張銀龍，湯繼輝，李巧霞，高文遠，霍彩霞

帕博西尼(palbociclib)是全球首個上市的細胞周期蛋白依賴性激酶(cellular-dependent kinase，CDK)4 /6 抑制劑，聯(lián)合來曲唑用于絕經(jīng)后婦女雌激素受體陽性(estrogen-receptor-positive，ER+)、人表皮生長因子受體2陰性(human-epidermal-growth-receptor-2-negative，HER2-)的晚期或轉(zhuǎn)移性乳腺癌的初始內(nèi)分泌治療。美國食品藥品監(jiān)督管理局(food and drug administration，F(xiàn)DA)于2015年2月加速批準原研廠家輝瑞制藥的帕博西尼膠囊上市，商品名：IBRANCE?，規(guī)格：125 mg、100 mg和75 mg，推薦初始劑量：每天125 mg，與食物同服，連續(xù)服藥21 d后，停藥7 d[1]。本產(chǎn)品市場潛力巨大但目前尚未在國內(nèi)上市[2]。

本試驗自2015年6月至2016年12月以125 mg規(guī)格帕博西尼膠囊原研參比制劑為對照，根據(jù)參比制劑說明書中公布的輔料種類為基礎(chǔ)，首先以自制制劑和參比制劑在pH 4.5醋酸鹽緩沖液和含0.5 %十二烷基硫酸鈉(sodium dodecyl sulfate ，SDS)的水溶液中溶出曲線相似因子(similarity factor，f2)為評價指標，進行帕博西尼膠囊處方篩選，然后測定優(yōu)化后的自制制劑在四種溶出介質(zhì)的溶出曲線，并與參比制劑溶出曲線相比較，以期獲得在四種溶出介質(zhì)與參比制劑體外溶出曲線一致的帕博西尼膠囊自制制劑。

1 儀器與試藥

1.1儀器BSA2202和CPA225D電子天平(德國賽多利斯有限公司)；RC8M溶出實驗儀(天大天發(fā)科技有限公司)；UV-2450型紫外可見分光光度計(日本島津有限公司)；HTD200柱式料斗混合機(浙江迦南科技股份有限公司)；Z40F膠囊填充機(山東新馬制藥裝備有限公司)。

1.2藥品與試劑帕博西尼原料(北京澳合藥物研究院有限公司，批號：20150801，含量：99.8%)；帕博西尼原料(廊坊高博京邦制藥有限公司，批號：160401，含量：99.9%；批號：160402，含量：99.6%；批號：160501，含量：99.7%)；帕博西尼膠囊(美國輝瑞制藥有限公司，批號：J7977OP2)；帕博西尼膠囊(北京四環(huán)制藥有限公司，批號：160501，160504，160507)；無水直壓乳糖(美國Kerry有限公司，批號：1320020633)；微晶纖維素PH102(microcrystalline cellulose，MCC,山東聊城阿華制藥股份有限公司，批號：20150404)；羧甲淀粉鈉(臺灣永日化學工業(yè)股份有限公司，批號：SSG2015004)；二氧化硅(湖州展望藥業(yè)有限公司，批號：20160408)；硬脂酸鎂(遼寧奧達制藥有限公司，批號：20150402)；膠囊殼(蘇州膠囊有限公司，批號：12860434)；十二烷基硫酸鈉(天津福晨化學試劑有限公司，批號：20150108)。其他試劑均為分析純。

2 方法和結(jié)果

2.1溶出測定方法

2.1.1檢測波長的選擇 精密稱取帕博西尼標準品，配制濃度約為10 μg/mL的帕博西尼對照溶液，取對照溶液，在190～400 nm進行紫外掃描(圖1)，選擇最大吸收波長365 nm作為檢測波長。

圖1 帕博西尼紫外吸收光譜圖

2.1.2方法專屬性 空白輔料在365 nm波長處無吸收(圖2)，不干擾樣品測定，符合專屬性規(guī)定。

2.1.3線性關(guān)系與范圍 精密稱取帕博西尼標準品，配制濃度約為200 μg/mL的帕博西尼對照儲備液，分別精密量取0.5、1、2、3、4、5 mL對照儲備液于50 mL容量瓶中，用0.1 mol/L鹽酸溶液稀釋至刻度，搖勻，配制實際濃度(C)分別為2.026、4.052、8.140、12.156、16.208、20.260 μg/mL的帕博西尼溶液，分別在365 nm處測定吸光度值，以吸光度值(A)對濃度進行線性回歸，得回歸方程A=0.058 6C+0.009 6(R2= 0.999 9)，結(jié)果表明，在2.206～20.260 μg/mL濃度范圍內(nèi)，吸光度值與濃度線性關(guān)系良好(圖3)。

圖2 空白輔料紫外掃描圖譜

圖3 帕博西尼標準曲線

2.1.4回收率試驗 精密稱取處方量輔料15份，分別置于500 mL容量瓶中，分別精密稱取主藥約75、60、45、22.5和11.25 mg各3份加入各容量瓶中，加0.1 mol/L鹽酸溶液溶解，定容，過濾，取續(xù)濾液適量用0.1 mol/L鹽酸溶液制成帕博西尼濃度分別為15、12、9、4.5和2.25 μg/mL的溶液各3份，365 nm波長處分別測定吸光度，按外標法計算回收率。各濃度水平回收率均在98.0%～102.0%之間(表1)，RSD均小于2.0 %，溶出回收率符合要求。

2.1.5儀器精密度 取對照溶液，在365 nm處重復6次測定吸光度值分別為0.600、0.601、0.602、0.599、0.602、0.601，平均0.601，計算儀器精密度，RSD為0.19%，小于2.0 %，符合儀器精密度要求。

表1 帕博西尼回收率實驗結(jié)果

2.1.6溶液穩(wěn)定性 取各溶出介質(zhì)的樣品溶液，分別在(37±0.5)℃放置8 h，分別于0、2、4、6、8 h，在365 nm處測定樣品吸光度值，結(jié)果表明，各溶出介質(zhì)下的樣品溶液的吸光度值在8 h內(nèi)無明顯變化，RSD均小于2.0 %，符合規(guī)定，表明各介質(zhì)的樣品溶液在(37±0.5)℃下，8 h內(nèi)穩(wěn)定(表2)。

2.1.7溶出介質(zhì)選擇 測定帕博西尼膠囊參比制劑在0.1 mol/L鹽酸溶液、pH 4.5醋酸鹽緩沖液、pH 6.8磷酸鹽緩沖液和純化水的溶出曲線(圖4)。顯示在pH 6.8磷酸鹽緩沖液和純化水中60 min僅溶出約14.0 %，幾乎沒有區(qū)分能力。因此進一步考察其在不同濃度SDS的水溶液和pH 6.8磷酸鹽緩沖液中的溶出曲線(圖5)，顯示在含0.5% SDS的水溶液和含0.5% SDS的pH 6.8磷酸鹽緩沖液中60 min可溶出90.0%以上，綜合考慮，選擇0.1 mol/L鹽酸溶液、pH 4.5醋酸鹽緩沖液、含0.5% SDS的pH 6.8緩沖液和含0.5% SDS的水溶液作為帕博西尼膠囊溶出測定的溶出介質(zhì)。

表2 各溶出介質(zhì)的帕博西尼溶出溶液在不同時間吸光度值比較

圖4 帕博西尼膠囊在不同介質(zhì)中的溶出曲線

圖5 帕博西尼膠囊在含不同濃度的SDS水溶液中的溶出曲線

2.1.8溶出測定方法 參照FDA[3]公布的帕博西尼膠囊溶出方法，具體測定方法如下：

取帕博西尼膠囊，照溶出度測定法[《中國藥典》(ChP)2015年版四部通則0931第二法]，溶出介質(zhì)(① 0.1 mol/L鹽酸溶液;②pH 4.5醋酸鹽緩沖液;③含0.5 % SDS的pH 6.8磷酸鹽緩沖液;④含0.5 % SDS的水溶液)900 mL，轉(zhuǎn)速為50 r/min，依法操作，經(jīng)指定時間點(5、10、15、30、45和60 min)，取溶液7 mL(同時補加等溫介質(zhì)7 mL)，經(jīng)0.45 μm水系濾膜濾過。精密量取續(xù)濾液1 mL，置10 mL量瓶中，加0.1 mol/L鹽酸溶液稀釋至刻度，搖勻，作為樣品溶液。照紫外-可見分光光度計[《中華人民共和國藥典》(ChP)2015年版四部通則0401]，在365 nm波長處測定吸光度值，按照外標法計算溶出度，繪制溶出曲線。采用f2法評價自制制劑和參比制劑的體外溶出行為一致性。

2.2處方篩選原研參比制劑說明書中披露了帕博西尼膠囊內(nèi)容物所含有的非活性成分：乳糖、微晶纖維素、羧甲淀粉鈉、二氧化硅和硬脂酸鎂。參照原研參比制劑帕博西尼膠囊內(nèi)容物輔料組成，選擇無水直壓乳糖、微晶纖維素PH102、羧甲淀粉鈉、二氧化硅和硬脂酸鎂進行處方篩選。

原研參比制劑帕博西尼膠囊內(nèi)容物不含有黏合劑，推測其內(nèi)容物采用干法制?；蛑苯踊旌瞎に囍瞥?。觀察其內(nèi)容物性狀，為均勻的粉末，未發(fā)現(xiàn)有顆粒，進一步確定參比制劑采用原輔料粉末混合，直接灌裝膠囊的基本工藝。將內(nèi)容物稱重，為450 mg。初步確定制備工藝如下：

準確稱取處方量的帕博西尼、無水直壓乳糖、微晶纖維素PH102、羧甲淀粉鈉和二氧化硅，混合均勻，稱取處方量的硬脂酸鎂，混合均勻，得帕博西尼膠囊總混粉末，灌裝0 #膠囊，每粒450 mg。

2.2.1填充劑比例篩選 設(shè)計不同填充劑比例的處方(表3)，測定其在pH 4.5醋酸鹽緩沖液和含0.5% SDS的水溶液中的溶出曲線，結(jié)果見表4。試驗結(jié)果表明：三批自制制劑與參比制劑在pH 4.5醋酸鹽緩沖液中溶出曲線均一致(f2> 50)，相似性順序：R3>R2>R1。三批自制制劑與參比制劑在含0.5% SDS的水溶液中的溶出曲線均不一致(f2<50)，相似性順序：R2>R1>R3。綜合考慮優(yōu)選MCC /乳糖比例為1∶4(R2)。

表3 填充劑比例篩選處方表/(毫克/片)

2.2.2崩解劑用量篩選 設(shè)計不同崩解劑用量的處方(表5)，測定其在pH 4.5醋酸鹽緩沖液和含0.5% SDS的水溶液中的溶出曲線，結(jié)果見表6。試驗結(jié)果表明：自制制劑在pH 4.5醋酸鹽緩沖液中前期溶出隨著崩解劑用量的增加而變快，與參比制劑在pH 4.5醋酸鹽緩沖液中溶出曲線均一致(f2> 50)，相似性順序：R2>R5>R4。崩解劑用量在3.00～9.00 %范圍內(nèi)，對自制制劑在含0.5% SDS的水溶液中的溶出無明顯影響，與參比制劑溶出曲線均不一致(f2< 50)，因此需要進一步優(yōu)化處方。

2.2.3崩解劑廠家篩選 在處方R2基礎(chǔ)上，設(shè)計不同崩解劑廠家的處方，測定其在pH 4.5醋酸鹽緩沖液和含0.5 % SDS的水溶液中的溶出曲線，結(jié)果見表7。試驗結(jié)果表明：三批自制制劑與參比制劑在pH 4.5醋酸鹽緩沖液中溶出曲線均一致(f2> 50)。采用法國羅蓋特和臺灣永日化學的羧甲淀粉鈉制備的自制制劑R6和R7與參比制劑在含0.5% SDS的水溶液中的溶出曲線一致(f2> 50)，因法國羅蓋特制藥的羧甲淀粉鈉無進口注冊證，優(yōu)選臺灣永日化工的羧甲淀粉鈉作為本產(chǎn)品的崩解劑。

表4 填充劑比例篩選溶出結(jié)果

表5 崩解劑用量篩選處方表/(毫克/片)

2.2.4原料粒度篩選 在處方R7基礎(chǔ)上，設(shè)計不同原料粒度的處方，測定其在pH 4.5醋酸鹽緩沖液和含0.5% SDS的水溶液中的溶出曲線，結(jié)果見表8。試驗結(jié)果表明：自制制劑在pH 4.5醋酸鹽緩沖液和含0.5% SDS的水溶液中的溶出隨著原料藥粒度的減小而明顯變快，自制制劑R7和R8與參比制劑在pH 4.5醋酸鹽緩沖液中溶出曲線一致(f2>50)，相似性順序：R7>R8。自制制劑R7和R9與參比制劑在含0.5% SDS的水溶液中溶出曲線一致(f2>50)，相似性順序：R7>R9。

測定自制制劑R7在0.1 mol/L鹽酸溶液和含0.5% SDS的pH 6.8磷酸鹽緩沖液中的溶出曲線，自制制劑R7和參比制劑在0.1 mol/L鹽酸溶液(15 min累積溶出度大于85.0 %)和含0.5% SDS的pH 6.8磷酸鹽緩沖液(f2>50)中的溶出曲線一致。

綜合自制制劑溶出測定結(jié)果，初步確定處方R7為最優(yōu)處方。

表6 崩解劑用量篩選溶出結(jié)果

表7 崩解劑廠家篩選溶出結(jié)果

表8 原料粒度篩選溶出結(jié)果

2.3中試樣品制備在上述處方R7原輔料種類不變的基礎(chǔ)上，分別采用三批原料藥(D90分別為15.39、17.65和12.48 μm)，原輔料混合后直接灌裝膠囊的基本工藝，進行3批2.4萬粒的中試樣品的制備，測定3批中試樣品在四種溶出介質(zhì)中的溶出曲線，并與原研參比制劑比較，結(jié)果見表9和圖6～9。由表9和圖6～9可知，自制制劑與參比制劑在四種溶出介質(zhì)中的溶出曲線均一致，表明處方工藝可行。

最終確定帕博西尼膠囊內(nèi)容物：微晶纖維素 PH102 / 無水直壓乳糖為1∶4，臺灣永日化學的羧甲淀粉鈉為6.00 %，原料藥粒度D90為12.00～18.00 μm。單劑量處方：帕博西尼125.00 mg，無水直壓乳糖231.20 mg，微晶纖維素PH102 57.80 mg，羧甲淀粉鈉27.00 mg，二氧化硅4.50 mg，硬脂酸鎂4.50 mg。

表9 自制制劑和參比制劑溶出曲線比較

圖6 帕博西尼膠囊在0.1 mol·L-1鹽酸溶液中的溶出曲線

圖7 帕博西尼膠囊在pH 4.5醋酸鹽緩沖液中的溶出曲線

圖8 帕博西尼膠囊在含0.5 % SDS的pH 6.8磷酸鹽緩沖液中的溶出曲線

圖9 帕博西尼膠囊在含0.5 % SDS的水溶液中的溶出曲線

2.4溶出、性狀和水分穩(wěn)定性研究以高密度聚氯乙烯塑料瓶(內(nèi)加干燥劑)為包裝材料，經(jīng)加速條件(40 ℃±2 ℃，RH 75%±5%)下放置6個月，考察帕博西尼膠囊溶出曲線、內(nèi)容物性狀和水分，結(jié)果見表10～11。由表11可知，自制制劑加速條件下放置6個月，與0月相比，溶出曲線、內(nèi)容物性狀和水分無明顯變化。

表10 自制制劑內(nèi)容物性狀和水分穩(wěn)定性考察結(jié)果

表11 自制制劑加速(40 ℃±2 ℃，RH 75%±5%)6個月樣品溶出數(shù)據(jù)

3 討論

羧甲淀粉鈉由淀粉經(jīng)過適度交聯(lián)反應后,在適宜的堿性條件下與一氯乙酸進行醚化反應得到，產(chǎn)品的黏度和取代度影響其崩解性能[4]。與遼寧奧達制藥的羧甲淀粉鈉相比，采用法國羅蓋特和臺灣永日化學的羧甲淀粉鈉制備的帕博西尼膠囊在含0.5 % SDS的水溶液中累積溶出度明顯變快，推測可能是不同廠家羧甲淀粉鈉的的黏度和取代度不同所致。

原料藥粒度是影響藥物體外溶出的重要因素，一般來說，原料藥粒度越小，表面積越大，體外溶出越快[5-6]。本文考察帕博西尼原料藥粒度對帕博西尼膠囊體外溶出的影響，體外累積溶出度隨著原料藥的粒度的減少而變快。

體外溶出度實驗是篩選制劑處方和控制其質(zhì)量的重要手段，因為它和藥物的生物利用度相關(guān)。以f2評價自制制劑和參比制劑的溶出度曲線現(xiàn)已被廣泛應用[7-9]。當f2值在50～100時，認為兩制劑的體外溶出行為一致；f2值愈接近100，相似程度就愈高；f2值< 50時，則認為兩制劑的體外溶出行為不一致。

本課題通過原輔料直接混合，然后灌裝膠囊的基本工藝，制備帕博西尼膠囊，工藝簡單易行，制備的3批自制制劑與參比制劑在四種溶出介質(zhì)中的溶出曲線均一致。自制制劑加速條件下放置6個月，與0月相比，溶出曲線、內(nèi)容物性狀和水分無明顯變化，表明篩選的帕博西尼膠囊處方可行。