李素素 周春祥，2

自然殺傷T(Natural killer T，NKT)細(xì)胞是一種可同時(shí)表達(dá)T細(xì)胞受體和NK細(xì)胞受體的特殊T淋巴細(xì)胞亞群，可識(shí)別CD1d分子呈現(xiàn)的脂類抗原[1]。雖然人和小鼠外周血中NKT細(xì)胞含量極少，但NKT細(xì)胞在肝癌、乳腺癌、結(jié)腸癌等多種惡性疾病的免疫應(yīng)答中發(fā)揮積極調(diào)控作用[2-3]。而且肝臟是免疫器官，富含的NKT細(xì)胞是其他器官含量的20～100倍，可參與肝癌免疫應(yīng)答[4]。最近研究發(fā)現(xiàn)在肝癌免疫應(yīng)答中，NKT細(xì)胞有促腫瘤和抗腫瘤的雙重作用[5]。NKT細(xì)胞雙重調(diào)控作用主要與其分泌的細(xì)胞因子類型、NKT細(xì)胞所處免疫應(yīng)答的階段和其激活物糖脂α-半乳糖神經(jīng)酰胺(α-Galactosyl ceramide，α-Galcer)等多種因素相關(guān)[6-7]。本文就NKT細(xì)胞參與肝癌免疫調(diào)控作用相關(guān)研究機(jī)制進(jìn)行綜述，以期對(duì)肝癌相關(guān)的實(shí)驗(yàn)研究及臨床治療有一定幫助。

1 NKT細(xì)胞的分類

根據(jù)T細(xì)胞受體TCR鏈表達(dá)差異和抗原的特異性，將NKT細(xì)胞分為Ⅰ型和Ⅱ型NKT細(xì)胞。含有特殊TCRα鏈，表達(dá)半恒定TCR的NKT稱為恒定自然殺傷T(invariant NKT，iNKT)細(xì)胞，又稱經(jīng)典NKT細(xì)胞，是Ⅰ型NKT細(xì)胞[8]，可識(shí)別CD1d分子呈現(xiàn)的脂類抗原α-Galcer。另一種NKT細(xì)胞有不同的TCRαβ鏈，不能識(shí)別α-Galcer，稱為多樣NKT(diverse NKT，dNKT)，是Ⅱ型NKT細(xì)胞[9]。Ⅰ型NKT細(xì)胞分為五種不同的功能子集，分別為Th1樣、Th2樣、Th17樣、Treg樣和Tfh樣NKT細(xì)胞。Ⅱ型NKT細(xì)胞分為兩種不同的功能子集[6]，分別為Th1樣和Th2樣。另有其他分類，如極化的NKT細(xì)胞最終分化為NKT1、NKT2和NKT17，并在特定組織中分布；如iNKT發(fā)育成5種不同功能的亞群：iNKT1、iNKT2、iNKT17、iNKT10和卵泡輔助iNKT(Follicular helper iNKT，iNKTfh)，每一亞群表達(dá)一種獨(dú)特的轉(zhuǎn)錄因子組合，激活時(shí)可調(diào)節(jié)細(xì)胞因子基因轉(zhuǎn)錄，產(chǎn)生一系列不同的細(xì)胞因子[10]。由此可見，NKT細(xì)胞主要按照其分泌的細(xì)胞因子類型、所在部位及抗原特異性來(lái)分類，雖然分類和相關(guān)描述不盡統(tǒng)一，但主要為以下分類：Ⅰ型NKT細(xì)胞分為iNKT1、iNKT2、iNKT10、iNKT17、iNKTfh和iNKTreg，Ⅱ型NKT細(xì)胞分為dNKT1和dNKT2，目前研究最多的是iNKT1、iNKT2、dNKT1和dNKT2細(xì)胞。

2 決定NKT細(xì)胞在腫瘤免疫中發(fā)揮雙重作用的因素

2.1 細(xì)胞因子類型

過(guò)去普遍認(rèn)為，iNKT細(xì)胞參與抗癌免疫，dNKT細(xì)胞下調(diào)腫瘤免疫監(jiān)視，促進(jìn)癌癥進(jìn)展，這種認(rèn)識(shí)過(guò)于籠統(tǒng)[5，11]，NKT細(xì)胞的功能和其分泌的細(xì)胞因子類型有關(guān)。iNKT2細(xì)胞可抑制腫瘤特定CD8+T細(xì)胞反應(yīng)[12]，促進(jìn)癌癥進(jìn)展，dNKT1細(xì)胞亦可抗癌。NKT1(包括iNKT1和dNKT1)和NKT2(包括iNKT2和dNKT2)細(xì)胞分泌的細(xì)胞因子與Th1、Th2細(xì)胞分泌的因子一致，NKT1分泌Th1細(xì)胞因子，NKT2分泌Th2細(xì)胞因子。Th1細(xì)胞因子(促炎因子)有IL-1、IL-2、IL-12、TNF-α和IFN-γ，Th2細(xì)胞因子(抗炎因子)有IL-4、IL-10。Th1/Th2細(xì)胞因子在調(diào)節(jié)宿主免疫應(yīng)答的各階段起著重要作用，所以NKT細(xì)胞的功能分別由其分泌的細(xì)胞因子決定。在腫瘤免疫方面，分泌Th1細(xì)胞因子的iNKT1、dNKT1主要起到抗癌作用，分泌Th2細(xì)胞因子的iNKT2、dNKT2起到促癌作用[6]。另有研究表明dNKT細(xì)胞通過(guò)抑制腫瘤免疫促進(jìn)腫瘤進(jìn)展，iNKT細(xì)胞可能抑制dNKT細(xì)胞的免疫抑制能力來(lái)抑制腫瘤發(fā)展[7]。因此NKT細(xì)胞分泌的細(xì)胞因子的抗癌和促癌作用，促使其在腫瘤免疫中發(fā)揮雙重調(diào)控作用。

2.2 NKT所處免疫應(yīng)答階段

NKT1細(xì)胞在腫瘤發(fā)展早期啟動(dòng)有效的抗腫瘤免疫應(yīng)答，可快速刺激腫瘤特異性T細(xì)胞、DC細(xì)胞和效應(yīng)NK細(xì)胞，這些細(xì)胞能快速清除腫瘤細(xì)胞。由于腫瘤不斷發(fā)展，NKT細(xì)胞暴露在慢性刺激中，因而部分NKT細(xì)胞消亡，剩余NKT細(xì)胞變成低反應(yīng)性狀態(tài)，失去抗腫瘤功能，最終逐漸變化為免疫抑制性NKT2細(xì)胞亞群，從而促進(jìn)免疫逃逸和腫瘤進(jìn)展。并且失活狀態(tài)的NKT1細(xì)胞保持分泌Th2細(xì)胞因子的能力，其功能逐漸向免疫抑制的NKT2細(xì)胞傾斜，最終分泌Th2細(xì)胞因子促進(jìn)腫瘤進(jìn)一步發(fā)展[6]。

2.3 NKT細(xì)胞激活物α-Galcer的結(jié)構(gòu)和功能

TCR-糖脂-CD1d復(fù)合物的親和性和穩(wěn)定性決定了α-Galcer及其類似物對(duì)NKT激活后的功能差異。在腫瘤耐受小鼠模型中，α-Galcer有強(qiáng)大的活性去激活iNKT1細(xì)胞，表現(xiàn)抗腫瘤效應(yīng)。然而α-Galcer的類似物，如OCH，可刺激iNKT1細(xì)胞分泌大量的IL-4，含量超過(guò)IFN-γ，觸發(fā)Th2細(xì)胞因子免疫反應(yīng)。另一種含苯基團(tuán)的α-Galcer的類似物，在誘導(dǎo)Th1細(xì)胞/Th1細(xì)胞因子和人NKT細(xì)胞增殖方面，比α-Galcer更有效。α-Galcer在其?；溁蛑参锴受真溕系男揎椏烧{(diào)控iNKT細(xì)胞，產(chǎn)生不同含量的IL-4和IFN-γ，使免疫應(yīng)答朝向Th1或Th2方向極化[7]。α-Galcer預(yù)處理可以使NKT細(xì)胞產(chǎn)生Th1或Th2細(xì)胞因子，使NKT1細(xì)胞向Th2或Treg樣NKT細(xì)胞傾斜。Th2/Treg樣NKT細(xì)胞產(chǎn)生大量的IL-10、IL-13，從而抑制腫瘤微環(huán)境，間接刺激腫瘤進(jìn)展[6，13]。α-Galcer及類似物激活NKT的功能差異都和TCR-糖脂-CD1d復(fù)合物的親和性和穩(wěn)定性相關(guān)。因此NKT細(xì)胞是否向Th1或Th2方向傾斜，從而發(fā)揮抗腫瘤或者促腫瘤作用，取決于NKT細(xì)胞的激活物α-Galcer的結(jié)構(gòu)和功能等。

3 NKT細(xì)胞在肝癌免疫中的雙向調(diào)控作用

3.1 NKT細(xì)胞的抗肝癌作用機(jī)制

3.1.1 NKT細(xì)胞表達(dá)CXCR6殺死肝癌細(xì)胞 激活的iNKT1細(xì)胞能以CD1d依賴的方式直接殺死腫瘤細(xì)胞[14]。幾乎所有肝臟上iNKT1細(xì)胞都能表達(dá)CXCR6，而CXCL16是CXCR6的唯一配體，肝臟中的CXCL16主要來(lái)源于肝竇內(nèi)皮細(xì)胞[15]。用抗生素處理小鼠腸道微生物，可促使肝竇內(nèi)皮細(xì)胞產(chǎn)生CXCL16，而CXCL16可以和NKT細(xì)胞的CXCR6結(jié)合，吸引更多NKT細(xì)胞聚集在肝臟，NKT細(xì)胞在肝臟大量聚集，產(chǎn)生抗腫瘤的IFN-γ，從而抑制肝癌的發(fā)生發(fā)展[16-18]。在二乙基亞硝胺誘導(dǎo)的小鼠肝癌腫瘤模型中，和野生型小鼠比較，CXCR6缺乏小鼠有更明顯的腫瘤負(fù)荷、更快的腫瘤進(jìn)展，表現(xiàn)為肝內(nèi)表達(dá)TNF-α、IFN-γ的iNKT1細(xì)胞和CD4+T細(xì)胞的減少。

3.1.2 NKT細(xì)胞清除衰老和變形的肝細(xì)胞 注射α-Galcer可激活NKT細(xì)胞，注射α-Galcer的野生型小鼠通過(guò)iNKT1細(xì)胞進(jìn)行衰老肝細(xì)胞的清除。iNKT1細(xì)胞和CD4+T細(xì)胞可通過(guò)促進(jìn)衰老肝細(xì)胞的清除，阻止肝癌的進(jìn)展，這一過(guò)程需要CXCR6的參與[19]。由于肝癌通常由變形的肝細(xì)胞(Transformed hepatocyte)發(fā)展而來(lái)，清除變形的肝細(xì)胞可抑制肝癌的生長(zhǎng)和進(jìn)展。經(jīng)過(guò)α-Galcer刺激，可激活體內(nèi)肝NKT細(xì)胞和NK細(xì)胞，產(chǎn)生大量IFN-γ有效殺死變形的肝細(xì)胞，從而抑制肝癌的進(jìn)展[20]。

3.1.3 NKT細(xì)胞抑制肝癌細(xì)胞生長(zhǎng) 肝臟NKT細(xì)胞還可抑制轉(zhuǎn)移性肝癌的發(fā)生，肝巨噬細(xì)胞可產(chǎn)生巨噬(Macrophagocyte，M)細(xì)胞反應(yīng)，M1巨噬細(xì)胞促進(jìn)Th1反應(yīng)，產(chǎn)生IL-12，IL-12可激活NK細(xì)胞和NKT1細(xì)胞，產(chǎn)生抗癌反應(yīng)，抑制肝癌細(xì)胞生長(zhǎng)，并且阻止轉(zhuǎn)移性肝癌的發(fā)生[21]。α-Galcer是影響iNKT活化及發(fā)揮腫瘤免疫調(diào)控的關(guān)鍵，可提高NKT細(xì)胞抗腫瘤免疫的能力。骨髓源樹突狀細(xì)胞(Dendritic cell，DC)和α-Galcer聯(lián)合誘導(dǎo)培養(yǎng)外周血NKT細(xì)胞，可使NKT細(xì)胞分泌高水平的IFN-γ[22]，α-Galcer處理的DC和肝癌細(xì)胞能夠激活體內(nèi)NKT細(xì)胞，同時(shí)增加NKT細(xì)胞毒性，抑制肝癌的生長(zhǎng)，提高小鼠生存周期[23]。DC荷載α-Galcer做為NKT細(xì)胞強(qiáng)有力的刺激劑，能夠激活小鼠外周血抗腫瘤免疫細(xì)胞、增加免疫細(xì)胞毒性，促進(jìn)腫瘤細(xì)胞凋亡，有效的抑制了肝癌移植瘤的生長(zhǎng)[24]。

3.2 NKT細(xì)胞的促肝癌作用機(jī)制

3.2.1 髓源性抑制細(xì)胞(Myeloid-derived suppressor cells，MDSCs)抑制NKT細(xì)胞抗腫瘤功能 NKT1細(xì)胞分泌IFN-γ產(chǎn)生抗腫瘤的功能，如受其他細(xì)胞或細(xì)胞因子的抑制，則失去抗肝臟腫瘤的功效。腫瘤源性轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β(Transforming growth factor β，TGF-β)促進(jìn)肝內(nèi)CXCL1、CXCL2、CXCL5的表達(dá)來(lái)調(diào)節(jié)MDSCs向肝臟的募集。MDSCs可通過(guò)膜結(jié)合TGF-β有選擇地抑制NKT細(xì)胞所產(chǎn)生的IFN-γ，從而抑制NKT細(xì)胞的抗肝癌功能[25]。一些類型的腫瘤可脫落抑制性糖脂到腫瘤局部微環(huán)境中，抑制NKT細(xì)胞活性和功能，使其失去抗腫瘤功效，導(dǎo)致腫瘤不良預(yù)后。除此之外，調(diào)節(jié)性T細(xì)胞和NKT2細(xì)胞都可抑制腫瘤微環(huán)境中的NKT細(xì)胞活性和功能[11，26]。

3.2.2 NKT細(xì)胞分泌IL-13抑制抗腫瘤免疫應(yīng)答 NKT2細(xì)胞抑制抗腫瘤免疫的現(xiàn)象最初在纖維肉瘤和乳腺癌小鼠模型中發(fā)現(xiàn)，后來(lái)陸續(xù)在結(jié)直腸癌、肝癌等腫瘤中發(fā)現(xiàn)[27-29]。dNKT2分泌IL-13，可介導(dǎo)Gr-1細(xì)胞產(chǎn)生TGF-β。盡管包括肝臟在內(nèi)的多種器官腫瘤發(fā)生的早期階段，TGF-β起著抑制腫瘤的作用，但TGF-β可通過(guò)上調(diào)Snail促進(jìn)小鼠肝臟腫瘤的發(fā)生[30-31]，還可通過(guò)分泌的IL-13抑制腫瘤特異CD8+T細(xì)胞及細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞，來(lái)抑制腫瘤免疫監(jiān)視，進(jìn)而促進(jìn)腫瘤進(jìn)展。肝M2巨噬細(xì)胞可通過(guò)釋放TGF-β來(lái)抑制NK細(xì)胞和NKT細(xì)胞的抗腫瘤特性，還可通過(guò)表達(dá)M2極性，參與腫瘤生長(zhǎng)、進(jìn)展和血管生成[21]。

3.2.3 NKT細(xì)胞分泌的LIGHT促進(jìn)肝損傷和癌變 LIGHT是淋巴毒素β受體(LTβR)的配體，能激活肝實(shí)質(zhì)細(xì)胞上的LTβR，導(dǎo)致脂肪攝取增加和脂肪變性。LIGHT能激活肝細(xì)胞NF-κB信號(hào)，促進(jìn)肝細(xì)胞惡性轉(zhuǎn)化。肝NKT細(xì)胞積累一定程度后，通過(guò)分泌LIGHT(TFNSF14)促進(jìn)非酒精性脂肪肝(Nonalcoholic fatty liver disease，NAFLD)癌變[32]。在CD8+T細(xì)胞的協(xié)同下，NKT細(xì)胞可通過(guò)Light-LTβR信號(hào)通路有效地加強(qiáng)肝細(xì)胞內(nèi)脂肪酸的攝入，使肝損傷加重，非酒精性脂肪肝炎惡化和促進(jìn)肝癌進(jìn)展。而選擇性移除肝細(xì)胞的LTβR或去除NKT細(xì)胞可減少CD-HFD介導(dǎo)的肝癌的發(fā)生[33]。

4 小結(jié)與展望

目前對(duì)NKT細(xì)胞在肝癌免疫調(diào)控方面研究最多的是NKT1和NKT2細(xì)胞，對(duì)NKT10、NKT17、NKTFH和NKTreg細(xì)胞研究甚少。NKT細(xì)胞在肝癌免疫調(diào)控中的作用，主要由其分泌的Th1和Th2細(xì)胞因子決定。分泌Th1細(xì)胞因子的NKT1細(xì)胞參與抗肝癌免疫應(yīng)答，分泌Th2細(xì)胞因子的NKT2細(xì)胞引起肝癌細(xì)胞損傷和癌變，抑制免疫細(xì)胞監(jiān)視促進(jìn)肝癌進(jìn)展。肝臟NKT細(xì)胞可在一定條件下向Th1或Th2傾斜，從而具有截然不同的肝癌免疫應(yīng)答反應(yīng)[6]，如何調(diào)節(jié)肝臟中NKT細(xì)胞的Th1/Th2傾斜方向，促進(jìn)其抗肝癌功效，逆轉(zhuǎn)其免疫抑制功能應(yīng)是未來(lái)研究的方向。此外，NKT細(xì)胞參與肝癌免疫應(yīng)答的進(jìn)程受腸道菌群代謝的間接影響，通過(guò)調(diào)節(jié)腸道菌群代謝干預(yù)NKT細(xì)胞調(diào)控肝癌進(jìn)展的功能，或是抗肝癌新療法[34]。