聶延君，王文心，鄭靜，竇艷麗，徐玉文

(山東省食品藥品檢驗研究院，山東 濟南 250101)

草酸艾司西酞普蘭(escitalopram oxalate)是西酞普蘭的右旋對映體(見圖1)，是一種選擇性5-羥色胺再攝取抑制劑(SSRI)，可抑制5-羥色胺的再攝取，主要用于治療抑郁障礙，治療伴有或不伴有廣場恐懼癥的驚恐障礙[1-3]。該藥具有作用強、起效快、代謝快和耐受性好的特點，是一線抗抑郁藥[4-5]。該藥由Forest Laboratories和丹麥的 Lundbeck 公司聯(lián)合研究開發(fā)，2002年3月首次以商品名Laxapro在瑞典上市[6]。西安楊森制藥有限公司于2006年獲得進(jìn)口藥品分裝批準(zhǔn)文號，該品種開始在國內(nèi)上市，目前國內(nèi)已有5家企業(yè)的仿制藥在市場上銷售。

草酸艾司西酞普蘭片是2016年國家評價性抽驗品種之一，共收集到了81批樣品，規(guī)格有：5、10和20 mg 3種，來自國內(nèi)5家仿制藥企業(yè)和原研進(jìn)口丹麥靈北制藥廠(Lundbeck)，企業(yè)覆蓋率達(dá)到了100%。該品種在《中國藥典》尚未收載，現(xiàn)行國外藥典中僅《美國藥典》第41版(USP41)收載。探索性研究發(fā)現(xiàn)國內(nèi)部分企業(yè)與原研樣品間有關(guān)物質(zhì)差異較大，因此，為了更好提高產(chǎn)品質(zhì)量，找到影響有關(guān)物質(zhì)的關(guān)鍵因素，本文參照USP41有關(guān)物質(zhì)檢查方法開展了溫濕度、輔料相容性、包裝材料性能比較、水活度等一系列試驗，為制定合理的處方工藝和儲存方法，提高樣品穩(wěn)定性提供參考。

圖1 草酸艾司西酞普蘭和相關(guān)雜質(zhì)結(jié)構(gòu)

1 儀器與試藥

1.1 儀器 Waters e2695高效液相色譜儀(美國Waters公司)；Novasina Lab Master水活度測定儀(瑞士Novasina公司)；KBF-P240恒溫恒濕箱(德國Binder公司)。

1.2 試藥 81批樣品分別來自丹麥靈北(Lundbeck)和國內(nèi)A、B、C、D和E企業(yè)，草酸艾司西酞普蘭原料藥由浙江華海藥業(yè)股份有限公司提供(批號：5357-15-006)，雜質(zhì)A對照品(USP，批號：R015E0，含量100%)，雜質(zhì)B對照品(USP，批號：G0L552，含量100%)，雜質(zhì)C對照品(USP，批號：R030U0，含量100%)，雜質(zhì)D對照品(USP，批號：R01270，含量100%)，雜質(zhì)E對照品(USP，批號：G0M155，含量100%)，磷酸、氫氧化鈉、磷酸二氫鉀均為分析純；乙腈為色譜純。

2 方法與結(jié)果

2.1 測定方法 參考USP41草酸艾司西酞普蘭有關(guān)物質(zhì)檢查方法[7]，采用資生堂Capcell C18柱；流動相A為0.025 mol·L-1磷酸鹽溶液(pH 3.0)-乙腈(9∶1)，流動相B為0.025 mol·L-1磷酸鹽溶液(pH 3.0)-乙腈(7∶13)，梯度洗脫：0～35 min，95%→65% A，35～45 min，65%→0% A，45.1～60 min，0%→0% A，60.1～68 min，95%→95% A；柱溫為 45 ℃；檢測波長為 237 nm；進(jìn)樣量為 20 μL。圖譜見圖2。

1.草酸；2.雜質(zhì)A；3.雜質(zhì)B；4.雜質(zhì)C；5.雜質(zhì)D；6.艾司西酞普蘭；7.雜質(zhì)E圖2 草酸艾司西酞普蘭相關(guān)雜質(zhì)圖譜和結(jié)構(gòu)式圖譜

2.2 方法學(xué)驗證 ①專屬性試驗：分別采用強酸、強堿、光照、氧化和加熱的方式對草酸艾司西酞普蘭片進(jìn)行破壞性試驗，結(jié)果雜質(zhì)與主峰以及雜質(zhì)之間的分離度均較好，能夠有效分離，雜質(zhì)A、B、C和E為主要的降解雜質(zhì)；②重復(fù)性試驗：在空白輔料溶液中定量加入草酸艾司西酞普蘭對照品，分別制備濃度為1 μg·mL-1的6份樣品溶液進(jìn)行重復(fù)性試驗，RSD值小于2.0%；③穩(wěn)定性試驗：取0.5 mg·mL-1的供試品溶液，在0、2、4、6、8 h分別進(jìn)樣，結(jié)果8 h內(nèi)的峰面積RSD值小于2.0%； ④線性試驗：草酸艾司西酞普蘭對照品在0.05～10 μg·mL-1濃度范圍內(nèi)呈線性，相關(guān)系數(shù)r=1.000；⑤回收率試驗： 取已知含量的草酸艾司西酞普蘭供試品溶液9份，分別定量加入對照品溶液，制備成2.0、2.2、2.4 μg·mL-1的溶液各3份，直接進(jìn)樣，回收率在98%～101%之間，RSD值小于2.0%；⑥檢出限和定量限：分別取對照品適量，用流動相A逐步稀釋，定容，進(jìn)樣測定，當(dāng)草酸艾司西酞普蘭峰信噪比(S/N)為3時，即為檢出限，信噪比(S/N)值在10時，即為定量限；結(jié)果草酸艾司西酞普蘭檢出限為0.05 ng和0.15 ng。

2.3 檢驗結(jié)果 本次試驗收集到的樣品已知雜質(zhì)A、B、C、E含量，其他單個雜質(zhì)含量和雜質(zhì)總量均低于擬定限度和USP41 限度，均符合規(guī)定，但6家企業(yè)樣品間具有較大差異，結(jié)果見圖3、表1。以最大單個雜質(zhì)(雜質(zhì)C)為例，企業(yè)B樣品中雜質(zhì)C含量最高，平均為0.27%，而原研為0.13%，相差1倍?？傠s上，企業(yè)E樣品最大的為0.70%，是原研的3.5倍，企業(yè)D的8倍，企業(yè)E樣品批間差異均明顯大于其他企業(yè)。國內(nèi)D企業(yè)和原研Lundbeck的樣品雜質(zhì)水平相當(dāng)，甚至優(yōu)于原研。企業(yè)B和E的樣品雜質(zhì)離散性較大，可能與生產(chǎn)工藝和儲存環(huán)境有關(guān)。

圖3 有關(guān)物質(zhì)檢查結(jié)果匯總

雜質(zhì)A(%) 雜質(zhì)B(%) 雜質(zhì)C(%)雜質(zhì)E(%)其他單雜(%)雜質(zhì)總量(%)企業(yè) A0～0.0040.04～0.050.04～0.090.03～0.040～0.010.19～0.20企業(yè) B0～0.030～0.110.10～0.300～0.090～0.020.28～0.59企業(yè) C0.004～0.010.04～0.070.14～0.160.05～0.0600.40～0.41企業(yè) D000.01～0.050.006～0.0100.07～0.09企業(yè) E0～0.0080～0.130.05～0.280.01～0.050.01～0.110.13～0.70原研企業(yè)000.130.030.030.20USP41 限度0.30.50.50.20.202.0

2.3 影響因素考察

2.3.1 溫濕度影響試驗 取6家企業(yè)樣品放置在溫度60 ℃ ，相對濕度75%的恒溫恒濕箱中15 d、30 d，考察有關(guān)物質(zhì)變化情況。結(jié)果見圖4，6家企業(yè)樣品總雜質(zhì)均顯著增加，在常溫環(huán)境下，6家企業(yè)樣品的總雜質(zhì)均低于0.5%，但在高溫高濕環(huán)境下雜質(zhì)明顯增多，其中C企業(yè)樣品降解最為明顯，雜質(zhì)生成最多，30 d樣品的雜質(zhì)總量高達(dá)7.2%，是0 d的18倍。原研企業(yè)Lundbeck和國內(nèi)D兩家企業(yè)樣品降解水平相當(dāng)，雜質(zhì)增加最少的為企業(yè)D樣品，30 d雜質(zhì)總量為1.7%，與企業(yè)C結(jié)果相差5.2%，由此可見不同企業(yè)樣品受溫濕度的影響程度不一樣。

圖4 溫濕度試驗結(jié)果

2.3.2 輔料相容性試驗 參照《化學(xué)藥物制劑研究基本技術(shù)指導(dǎo)原則》[7]，用量較大的輔料(微晶纖維素MCC、淀粉、乳糖)按主藥∶輔料=1∶5的比例混合，用量較小的輔料(二氧化硅、硬脂酸鎂、羧甲基淀粉鈉)按主藥∶輔料 =20∶1的比例混合，并同時與同批號原料藥一起放置在溫度60 ℃，相對濕度75%條件下30 d，考察有關(guān)物質(zhì)變化情況。結(jié)果見圖5，微晶纖維素、二氧化硅、硬脂酸鎂等輔料可明顯加速樣品降解，雜質(zhì)總量增加顯著。由此可見，輔料對有關(guān)物質(zhì)有影響較大。

圖5 原輔料相容性研究結(jié)果

2.3.3 包裝材料性能比較 6家企業(yè)的包裝材料有鋁塑板、鋁塑板加鋁箔袋或內(nèi)加干燥劑。取6家企業(yè)樣品分別采用不帶包裝和帶包裝兩種形式在溫度60 ℃相對濕度75%試驗條件下放置30 d，考察樣品降解情況。結(jié)果見圖6，在樣品帶包裝時，E企業(yè)雜質(zhì)最多，總量達(dá)到4.7%。除去包裝后，6家企業(yè)樣品均出現(xiàn)不同程度的降解，雜質(zhì)明顯增多，如C企業(yè)樣品雜質(zhì)總量是帶包裝樣品的5.3倍，由此可見其包裝材料對樣品穩(wěn)定性起到了良好的保護(hù)作用，包材阻隔性能好。而E企業(yè)不論包裝與否，樣品雜質(zhì)均較大，其包裝材料的阻隔性最差，從而呈現(xiàn)出不同企業(yè)間的包材質(zhì)量具有較大差異。

圖6 包裝材料性能比較

2.3.4 水活度測定 采用Novasina Lab Master水活度測定儀測定了52批樣品的水活度，5家企業(yè)樣品的水活度相差較大(見圖7)，其中E公司樣品水活度高于其他4家企業(yè)，該企業(yè)樣品在單雜和總雜上均高于其他企業(yè)。將水活度結(jié)果與雜質(zhì)A、B、C、E和總雜質(zhì)進(jìn)行相關(guān)性分析。結(jié)果見表2，水活度與雜質(zhì)B、雜質(zhì)E和總雜質(zhì)均具有相關(guān)性，且相關(guān)顯著。由此可見，水活度是影響草酸艾司西酞普蘭片有關(guān)物質(zhì)的關(guān)鍵因素。

圖7 水活度測定結(jié)果

雜質(zhì)A雜質(zhì)B雜質(zhì)C雜質(zhì)E總雜質(zhì)皮爾森相關(guān)系數(shù)-0.1990.4030.2690.7850.397AwP0.1580.0030.0530.0360.004n5252525252

注：P<0.05表示顯著相關(guān)

3 討論

3.1 比較國內(nèi)5家仿制藥和原研進(jìn)口樣品的有關(guān)物質(zhì)發(fā)現(xiàn)不同企業(yè)間總雜質(zhì)和單雜間差別較大，原研樣品的總雜和單雜均較少，國內(nèi)部分企業(yè)樣品離散性大，樣品批間差異明顯，表現(xiàn)出國內(nèi)的草酸艾司西酞普蘭片質(zhì)量參差不齊，部分企業(yè)質(zhì)量亟待提高。

3.2 溫濕度以及包裝材料性能比較試驗均表明水是影響草酸艾司西酞普蘭片穩(wěn)定性的關(guān)鍵因素。因此，在生產(chǎn)制備過程中需密切注意水的量，應(yīng)降低生產(chǎn)環(huán)境的濕度和原輔料中的水分，防止原輔料受潮引發(fā)降解。儲存過程中采用阻隔性能較好的包裝材料或者在包裝袋內(nèi)添加干燥劑，使樣品儲存于較干燥環(huán)境中。

3.3 試驗中原研Lundbeck和國內(nèi)D兩家企業(yè)樣品的有關(guān)物質(zhì)均處于較低水平，調(diào)研發(fā)現(xiàn)這兩家企業(yè)均采用粉末直接壓片法制備樣品，其余4家企業(yè)為濕法制粒壓片法。草酸艾司西酞普蘭易受濕熱影響，而粉末直接壓片法沒有濕法制粒、干燥過程，避免了藥物受濕熱影響，較少輔料的用量，更有利于藥物穩(wěn)定性[8]，因此推薦草酸艾司西酞普蘭片采用粉末直接壓片法進(jìn)行制備。

3.4 輔料相容性試驗表明微晶纖維素、二氧化硅、硬脂酸鎂等輔料均對草酸艾司西酞普蘭產(chǎn)生不利影響，可引起主成分降解，使雜質(zhì)明顯增加。對上述幾種輔料深入分析，微晶纖維素是一種多孔微粒組成的晶體粉末，吸水和保水能力強[9]。藥用二氧化硅為具有吸濕性，能吸收大量水分而不液化[10]。硬脂酸鎂比表面積大，具有極強的吸附作用和吸濕性[11]。這3種輔料均具有一定的吸濕性，在生產(chǎn)制備以及儲存過程中均可吸收水分，從而對主藥產(chǎn)生不利影響，引起主藥降解。國內(nèi)仿制企業(yè)的處方中均加入了微晶纖維素，而原研企業(yè)則采用了含2%微粉硅膠的微晶纖維素作填充劑，為提高藥品穩(wěn)定性，建議國內(nèi)仿制藥企業(yè)調(diào)整處方，減少使用微晶纖維素、二氧化硅、硬脂酸鎂等易吸濕的輔料。