曹清蕓，柏明見，何美琳，侯 芳，梁國威

(航天中心醫(yī)院a.檢驗科；b.病理科,北京 100049)

B族鏈球菌(group BStreptococcus，GBS)又稱無乳鏈球菌(Streptococcusagalactiae)，為革蘭氏陽性球菌。美國疾病預防控制中心報告顯示，孕婦感染GBS后，導致早產、胎膜早破、產褥感染等疾病發(fā)生風險增加[1]，并可引起新生兒敗血癥、肺炎和腦膜炎[2]。部分國家已對孕35～37周的孕婦常規(guī)行GBS篩查，并對GBS陽性的孕婦預防性使用抗生素[3]。妊娠期由于生理激素的改變，陰道微生態(tài)的構成發(fā)生變化，同時陰道前庭腺體和陰道分泌物增加，外陰處于濕潤狀態(tài)利于細菌的生長和繁殖。因此，妊娠期更容易發(fā)生各種陰道感染[4]。Nugent等人在1991年根據(jù)陰道分泌物涂片革蘭氏染色的結果提出了新的診斷標準被稱為診斷細菌性陰道病(bacterial vaginosis，BV)的金標準[5]，目前，Nugent評分已被廣泛應用于臨床診斷BV。BV是由陰道菌群紊亂引起，考慮GBS的陽性率可能會受陰道菌群紊亂影響，因此本研究擬對妊娠末期孕婦GBS感染和Nugent評分[5]進行相關性探討，為孕婦產前檢查提供更多的幫助。

1材料與方法

1.1 研究對象 本研究為回顧性研究，通過我院檢驗科實驗室信息系統(tǒng)(laboratory information system，LIS)進行檢索，時間為2017年10月～2018年8月，檢索策略如下，初始內容為GBS，共檢索出妊娠末期孕婦1 294例，進一步對上述孕婦進行檢索，其中673例孕婦未完善陰道微生態(tài)檢查排除在外，最終納入621例孕婦，平均年齡30.7±4.3歲。

1.2 試劑與儀器 GBS核酸檢測試劑盒來自博爾誠(北京)科技有限公司，檢測儀器為實時熒光定量PCR分析儀(ABI 7500，美國)。Nugent評分用革蘭氏染液(梅里埃公司)及普通光學顯微鏡一臺。所有操作均嚴格按照試劑盒說明書進行。

1.3 方法

1.3.1 標本采集：由我院產科醫(yī)生采集孕婦陰道分泌物標本，共采集兩份陰道分泌物拭子并立即送檢，其中一份做Nugent評分，另一份做GBS核酸檢測，采樣孕婦納入標準：無心血管、肝、腎及免疫系統(tǒng)嚴重疾?。粺o甲狀腺及妊娠并發(fā)糖尿??；取樣前2周內無全身或陰道局部使用抗生素；取樣前24 h未使用過栓劑和洗液。

1.3.2 實時熒光定量PCR：利用TaqMan探針實時PCR技術，針對GBS基因組特異且無高頻SNP位點的序列區(qū)域CAMP因子，設計出特異性引物和探針，配以全封閉PCR體系，檢測標本中的B族鏈球菌DNA。體系中通過加入內參照系統(tǒng)排除PCR反應過程中可能的假陰性結果，并通過加入UNG避免可能的擴增污染物造成的假陽性結果。具體擴增步驟為：①UNG反應50℃ 2 min；②預變性95℃ 5 min；③PCR (95℃15s→60℃35s)45個循環(huán)。

1.3.3 Nugent評分：將陰道分泌物涂片經革蘭染色后，在油鏡下觀察四種優(yōu)勢菌形態(tài)并計數(shù)，即乳酸桿菌、陰道加德納菌、普雷沃菌和動彎桿菌，以半定量評估法對陰道分泌物標本進行評分，標本分值為四種細菌形態(tài)分值之和[5]。正常為0～3分，疑似為4～6分，BV患者為7～10分，見表1。

表1正常人和BV患者陰道分泌物革蘭染色Nugent計分

每個油鏡視野定量菌體數(shù)定量分值乳酸桿菌陰道加德納菌/普雷沃菌動彎桿菌>306～301～5<10012344321022110

1.4 統(tǒng)計學分析 采用SPSS 16.0 軟件進行統(tǒng)計，組間率的比較采用卡方檢驗(χ2)，組間量的比較采用獨立樣本t檢驗，雙側P值<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2結果

2.1 高齡孕婦組與低齡孕婦組GBS陽性率比較 以35歲為界進行分組，分為低齡孕婦組(≤35歲)與高齡孕婦組(>35歲)，其中，低齡孕婦組497例，GBS陽性66例，陽性率為13.30%，高齡孕婦組124例，GBS陽性14例，陽性率11.29%，組間陽性率比較差異無統(tǒng)計學意義(χ2=0.350，P>0.05)。

2.2 GBS陰性組、陽性組Nugent評分 GBS結果陰性組(n=541)與陽性組(n=80)Nugent評分水平分別為4.07±1.11 vs 4.66±1.49，差異有統(tǒng)計學意義(t=-3.380，P<0.001)。

2.3 Nugent評分分組組間GBS陽性率比較 以Nugent評分進行分組，Nugent≤3分為正常組，4分≤Nugent≤6分為疑似組，Nugent≥7分為BV患者組，三組GBS陽性率分別為9.14%(17/186)，11.81%(45/381)和33.33(18/54)。對三組陽性率進行比較，正常組與疑似組間GBS陽性率差異無統(tǒng)計學意義(χ2=0.916，P=0.339)，正常組與BV組GBS陽性率差異有統(tǒng)計學意義(χ2=19.665，P<0.001)，疑似組與BV組GBS陽性率差異有統(tǒng)計學意義(χ2=17.689，P<0.001)。

3討論西方國家在近幾十年對 GBS感染進行了大量研究，現(xiàn)已證實GBS為圍產期感染的主要致病菌之一，占圍產期感染的首位。國內相關文獻報道的妊娠婦女 GBS帶菌率為10.1%～32.4%[6]。時春艷等[7]研究顯示，北京地區(qū)孕婦GBS陰道帶菌率為13%。本研究入組人群亦為北京地區(qū)孕婦，結果顯示在621例孕婦中GBS陽性率為12.88%，與時春艷等研究結果接近。同時本研究顯示GBS感染在高齡組與低齡組孕婦間差異無統(tǒng)計學意義。GBS為革蘭陽性球菌，是健康婦女陰道菌群的常駐菌。妊娠期由于體內雌激素水平升高，利于細菌的滋生和繁殖，引起陰道菌群紊亂，進而誘發(fā)下生殖道細菌感染。將陰道分泌物經革蘭染色后進行Nugent評分是診斷BV的主要方法之一。本研究發(fā)現(xiàn)GBS陽性組的Nugent評分高于GBS陰性組，且差異有統(tǒng)計學意義，同時，以Nugent評分分組后，BV患者組GBS陽性率高于正常組與疑似組。因此，我們考慮妊娠末期孕婦GBS陽性率與Nugent評分有一定相關性，提示當患者處于BV狀態(tài)時，GBS感染的陽性率增高的幾率增大，有一定的提示作用。經過文獻檢索，目前相關研究較少，而本研究的樣本量相對較少，在今后的工作中需進一步擴大樣本量，進一步驗證該結論的可靠性。

綜上所述，GBS感染與陰道微生態(tài)紊亂有一定的相關性，Nugent評分越高，GBS感染率越高，有一定的臨床提示意義。