胃腺癌組織PELP1表達變化及其與患者臨床病理特征的關系

張祎，陳暢

(宜昌市第一人民醫(yī)院·三峽大學人民醫(yī)院，湖北宜昌443000)

我國是胃癌高發(fā)國家，每年新發(fā)病例占全世界40%以上[1]。根據(jù)組織病理學分類，可將胃癌分為腺癌、鱗癌、腺鱗癌等，其中腺癌約占95%[2]。目前，根治性手術仍是早期胃腺癌的主要治療手段。由于胃腺癌早期癥狀隱匿，大部分胃腺癌患者就診時已屬中晚期，錯過了最佳手術時機，即使可手術切除，短期也易出現(xiàn)復發(fā)。近年隨著分子生物醫(yī)學迅速發(fā)展，分子靶向治療成為中晚期惡性腫瘤的重要治療手段。但目前缺少針對胃腺癌的分子治療靶點。因此，探尋與胃腺癌發(fā)生、發(fā)展相關的分子機制，對其治療和預后具有重要意義。脯氨酸-谷氨酸-亮氨酸富集蛋白1(PELP1)基因定位于人染色體17p13.2，編碼蛋白由1 130個氨基酸殘基組成，相對分子質(zhì)量為160 kD，因其氨基酸鏈中40%以上序列為脯氨酸、谷氨酸或亮氨酸而得名[3,4]。PELP1又被稱為雌激素受體非基因組活性輔助調(diào)節(jié)因子，是一種新發(fā)現(xiàn)的甾體受體(SR)共調(diào)節(jié)分子，被認為是雌激素受體α(ERα)的共調(diào)節(jié)分子。有研究發(fā)現(xiàn)，在ERα陰性的乳腺癌組織中PELP1高表達，其高表達可促進腫瘤的侵襲和轉(zhuǎn)移[3～5]。近年相繼在卵巢癌、結(jié)直腸癌、乳腺癌等組織中發(fā)現(xiàn)PELP1異常表達[6～10]。但鮮見胃腺癌組織PELP1表達的報道。本研究觀察了胃腺癌組織PELP1表達變化，并分析其表達變化與患者臨床病理特征的關系?，F(xiàn)報告如下。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 選擇2015年6月～2018年6月宜昌市第一人民醫(yī)院收治的初診胃腺癌患者80例。所有患者經(jīng)術后組織病理檢查明確診斷，且術前未行任何抗腫瘤治療。其中，男48例、女32例，年齡32～75歲(≤55歲41例、>55歲39例)；血清CEA水平0.14～413.52 μg/L(<5 μg/L 66例，≥5 μg/L 14例)；腫瘤最大徑0.8～7.5 cm(<5 cm 55例、≥5 cm 5例)；組織分化程度：高分化11例，中分化43例，低分化26例；有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者58例，無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者22例。本研究經(jīng)宜昌市第一人民醫(yī)院醫(yī)學倫理委員會批準，患者或其家屬知情同意。

1.2 PELP1表達檢測 采用免疫組化法。取手術切除的胃腺癌組織及其配對的癌旁正常組織(距腫瘤組織邊緣>5 cm)，甲醛固定，常規(guī)脫水、透明，石蠟包埋，5 μm厚連續(xù)切片。切片經(jīng)脫蠟水化、抗原修復、封閉內(nèi)源性過氧化物酶后，分別加入PELP1多克隆抗體、通用型二抗孵育。DAB顯色，蘇木素復染，梯度乙醇脫水，二甲苯透明，中性樹膠封固，顯微鏡下觀察。以PBS代替一抗作為陰性對照，用已知陽性胃腺癌組織切片作為陽性對照。采用雙盲法由兩位病理科醫(yī)師獨立閱片。PELP1陽性染色定位于細胞核，呈棕黃色顆粒狀。每張切片隨機選取3個400倍視野，計數(shù)每視野陽性細胞數(shù)，計算陽性細胞比例，同時評價染色強度。陽性細胞比例評分：無陽性細胞為0分，陽性細胞比例≤33%為1分；陽性細胞比例>33%～66%為2分，陽性細胞比例>66%為3分。染色強度評分：無色為0分，淡黃色為1分，桔黃色為2分，棕黃色為3分。根據(jù)陽性細胞比例評分和染色強度評分綜合判定PELP1表達。二者乘積≤3為低表達、>3為高表達。

1.3 統(tǒng)計學方法 采用GraphPad Prism8.0統(tǒng)計軟件。計數(shù)資料比較采用χ2檢驗。P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié)果

2.1 胃腺癌組織與癌旁正常組織PELP1表達比較 胃腺癌組織PELP1高表達37例(46.25%)、低表達43例(53.75%)，癌旁正常組織PELP1高表達6例(7.50%)、低表達74例(92.50%)。胃腺癌組織PELP1高表達率明顯高于癌旁正常組織(χ2=35.80，P<0.01)。

2.2 胃腺癌組織PELP1表達與患者臨床病理特征的關系 見表1。胃腺癌組織PELP1表達與患者血清CEA水平、腫瘤最大徑及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(P均<0.05)，與患者性別、年齡、組織分化程度無關(P均>0.05)。

表1 胃腺癌組織PELP1表達與患者臨床病理特征的關系(例)

3 討論

胃腺癌是臨床常見的消化系統(tǒng)惡性腫瘤之一，其病因和發(fā)病機制尚不完全清楚。胃腺癌早期行根治性手術，患者預后較好，5年生存率90%以上。但由于胃腺癌早期癥狀不典型，易誤診或漏診，多數(shù)患者就診時已屬中晚期，錯過了最佳手術時機，即使勉強可以手術切除，術后也易出現(xiàn)復發(fā)和轉(zhuǎn)移，預后較差。近年隨著分子生物醫(yī)學迅速發(fā)展，分子靶向治療成為中晚期惡性腫瘤的重要治療手段。但目前缺少針對胃腺癌的分子治療靶點，可選用的靶向藥物有限[2]。因此，探討胃腺癌發(fā)病的分子機制，尋找新的治療靶點十分迫切。

PELP1最初被發(fā)現(xiàn)在ER陽性的乳腺上皮細胞中豐度較高，之后被證實是SR下游信號通路轉(zhuǎn)導過程中的一個調(diào)節(jié)分子[11]。根據(jù)細胞類型和配體表達量差異，PELP1既能促進SR下游信號通路轉(zhuǎn)導，又能抑制SR下游信號通路轉(zhuǎn)導。如在非小細胞肺癌A549細胞中內(nèi)源性糖皮質(zhì)激素受體表達量較高，PELP1可抑制糖皮質(zhì)激素受體介導的信號通路轉(zhuǎn)導；而在內(nèi)源性糖皮質(zhì)激素受體表達量較低的HEK293細胞中，PELP1可增強配體激活糖皮質(zhì)激素受體介導的信號轉(zhuǎn)導[12]。PELP1可與多種SR的轉(zhuǎn)錄共激活分子結(jié)合，如CREB結(jié)合蛋白[13]；還可作為“中間人”，讓不能直接與SR結(jié)合的共調(diào)節(jié)因子與SR形成復合體，如PELP1可促進雄激素受體和FHL家族蛋白2結(jié)合，形成轉(zhuǎn)錄復合體，調(diào)控下游基因表達[14]。PELP1主要表達于細胞核，亦可在細胞質(zhì)中表達。PELP1在細胞質(zhì)中表達時，可促進ER與Src激酶結(jié)合，而PELP1突變則會破壞ER與Src結(jié)合，導致MAPK信號通路紊亂[15]。PELP1在細胞質(zhì)中過表達會造成MAPK和AKT信號通路非激素依賴性激活[14]。此外，PELP1還可募集具有組蛋白修飾作用的蛋白，使染色質(zhì)的性質(zhì)和結(jié)構發(fā)生改變。如PELP1與組蛋白賴氨酸特異性脫甲基酶1(KDM1)或共激活因子相關精氨酸甲基轉(zhuǎn)移酶1(CARM1)結(jié)合，介導KDM1和CARM1對基因啟動子區(qū)域組蛋白H3的表觀遺傳學修飾[16，17]。PELP1在信號轉(zhuǎn)導以及表觀遺傳修飾中的關鍵作用，賦予它可參與調(diào)控細胞增殖、凋亡、遷移等，使其成為一個關鍵的腫瘤相關分子。如：PELP1可通過誘導芳香酶合成，促進雌激素生成，從而促進ER依賴性的乳腺癌細胞增殖[18]；PELP1可介導視網(wǎng)膜母細胞瘤蛋白的Ser807和Ser811磷酸化，使后者激活，從而促進腫瘤細胞增殖[19]；PELP1可調(diào)控p53磷酸化，其缺失會造成p53信號通路失常，導致細胞凋亡功能失常[20]；PELP1還可調(diào)控miRNA表達，其中不乏與腫瘤細胞侵襲和遷移相關的miRNA，如miR-200、miR-141[21]。另外，PELP1還是一些腫瘤相關miRNA的下游靶基因，如miR-497。有研究報道，二甲雙胍可通過上調(diào)miR-497，降低PELP1表達，從而發(fā)揮抗腫瘤作用[22]。但目前鮮見胃腺癌組織PELP1表達的報道。

本研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，胃腺癌組織PELP1高表達率明顯高于癌旁正常組織；胃腺癌組織PELP1表達與患者血清CEA水平、腫瘤最大徑及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關，與患者性別、年齡、組織分化程度無關。提示PELP1高表達可能促進胃腺癌進展。

綜上所述，胃腺癌組織PELP1高表達，其表達變化與腫瘤進展有關。PELP1有可能成為胃腺癌的分子治療靶點。