常世川，朱川，任必勇，黃小平，鄧超，劉良忠

(重慶三峽中心醫(yī)院，重慶404000)

非小細(xì)胞肺癌(NSCLC)是肺癌中最常見的類型，約占肺癌總數(shù)的85%[1]，其早期確診率不高，大部分患者確診時(shí)已進(jìn)展為局部晚期或晚期，錯(cuò)過了最佳手術(shù)時(shí)機(jī)，預(yù)后較差。隨著分子生物學(xué)的不斷發(fā)展，NSCLC被細(xì)分為不同的分子亞型，并由此研發(fā)了各類分子靶向藥物。分子靶向藥物的應(yīng)用能夠明顯改善NSCLC患者預(yù)后，但大部分患者用藥6～12個(gè)月出現(xiàn)獲得性耐藥[2]。因此，尋找NSCLC新的治療靶點(diǎn)具有重要意義。人類20號(hào)染色體，特別是20q13區(qū)域基因擴(kuò)增與乳腺癌、卵巢癌、胃癌等腫瘤發(fā)生、發(fā)展密切相關(guān)[3～6]。1998年，Collins等[7]在人染色體20q13區(qū)域發(fā)現(xiàn)了一個(gè)含260 kb的基因，命名為鋅指基因217(ZNF217)，其表達(dá)產(chǎn)物為ZNF217蛋白。但目前ZNF217蛋白與NSCLC的關(guān)系尚不明確。本研究觀察了NSCLC組織ZNF217蛋白表達(dá)變化，并分析其表達(dá)變化與患者臨床病理特征和預(yù)后的關(guān)系?，F(xiàn)報(bào)告如下。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 選擇2010年1月～2012年1月重慶三峽中心醫(yī)院收治的NSCLC患者85例。所有患者經(jīng)術(shù)后組織病理檢查明確診斷。納入標(biāo)準(zhǔn)：①符合NSCLC診斷，初診；②年齡>18歲；③TNM分期(IASLC第七版)Ⅰ～Ⅲ期；④均行肺癌根治術(shù)，術(shù)前未行任何抗腫瘤治療；⑤ECOG評(píng)分0～2分；⑥臨床病理資料完整。排除標(biāo)準(zhǔn)：①非NSCLC者；②術(shù)前已發(fā)生遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移者；③術(shù)前接受其他抗腫瘤治療者；④術(shù)后殘留病灶者；⑤合并其他腫瘤或心、腦、腎等重要器官嚴(yán)重疾病者；⑥臨床病理資料不完整者。其中，男59例，女26例；年齡≤60歲51例，>60歲34例；有吸煙史53例，無吸煙史32例；ECOG評(píng)分：0分46例，1分33例，2分6例；病理類型：腺癌35例，鱗癌43例，其他7例；T分期：T1期37例，T2期37例，T3期11例；N分期：N0期36例，N1期44例，N2期5例；TNM分期：Ⅰ期20例，Ⅱ期57例，Ⅲ期8例；手術(shù)方式：肺葉切除80例，單側(cè)全肺切除5例。本研究經(jīng)重慶三峽中心醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)批準(zhǔn)，患者或其家屬知情同意。

1.2 ZNF217蛋白表達(dá)檢測(cè) 采用免疫組化法。取手術(shù)切除的NSCLC組織及其配對(duì)的癌旁正常組織(距腫瘤組織邊緣>3 cm)，10%中性甲醛固定，常規(guī)脫水、透明，石蠟包埋，4 μm厚連續(xù)切片。將切片置于80 ℃烤箱30 min，二甲苯脫蠟，梯度乙醇脫水，3%過氧化氫室溫避光孵育10 min，0.01 mol/L枸櫞酸鈉緩沖液加熱抗原修復(fù)，自然冷卻至室溫。10%正常山羊血清封閉30 min，然后加入兔抗人ZNF217抗體(稀釋比1∶800)，4 ℃孵育過夜。次日加入生物素標(biāo)記的山羊抗兔IgG二抗，37 ℃孵育30 min。DAB顯色，蘇木素復(fù)染，梯度乙醇脫水，二甲苯透明，中性樹膠封片。以PBS代替一抗作為陰性對(duì)照，用已知ZNF217蛋白陽性切片作為陽性對(duì)照。所有操作嚴(yán)格按Envision試劑盒說明進(jìn)行。

由兩位病理科醫(yī)師采用雙盲法獨(dú)立閱片。ZNF217蛋白陽性染色定位于細(xì)胞核，呈淡黃色至棕褐色顆粒。每張切片隨機(jī)至少選取5個(gè)400倍視野，評(píng)價(jià)染色強(qiáng)度，計(jì)數(shù)陽性細(xì)胞，計(jì)算陽性細(xì)胞比例。以染色強(qiáng)度評(píng)分和陽性細(xì)胞比例評(píng)分綜合判定ZNF217蛋白陽性表達(dá)。染色強(qiáng)度評(píng)分：無色為0分，淡黃色為1分，棕黃色為2分，棕褐色為3分。陽性細(xì)胞比例評(píng)分：<10%為0分，10%～<25%為1分，25%～<50%為2分，≥50%為3分。兩項(xiàng)評(píng)分乘積≥1為ZNF217蛋白陽性表達(dá)。

1.3 隨訪 所有患者術(shù)后定期隨訪，隨訪方式包括電話、門診、信件等，隨訪截至2017年1月。統(tǒng)計(jì)患者總生存期(OS)。OS是指患者首次診療至因任何原因引起死亡的時(shí)間(失訪患者為最后一次隨訪時(shí)間，研究結(jié)束仍然存活患者為隨訪截至日期)。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS19.0統(tǒng)計(jì)軟件。計(jì)數(shù)資料比較采用χ2檢驗(yàn)。生存分析采用Kaplan-Meier法，生存率比較采用Log-rank檢驗(yàn)。P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 NSCLC組織與癌旁正常組織ZNF217蛋白表達(dá)比較 NSCLC組織與癌旁正常組織ZNF217蛋白陽性表達(dá)率分別為55.3%(47/85)、25.9%(22/85)。NSCLC組織ZNF217蛋白陽性表達(dá)率明顯高于癌旁正常組織(χ2=23.999，P<0.01)。

2.2 NSCLC組織ZNF217蛋白表達(dá)與患者臨床病理特征的關(guān)系 NSCLC組織ZNF217蛋白表達(dá)與腫瘤T分期、N分期和TNM分期有關(guān)(P均<0.05)，與性別、年齡、吸煙史、ECOG評(píng)分、病理類型、手術(shù)方式無關(guān)(P均>0.05)。見表1。

2.3 ZNF217蛋白表達(dá)與NSCLC患者預(yù)后的關(guān)系 所有患者術(shù)后隨訪截至2017年1月，隨訪6～78個(gè)月、中位隨訪時(shí)間50.6個(gè)月。ZNF217蛋白陽性表達(dá)者中位OS為39個(gè)月，ZNF217蛋白陰性表達(dá)者為61個(gè)月。ZNF217蛋白陽性表達(dá)者中位OS明顯低于ZNF217蛋白陰性表達(dá)者(χ2=7.770，P<0.01)。見圖1。

3 討論

NSCLC是現(xiàn)階段全球范圍內(nèi)腫瘤相關(guān)死亡的主要原因之一。隨著分子生物學(xué)的不斷發(fā)展，NSCLC系列致癌驅(qū)動(dòng)基因相繼確定，肺癌分型也由過去單純的組織病理學(xué)分類，進(jìn)一步細(xì)分為基于驅(qū)動(dòng)基因的分子亞型[8]，并由此研發(fā)了各類分子靶向藥物。分子靶向藥物的臨床使用明顯改善了攜帶相應(yīng)驅(qū)動(dòng)基因的NSCLC患者預(yù)后。但大部分患者用藥一段時(shí)間后易出現(xiàn)獲得性耐藥。因此，需要不斷尋找NSCLC新的致癌驅(qū)動(dòng)基因。

表1 NSCLC組織ZNF217蛋白表達(dá)與患者臨床病理特征的關(guān)系(例)

圖1 不同ZNF217蛋白表達(dá)者生存曲線

ZNF217定位于人染色體20q13.2，是新發(fā)現(xiàn)的候選癌基因。有研究證實(shí)，ZNF217與乳腺癌、胃癌、結(jié)直腸癌等腫瘤的發(fā)生、發(fā)展有關(guān)[9]。ZNF217編碼產(chǎn)物為ZNF217蛋白，屬于鋅指蛋白家族成員。研究表明，鋅指蛋白家族成員在多種腫瘤的發(fā)生、發(fā)展過程中具有重要作用。但目前ZNF217蛋白與NSCLC的關(guān)系尚不明確。

季婷婷等[10]研究發(fā)現(xiàn)，胰腺癌組織ZNF217蛋白表達(dá)明顯高于癌旁正常組織，且其高表達(dá)與腫瘤體積、TNM分期、神經(jīng)浸潤、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)。有研究認(rèn)為，ZNF217可能在mRNA轉(zhuǎn)錄層面上抑制E-cadherin表達(dá)，從而促進(jìn)細(xì)胞上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化(EMT)，最終導(dǎo)致腫瘤的發(fā)生、發(fā)展[11，12]。Luo等[13]通過慢病毒介導(dǎo)shRNA來抑制膠質(zhì)瘤細(xì)胞ZNF217表達(dá)，發(fā)現(xiàn)PI3K/AKT信號(hào)通路失活，該信號(hào)通路的下游基因E-cadherin表達(dá)明顯上調(diào)，N-cadherin、c-myc表達(dá)明顯下調(diào)，腫瘤細(xì)胞增殖、侵襲和遷移能力均明顯降低。本研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，NSCLC組織ZNF217蛋白陽性表達(dá)率明顯高于癌旁正常組織，提示ZNF217蛋白可能與NSCLC的發(fā)生、發(fā)展有關(guān)。進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)，ZNF217蛋白表達(dá)與腫瘤T分期、N分期和TNM分期有關(guān)，而與性別、年齡、吸煙史、ECOG評(píng)分、病理類型、手術(shù)方式無關(guān)。提示ZNF217蛋白可能在NSCLC的侵襲和轉(zhuǎn)移過程中發(fā)揮重要作用。

韓亮等[14]研究發(fā)現(xiàn)，ZNF217蛋白低表達(dá)胃癌患者生存時(shí)間明顯長于ZNF217蛋白高表達(dá)胃癌患者。Shida等[15]研究發(fā)現(xiàn)，ZNF217蛋白陰性表達(dá)腫瘤患者無復(fù)發(fā)生存期和總生存期均長于ZNF217蛋白陽性表達(dá)腫瘤患者。Jiang等[16]研究發(fā)現(xiàn)，抑制ZNF217蛋白表達(dá)，可抑制前列腺癌進(jìn)展。Cheng等[17]薈萃分析發(fā)現(xiàn)，ZNF217蛋白可作為預(yù)測(cè)惡性腫瘤患者預(yù)后的指標(biāo)。以上研究表明，ZNF217蛋白可作為預(yù)測(cè)腫瘤患者預(yù)后的指標(biāo)。但其能否用于預(yù)測(cè)NSCLC患者預(yù)后尚不清楚。本研究結(jié)果顯示，ZNF217蛋白陽性表達(dá)NSCLC患者中位OS明顯低于ZNF217蛋白陰性表達(dá)NSCLC患者。說明ZNF217蛋白亦可用于預(yù)測(cè)NSCLC患者預(yù)后。

綜上所述，NSCLC組織ZNF217蛋白表達(dá)明顯升高，其表達(dá)變化與腫瘤進(jìn)展和患者預(yù)后不良有關(guān)。ZNF217有可能成為NSCLC精準(zhǔn)治療的一個(gè)潛在靶點(diǎn)。