• 
    

    
    

      99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看

      ?

      過表達(dá)血紅素加氧酶-1對(duì)低氧訓(xùn)練小鼠骨骼肌纖維組成的影響※

      2019-05-08 07:08:50司立寧秦海蘭甘羅曼趙延禮
      關(guān)鍵詞:力竭腓腸肌肌纖維

      司立寧,王 嶸,秦海蘭,崔 浩,甘羅曼,趙延禮*

      (1.青海大學(xué)附屬醫(yī)院,青海 西寧 810001;2.青海大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)研究中心,青海 西寧 810016)

      低氧訓(xùn)練已被廣泛應(yīng)用于各類體育項(xiàng)目,被認(rèn)為是提高有氧耐力成績(jī)的良好輔助練習(xí)方法,目前就其機(jī)制研究主要集中在血液指標(biāo)及最大吸氧量、毛細(xì)血管數(shù)目等方面。本研究主要關(guān)注血紅素加氧酶-1(Heme Oxygenase-1,HO-1)在低氧訓(xùn)練中發(fā)揮的作用及其對(duì)骨骼肌纖維組成的影響。

      1 材料與方法

      1.1 主要試劑和儀器選擇

      SPF級(jí)雄性過表達(dá)HO-1轉(zhuǎn)基因小鼠和野生小鼠購(gòu)自賽業(yè)生物科技公司。Trizol試劑、逆轉(zhuǎn)錄試劑盒、Real-time PCR試劑盒均購(gòu)自Invitrogen公司;Myoglobin和PGC-1α蛋白兔抗多克隆抗體購(gòu)自Abcam公司;山羊抗兔IgG抗體購(gòu)自北京中杉金橋公司。小動(dòng)物跑臺(tái)購(gòu)自泰盟科技有限公司;7500型號(hào)Realtime-PCR儀購(gòu)自ABI公司。

      1.2 動(dòng)物分組及訓(xùn)練

      將SPF級(jí)雄性過表達(dá)HO-1轉(zhuǎn)基因小鼠和野生小鼠飼養(yǎng)8 w后進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。小鼠分為6組(每組15只),即野生小鼠低氧靜息組(C)、野生小鼠低氧訓(xùn)練30d組(C+T30)、野生小鼠低氧訓(xùn)練60d組(C+T60)、過表達(dá)HO-1轉(zhuǎn)基因小鼠低氧靜息組(H)、過表達(dá)HO-1轉(zhuǎn)基因小鼠低氧訓(xùn)練30d組(H+T30)和過表達(dá)HO-1轉(zhuǎn)基因小鼠低氧訓(xùn)練60d組(H+T60)。

      小鼠飼養(yǎng)和訓(xùn)練在青海大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)研究中心(海拔2261m,氧含量16.3%)進(jìn)行。C組和H組小鼠僅做適應(yīng)跑臺(tái)運(yùn)動(dòng)訓(xùn)練,C+T30組、C+T60組、H+T30組和H+T60組小鼠除做適應(yīng)跑臺(tái)運(yùn)動(dòng)訓(xùn)練外,還需做低氧訓(xùn)練(20m/min,坡度5°,60min/d,5d/w,30d和60d)。各組小鼠均于末次訓(xùn)練結(jié)束3 d后予持續(xù)運(yùn)動(dòng)(20m/min,坡度5°),直至小鼠伏地,毛刷、聲、光、電刺激尾部均無效或人為驅(qū)趕都無法使小鼠繼續(xù)運(yùn)動(dòng)視為力竭,記錄力竭運(yùn)動(dòng)時(shí)間,力竭運(yùn)動(dòng)后即刻采用直接頸椎脫臼法處死小鼠,快速分離雙側(cè)腓腸肌。

      1.3 紅肌纖維、白肌纖維面積百分率計(jì)算

      肌纖維切片行ATP酶染色,Ⅱ型肌纖維顯深棕色或黑色,Ⅰ型肌纖維顯淺棕色或不顯色。切片封固后,采用Simple PCI顯微圖像分析儀拍照,每張切片選取5個(gè)獨(dú)立區(qū)域,利用Image pro plus 5.1系統(tǒng)進(jìn)行圖像分析,計(jì)算紅肌纖維和白肌纖維的面積百分率。

      1.4 real time PCR檢測(cè)

      采用Trizol試劑提取各組小鼠腓腸肌組織總RNA。取總RNA 2 μg逆轉(zhuǎn)錄合成第一鏈cDNA。以第一鏈cDNA為模板,以realtime PCR法擴(kuò)增myoglobin,內(nèi)對(duì)照為GAPDH。

      1.5 免疫印跡檢測(cè)

      每20 mg組織加入250 μL 含PMSF的蛋白裂解液,在冰上充分勻漿后離心(4℃,13500r/min,15min),吸取上清液于管中,取少量蛋白樣品測(cè)定濃度,其余蛋白樣中加入上樣緩沖液,于沸水中煮10 min,行十二烷基磺酸鈉/聚丙烯酰胺凝膠電泳后轉(zhuǎn)移至PVDF膜,用5%脫脂牛奶封閉后孵育第1、2抗體后行ECL顯色曝光。

      1.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

      全部實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)采用SPSS13.0數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行處理,結(jié)果用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示。組間比較采用方差分析,多重兩兩比較采用LSD檢驗(yàn),以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

      2 結(jié)果

      2.1 各組小鼠力竭運(yùn)動(dòng)時(shí)間(表1)

      Table 1Exhaustive exercise time of mice in each

      *:與C組比較P<0.05;▲:與H組比較P<0.01;#:與C+T30組比較P<0.05;⊕:與C+T60組比較P<0.01

      與C組相比,C+T30、C+T60組小鼠力竭運(yùn)動(dòng)時(shí)間增加(P<0.05);與H組相比,H+T30、H+T60組小鼠力竭運(yùn)動(dòng)時(shí)間顯著增加(P<0.05),并且與低氧訓(xùn)練野生小鼠相比,過表達(dá)HO-1轉(zhuǎn)基因小鼠低氧訓(xùn)練30 d和60 d后的小鼠力竭運(yùn)動(dòng)時(shí)間顯著增加(P<0.05)。

      2.2 各組小鼠腓腸肌纖維橫斷面積(表2)

      分組n紅肌纖維白肌纖維C15 15.28±3.73 47.33±2.22H15 16.47±1.68 46.19±2.59C+T3011 16.69±1.78 46.37±2.14H+T3012 19.81±3.48▲# 45.25±2.72C+T6011 18.24±2.66? 44.91±3.63H+T609 27.42±2.74▲⊕ 41.38±3.68▲F- 25.36 5.64P- 0.00 0.00

      *:與C組比較P<0.05;▲:與H組比較P<0.01;#:與C+T30組比較P<0.05;⊕:與C+T60組比較P<0.01

      與C組相比,C+T30組小鼠紅肌纖維面積略有增多,C+T60組小鼠紅肌纖維面積顯著增多(P<0.05);與H組相比,H+T30、H+T60組小鼠紅肌纖維面積增多(P<0.01),H+T60組小鼠白肌纖維減少(P<0.01),并且與低氧訓(xùn)練的野生小鼠相比,H+T30、H+T60組小鼠紅肌纖維面積增加更顯著(P<0.05),H+T60組小鼠白肌纖維減少(P<0.01);另外,與H+T30組相比,H+T60組小鼠紅肌纖維面積增加顯著(P<0.01),H+T60組小鼠白肌纖維減少(P<0.01)。

      2.3 各組小鼠腓腸肌中myoglobin的表達(dá)情況(表3和圖1)

      分組nRelative Myoglobin mRNA levelRelative Myoglobin protein levelC15 1.00±0.12 1.00±0.25H15 1.27±0.08 1.16±0.17C+T3011 1.33±0.25? 1.48±0.18?H+T3012 2.64±0.18▲# 2.25±0.24▲#C+T6011 1.77±0.22? 1.18±0.23?H+T609 4.19±0.28▲⊕ 5.14±0.15▲⊕F- 425.04 1222.88P- 0.00 0.00

      *:與C組比較P<0.05;▲:與H組比較P<0.01;#:與C+T30組比較P<0.05;⊕:與C+T60組比較P<0.01

      圖1 各組小鼠腓腸肌中Myoglobin的表達(dá)圖

      與C組相比,C+T30、C+T60組小鼠腓腸肌中myoglobin mRNA的表達(dá)增加;與H組相比,H+T30、H+T60組小鼠腓腸肌中myoglobin mRNA的表達(dá)顯著增加(P<0.05),并且與低氧訓(xùn)練野生小鼠相比,H+T30、H+T60組小鼠腓腸肌中myoglobin mRNA的表達(dá)顯著增加(P<0.05)。Western blot結(jié)果顯示,與C組相比,C+T30組小鼠腓腸肌中myoglobin蛋白的表達(dá)增加(P<0.01);與H組相比,H+T30、H+T60組小鼠腓腸肌中myoglobin蛋白的表達(dá)顯著增加(P<0.01),并且與低氧訓(xùn)練野生小鼠相比,H+T30、H+T60組小鼠腓腸肌中myoglobin蛋白的表達(dá)顯著增加(P<0.05)。

      2.4 各組小鼠腓腸肌中PGC-1α的表達(dá)情況(圖2和表4)

      圖2各組小鼠腓腸肌中PGC-1α的表達(dá)圖

      Figure2The expression of PGC-1α in gastrocnemius muscle of mice in each group

      Table 4The Relative protein expression of PGC-1α in gastrocnemius muscle in each

      *:與C組比較P<0.05;▲:與H組比較P<0.01;#:與C+T30組比較P<0.05;⊕:與C+T60組比較P<0.01

      與C組相比,C+T30、C+T60組小鼠腓腸肌中PGC-1α的表達(dá)均顯著增加(P<0.05);與H組相比,H+T30、H+T60組小鼠PGC-1α的表達(dá)均顯著增加(P<0.05),并且與低氧訓(xùn)練野生小鼠相比,H+T30、H+T60組小鼠腓腸肌中PGC-1α的表達(dá)顯著增加(P<0.05)。

      3 討論

      本研究發(fā)現(xiàn)低氧訓(xùn)練30 d或60 d可延長(zhǎng)野生小鼠力竭運(yùn)動(dòng)時(shí)間,而且低氧訓(xùn)練60 d可引起骨骼肌紅肌纖維增多和myoglobin、PGC-1α的表達(dá)增加;過表達(dá)HO-1能夠進(jìn)一步延長(zhǎng)小鼠力竭運(yùn)動(dòng)時(shí)間,并且低氧訓(xùn)練30 d和60 d都可引起骨骼肌紅肌纖維增多和myoglobin 、PGC-1α的表達(dá)增加。

      低氧訓(xùn)練是在運(yùn)動(dòng)訓(xùn)練周期中持續(xù)或間斷采用低氧條件刺激,利用高原自然低氧環(huán)境或人工模擬低氧對(duì)人體所產(chǎn)生的特殊生物學(xué)效應(yīng),有利于提高運(yùn)動(dòng)中的抗缺氧生理反應(yīng)及適應(yīng)能力,進(jìn)而達(dá)到提高運(yùn)動(dòng)成績(jī)的目的[1]。30多年來的研究證實(shí)低氧訓(xùn)練可通過多種途徑達(dá)到提高運(yùn)動(dòng)耐力的目的[2-4]。常鳳等研究發(fā)現(xiàn)一定范圍內(nèi)高表達(dá)HO-1能夠延長(zhǎng)小鼠力竭運(yùn)動(dòng)時(shí)間,促進(jìn)運(yùn)動(dòng)性疲勞的恢復(fù)[5]。本研究發(fā)現(xiàn),野生小鼠經(jīng)30 d或60 d低氧訓(xùn)練后力竭運(yùn)動(dòng)時(shí)間延長(zhǎng),運(yùn)動(dòng)耐力增加。本研究獲得的另一個(gè)重要發(fā)現(xiàn)是,過表達(dá)HO-1的小鼠經(jīng)30 d或60 d低氧訓(xùn)練后運(yùn)動(dòng)耐力增加更加顯著,提示HO-1在低氧訓(xùn)練中具有延長(zhǎng)小鼠力竭運(yùn)動(dòng)時(shí)間、提高運(yùn)動(dòng)耐力的作用。

      骨骼肌通??煞譃榧t肌纖維(氧化型慢肌)和白肌纖維(糖酵解型快肌)。紅肌纖維富含線粒體,依賴氧化代謝產(chǎn)能,收縮速度慢,不易疲勞,富含myoglobin,呈暗紅色。白肌纖維線粒體數(shù)目較少,依賴糖酵解途徑供能,收縮速度快,易疲勞,呈淡紅色[6]。有關(guān)低氧訓(xùn)練對(duì)骨骼肌肌纖維的影響存在兩種不同的觀點(diǎn),一種觀點(diǎn)認(rèn)為低氧訓(xùn)練可以促進(jìn)骨骼肌紅肌纖維增加;另一種觀點(diǎn)認(rèn)為低氧訓(xùn)練不影響骨骼肌肌纖維類型的轉(zhuǎn)變。Bigard[6]發(fā)現(xiàn)Wistar 鼠在低壓氧艙(5500m)行低氧訓(xùn)練4 w后觀察到紅肌纖維增加[7]。Hoppeler 等發(fā)現(xiàn)運(yùn)動(dòng)員低住高訓(xùn)(3850m)6 w后紅肌纖維富含的myoglobin 蛋白表達(dá)顯著升高[8]。相反,Perhonen對(duì)于Wistar鼠行低氧(2500m)訓(xùn)練后的肌纖維組成無明顯變化[9]。Wistar鼠行低氧(4000m)游泳訓(xùn)練14 w的研究顯示腓腸肌纖維分布不受低氧和訓(xùn)練的影響[10]。我們?cè)谘芯恐邪l(fā)現(xiàn),野生小鼠在低氧訓(xùn)練60 d后腓腸肌中紅肌纖維增多,過表達(dá)HO-1小鼠在低氧訓(xùn)練30 d和60 d時(shí)都引起了紅肌纖維顯著增多,與此同時(shí)都伴有myoglobin的表達(dá)增加,提示HO-1在低氧訓(xùn)練中具有促進(jìn)骨骼肌紅肌纖維增多的作用。由此看出,不同形式的低氧訓(xùn)練、不同的海拔高度、不同的訓(xùn)練時(shí)間以及不同動(dòng)物遺傳背景都會(huì)導(dǎo)致研究結(jié)果的差異,因此對(duì)于低氧訓(xùn)練影響肌纖維組成的結(jié)論有待進(jìn)一步驗(yàn)證。

      PGC-1α是過氧化物酶體增殖物激活受體γ輔激活因子1,在調(diào)節(jié)肌纖維類型的轉(zhuǎn)化和線粒體生物合成中發(fā)揮重要作用。PGC-1α在骨骼肌中的不同表達(dá)水平對(duì)運(yùn)動(dòng)能力產(chǎn)生很大影響。骨骼肌特異過表達(dá)PGC-1α促進(jìn)肌纖維從白肌纖維向紅肌纖維轉(zhuǎn)化[11]。相反,骨骼肌特異性敲除PGC-1α可引起紅肌纖維向白肌纖維轉(zhuǎn)化,并且相對(duì)于野生小鼠,骨骼肌特異性敲除PGC-1α的小鼠力竭運(yùn)動(dòng)時(shí)間縮短,運(yùn)動(dòng)耐力下降[12]。本研究發(fā)現(xiàn),野生小鼠低氧訓(xùn)練30 d后骨骼肌中PGC-1α的表達(dá)顯著增加,并且過表達(dá)HO-1可進(jìn)一步促進(jìn)PGC-1α的表達(dá)增加。該結(jié)果提示HO-1在低氧訓(xùn)練中促進(jìn)紅肌纖維增加可能是通過調(diào)節(jié)PGC-1α的表達(dá)實(shí)現(xiàn)的。

      綜上所述,本研究發(fā)現(xiàn)過表達(dá)HO-1在低氧訓(xùn)練中可顯著提高小鼠運(yùn)動(dòng)耐力,其機(jī)制可能是HO-1通過增加PGC-1α的表達(dá)促進(jìn)骨骼肌紅肌纖維增加實(shí)現(xiàn)的。

      猜你喜歡
      力竭腓腸肌肌纖維
      高頻超聲評(píng)估2型糖尿病患者腓腸肌病變的診斷價(jià)值
      乳腺炎性肌纖維母細(xì)胞瘤影像學(xué)表現(xiàn)1例
      嬰兒顱骨肌纖維瘤/肌纖維瘤病2例
      頂骨炎性肌纖維母細(xì)胞瘤一例
      石氏三色膏治療小腿腓腸肌損傷60例
      中成藥(2018年10期)2018-10-26 03:41:40
      西歸粗多糖對(duì)游泳力竭小鼠的抗運(yùn)動(dòng)性疲勞作用
      中成藥(2018年3期)2018-05-07 13:34:34
      心多大才好
      歲月(2017年7期)2017-07-18 18:52:11
      富硒板黨對(duì)小鼠運(yùn)動(dòng)能力的影響及機(jī)制
      microRNA-139對(duì)小鼠失神經(jīng)肌肉萎縮中肌纖維的影響
      紋狀體A2AR和D2DR對(duì)大鼠力竭運(yùn)動(dòng)過程中蒼白球GABA和Glu釋放的調(diào)控研究
      404 Not Found

      404 Not Found


      nginx
      拉萨市| 黄龙县| 宝坻区| 河池市| 陇南市| 荥阳市| 巴彦淖尔市| 积石山| 宜黄县| 三河市| 垣曲县| 兰溪市| 黑河市| 浦北县| 崇阳县| 广宗县| 象山县| 阳高县| 雷州市| 云阳县| 佛山市| 五华县| 民县| 金寨县| 宁波市| 偃师市| 嘉黎县| 庐江县| 北票市| 唐海县| 山阳县| 济宁市| 延寿县| 玉门市| 永顺县| 通化县| 石景山区| 阿拉善右旗| 汕尾市| 鸡东县| 临夏县|