guò)長(zhǎng)，細(xì)胞核著色過(guò)淡。

由于消化道內(nèi)鏡活檢標(biāo)本體積一般較小、石蠟制片步驟繁多，需要病理技術(shù)人員在固定、取材、脫水、包埋、切片以及染色等各個(gè)環(huán)節(jié)中認(rèn)真對(duì)待小標(biāo)本的特殊性，并在日常工作中發(fā)現(xiàn)問(wèn)題、分析問(wèn)題、總結(jié)相關(guān)經(jīng)驗(yàn)以及不斷規(guī)范制片過(guò)程，才能不斷提高消化道內(nèi)鏡活檢標(biāo)本石蠟切片的質(zhì)量。