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      比較time-lapse培養(yǎng)和常規(guī)體外受精胚胎培養(yǎng)對(duì)臨床結(jié)局的影響

      2019-04-21 13:36:25陳博孫曉巖韓臨曉李青洋趙麗蔡昭煒陳雪梅
      中外醫(yī)學(xué)研究 2019年30期

      陳博 孫曉巖 韓臨曉 李青洋 趙麗 蔡昭煒 陳雪梅

      【摘要】 目的:比較延時(shí)攝像胚胎觀測(cè)技術(shù)(time-lapse)培養(yǎng)和常規(guī)體外受精(IVF-ET)胚胎培養(yǎng)對(duì)臨床結(jié)局的影響。方法:回顧性分析2016年8月-2017年5月58例time-lapse培養(yǎng)周期和125例常規(guī)IVF胚胎培養(yǎng)周期的臨床結(jié)果。比較time-lapse培養(yǎng)周期和常規(guī)IVF胚胎培養(yǎng)周期的卵裂數(shù)、D3優(yōu)質(zhì)胚胎數(shù)、D3可用胚胎數(shù)、種植率、臨床妊娠率。結(jié)果:time-lapse培養(yǎng)周期組和常規(guī)IVF胚胎培養(yǎng)周期組的卵裂數(shù)、D3優(yōu)質(zhì)胚胎數(shù)、D3可用胚胎數(shù)、多胎率、種植率、累計(jì)移植次數(shù)和累計(jì)妊娠率比較差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05),兩組臨床妊娠率(62.5% vs 41.0%)比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。結(jié)論:延時(shí)攝像胚胎觀測(cè)技術(shù)(time-lapse)有助于預(yù)測(cè)胚胎發(fā)育潛能,可以改善胚胎選擇方法,對(duì)傳統(tǒng)的胚胎挑選給予新的思路。

      【關(guān)鍵詞】 時(shí)差成像技術(shù) 胚胎培養(yǎng) 胚胎評(píng)估

      doi:10.14033/j.cnki.cfmr.2019.30.080 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼 B 文章編號(hào) 1674-6805(2019)30-0-03

      [Abstract] Objective: To compare the clinical outcomes of time-lapse embryo observation (time-lapse) and conventional in vitro fertilization (IVF-ET) embryo cultures. Method: The clinical results of 58 time-lapse cycles and 125 conventional IVF embryo culture cycles from August 2016 to May 2017 were analyzed retrospectively. The number of cleavage, number of high-quality embryos (D3), number of available embryos (D3), implantation rate and clinical pregnancy rate were compared between time-lapse lapse culture cycle and conventional IVF embryo culture cycle. Result: There was no significant difference in the number of cleavage, number of high-quality D3 embryos, number of available D3 embryos, multiple embryo rate, implantation rate, cumulative transfer times and cumulative pregnancy rate between the time-lapse cycle group and the conventional IVF cycle group (P>0.05), The clinical pregnancy rate (62.5% vs 41.0%) was statistically different between the two groups (P<0.05). Conclusion: Time-lapse imaging (time-lapse) can be used to predict the development potential of embryos, improve the method of embryo selection, and give new ideas on the selection of conventional embryos.

      [Key words] Time-lapse imaging technique Embryo culture Embryo assessment

      First-authors address: The Third Peoples Hospital of Dongguan City, Dongguan 523326, China

      在體外受精-胚胎移植(IVF-ET)過程中,胚胎的發(fā)育潛能是影響臨床結(jié)果的重要因素[1]。因此,如何正確判斷和選擇具有良好發(fā)育潛能的胚胎,保證較好的臨床妊娠結(jié)局已成為胚胎學(xué)研究的焦點(diǎn)[2-3]。延時(shí)攝像技術(shù)(time-lapse,TLI)是一種瞬時(shí)曝光連續(xù)拍攝的成像技術(shù)[4-6],通過對(duì)胚胎整個(gè)體外培養(yǎng)階段進(jìn)行監(jiān)測(cè),保證觀察過程中胚胎發(fā)育環(huán)境的穩(wěn)定,還能獲取胚胎發(fā)育各個(gè)階段的形態(tài)以及各事件發(fā)生的特定時(shí)間,為胚胎形態(tài)評(píng)估提供更為客觀、精準(zhǔn)的方式,進(jìn)而根據(jù)胚胎動(dòng)力學(xué)參數(shù)有效地評(píng)估胚胎的發(fā)育潛力,為篩選出最優(yōu)發(fā)育條件的胚胎進(jìn)行移植。本研究旨在分析比較TLI培養(yǎng)和常規(guī)IVF胚胎培養(yǎng)對(duì)臨床結(jié)果的影響,探討TLI培養(yǎng)是否更有利于選擇高潛能胚胎。

      1 資料與方法

      1.1 一般資料

      選取2016年8月-2017年5月在筆者所在醫(yī)院生殖中心行體外受精/卵胞漿內(nèi)單精子注射-胚胎移植(IVF/ICSI-ET)治療的不孕癥患者。納入標(biāo)準(zhǔn):(1)臨床方案均采用標(biāo)準(zhǔn)長(zhǎng)方案,年齡23~39歲;(2)不孕因素:女方輸卵管因素、男方少弱畸精子癥患者。排除標(biāo)準(zhǔn):女性子宮因素(如子宮肌瘤、子宮內(nèi)膜異位癥等)及其他疾病因素(卵巢儲(chǔ)備功能下降、染色體異常、多囊卵巢綜合征等)。由于Primo Vision胚胎培養(yǎng)皿(Vitrolife,瑞典)最多只能放置16個(gè)胚胎,所以所有入選周期2PN受精數(shù)≤16個(gè)。試驗(yàn)中所有患者被隨機(jī)分成TLI組和常規(guī)IVF組。其中58例周期采用TLI培養(yǎng)和125例采用常規(guī)培養(yǎng)方法。兩組患者年齡、BMI、不孕年限、基礎(chǔ)FSH、基礎(chǔ)E2、基礎(chǔ)LH、基礎(chǔ)竇卵泡數(shù)、Gn天數(shù)和Gn劑量比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05),見表1。

      1.2 方法

      1.2.1 取卵受精 取卵后根據(jù)臨床指征行IVF或ICSI。IVF授精:受精濃度為5×106/ml,過夜受精;ICSI授精:撿卵4 h剝除顆粒細(xì)胞后行ICSI。

      1.2.2 胚胎培養(yǎng) 常規(guī)組將脫顆粒胚胎轉(zhuǎn)移至卵裂皿(G-1 Plus,Vitrolife,瑞典)觀察胚胎發(fā)育情況;TLI組將正常受精胚胎轉(zhuǎn)移至Primo Vision專用培養(yǎng)皿(well of the well)[7],置于時(shí)差監(jiān)測(cè)系統(tǒng)。設(shè)置拍攝間隔頻率為10 min,7個(gè)等距的焦平掃描間隔頻率1 h,連續(xù)拍攝3 d。

      1.2.3 胚胎質(zhì)量評(píng)估 常規(guī)組培養(yǎng)至第3天,根據(jù)卵裂球數(shù)目、均一度及碎片進(jìn)行評(píng)分并挑選胚胎移植[8];TLI組在常規(guī)組的基礎(chǔ)之上參考原核消失時(shí)間(20 h 45 min~25 h)、3~4細(xì)胞的時(shí)間(<75 min)指標(biāo)[9-12]。優(yōu)質(zhì)胚胎和可用胚胎評(píng)價(jià)指標(biāo)參照胚胎試驗(yàn)室關(guān)鍵指標(biāo)質(zhì)控專家共識(shí)[13]。

      1.3 觀察指標(biāo)及評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)

      觀察兩組培養(yǎng)胚胎發(fā)育情況及培養(yǎng)臨床結(jié)局情況。移植后4~6周陰道B超下出現(xiàn)孕囊和胎心為臨床妊娠。移植后4~6周陰道B超下出現(xiàn)孕囊數(shù)量與移植胚胎數(shù)目之比為種植率;一次妊娠同時(shí)懷有2個(gè)及以上的胎兒時(shí)稱為多胎率;累計(jì)移植次數(shù)指在一個(gè)藥物刺激周期獲得全部胚胎經(jīng)過鮮胚或凍胚移植的總次數(shù);累計(jì)妊娠指在一個(gè)藥物刺激周期獲得全部胚胎經(jīng)過鮮胚或凍胚移植后獲得臨床妊娠。

      1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

      采用SPSS 19.0軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行處理,計(jì)量資料以(x±s)表示,采用t檢驗(yàn),計(jì)數(shù)資料以率(%)表示,采用字2檢驗(yàn),P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

      2 結(jié)果

      2.1 兩組胚胎發(fā)育結(jié)果比較

      TLI培養(yǎng)周期和常規(guī)IVF培養(yǎng)周期的患者的獲卵數(shù)、卵子成熟數(shù)、2PN受精數(shù)、2PN卵裂數(shù)、D2優(yōu)質(zhì)胚胎數(shù)、D3優(yōu)質(zhì)胚胎數(shù)和D3可用胚胎數(shù)比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05),見表2。

      2.2 TLI和常規(guī)培養(yǎng)臨床結(jié)局

      TLI培養(yǎng)周期和常規(guī)IVF培養(yǎng)周期患者的移植數(shù)量、子宮內(nèi)膜厚度、多胎率、流產(chǎn)率、累計(jì)移植次數(shù)比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05),但是兩組新鮮臨床妊娠率比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),見表3。

      3 討論

      Azzarello等[9]通過time-lapse對(duì)159個(gè)移植正常受精胚胎活產(chǎn)嬰兒結(jié)局發(fā)現(xiàn)其原核消失時(shí)間早于20 h 45 min的胚胎沒有活產(chǎn)現(xiàn)象,結(jié)合Lemmen[8]的研究可以推測(cè)活產(chǎn)的胚胎原核消失應(yīng)該在20 h 45 min~25 h,同時(shí)Meseguer等[11]將胚胎卵裂參數(shù)與臨床結(jié)果結(jié)合起來,發(fā)現(xiàn)3個(gè)胚胎著床能力相關(guān)的參數(shù)分別是:(1)分裂到5細(xì)胞的時(shí)間t5在48.8~56.6 h;(2)第二次卵裂的同步性s2在0.76 h以內(nèi);(3)第二個(gè)細(xì)胞周期的持續(xù)時(shí)間,即分裂2細(xì)胞和3細(xì)胞的時(shí)間間隔cc2在11.9 h。因此本研究在TLI培養(yǎng)周期選取的移植胚胎均參考原核消失時(shí)間和第二次卵裂同步性作為標(biāo)準(zhǔn)與常規(guī)IVF培養(yǎng)周期的患者進(jìn)行對(duì)照研究,發(fā)現(xiàn)在移植相同數(shù)目的胚胎情況下,TLI培養(yǎng)周期的新鮮妊娠率顯著高于常規(guī)IVF培養(yǎng)周期(P<0.05),多胎率(35% vs 20.6%)和種植率(40.6% vs 29.5%)雖然TLI培養(yǎng)周期高于常規(guī)培養(yǎng)周期,但是差異不顯著(P>0.05),可能與例數(shù)較少有關(guān),當(dāng)有較多優(yōu)質(zhì)胚胎可選擇時(shí)運(yùn)用TLI技術(shù)結(jié)合胚胎分裂模式挑選胚胎可以提高臨床妊娠率。這與唐永梅等[14]和梁泳娜等[15]研究相反,據(jù)分析可能與入組患者年齡偏大及觀察受精卵數(shù)少,平均移植胚胎數(shù)少(平均移植1.3 個(gè)胚胎或囊胚)有關(guān)。

      另外本研究還發(fā)現(xiàn)TLI培養(yǎng)周期和常規(guī)IVF培養(yǎng)周期的在累計(jì)臨床妊娠的情況下,雖然TLI培養(yǎng)周期的累計(jì)妊娠率高于常規(guī)IVF培養(yǎng)周期,但無顯著性差異(P>0.05),另外累計(jì)移植妊娠的次數(shù)無顯著差異(P>0.05),這也間接說明除了挑選胚胎的重要性以外,還有方案、子宮內(nèi)環(huán)境、人員操作、培養(yǎng)基、患者自身情況等其他因素也會(huì)導(dǎo)致臨床妊娠率的變化。不過針對(duì)預(yù)后性較好的年輕患者,可以通過TLI技術(shù)篩選單個(gè)發(fā)育潛能最佳的胚胎進(jìn)行移植,可以降低單胎率。

      綜上所述,通過時(shí)差成像系統(tǒng)觀察胚胎動(dòng)力學(xué)參數(shù)及卵裂模式等事件判斷胚胎的發(fā)育潛能,為臨床提供最佳優(yōu)質(zhì)胚胎進(jìn)而改善臨床結(jié)局;同時(shí)時(shí)差成像系統(tǒng)從另一個(gè)角度給胚胎學(xué)家提供一個(gè)新的視野,對(duì)未使用時(shí)差成像系統(tǒng)進(jìn)行挑選胚胎時(shí)提供新的思路。

      參考文獻(xiàn)

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      (收稿日期:2019-05-30) (本文編輯:張亮亮)

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